microelectrode array-based assessment of neuronal networks in mouse spinal cord slices(쥐 척수 절편에서 신경 네트워크에 대한 Microelectrode Array-based Assessment of Neuronal Networks in Mouse Spinal Cord Slices)

aCSF가 포함된 미세 전극 어레이 또는 MEA를 우물로 가져갑니다. 쥐 척수 조각을 우물에 넣고 가중 그물로 고정합니다.

MEA 웰을 기록 시스템에 배치합니다. 현미경으로 MEA 전극과 중간 뉴런이 풍부한 영역인 표재성 후각(SDH) 사이의 최대 접촉을 보장합니다.

조직을 평형화하기 위해 지속적인 aCSF 흐름을 유지합니다.

뉴런은 활동 전위를 통해 통신합니다. 나트륨 이온 유입은 멤브레인을 탈분극시킨 후 칼륨 이온 유출로 재분극을 일으킵니다. 막은 잠시 과분극되어 휴식 전위가 회복될 때까지 새로운 활동 전위를 방지합니다.

MEA 전극에서 자발적인 신경 활동을 기록합니다. 여러 전극에서 동시에 발생하는 신호는 시냅스로 연결된 뉴런의 네트워크를 나타냅니다.

칼륨 채널 억제제를 도입하여 탈분극을 연장하여 네트워크 전반에 걸쳐 활동 전위 주파수와 동기식 리듬 활동을 증가시킵니다.

일치하는 신호를 보여주는 더 많은 전극은 억제제 매개 동기 활동을 나타냅니다.

등뿔 활동 기록을 시작하려면 인공 CSF로 채워진 큰 팁 팁 파스퇴르 피펫을 사용하여 인큐베이터에서 MEA 웰로 슬라이스를 옮기고 인공 CSF를 추가합니다.

가늘고 짧은 머리 붓을 사용하여 60전극 기록 어레이 위에 슬라이스를 배치합니다. 그런 다음 조직 위에 가중치가 있는 그물을 놓아 제자리에 고정하고 MEA 전극과의 양호한 접촉을 촉진합니다.

MEA를 레코딩 헤드 스테이지에 놓습니다. 도립 현미경을 사용하여 전극 위의 조직 위치를 확인하여 가능한 한 많은 전극이 표면 DH 아래에 있는지 확인합니다. 최소 2-6개의 전극이 슬라이스에 닿지 않도록 하십시오.

카메라를 장치에 연결한 후 분석 중에 사용할 MEA를 기준으로 슬라이스의 참조 이미지를 촬영합니다. 그런 다음 레코딩 소프트웨어에서 DAQ 시작을 누르고 모든 전극이 명확한 신호를 수신하는지 확인합니다.

그런 다음 관류 입구 및 출구 라인을 인공 CSF로 채워진 MEA 웰에 연결하고 관류 시스템을 켭니다. 유량을 확인하고 유출이 과분리액의 오버플로를 방지하기에 충분한지 확인하십시오. 5분 동안 조직을 평형화한 후 5분 동안 원시 기준선 데이터를 기록합니다.

관류 입구 라인을 인공 CSF에서 4-아미노피리딘 용액으로 옮기고 4-아미노피리딘 유도 리듬 활동이 정상 상태에 도달할 때까지 12분 동안 기다립니다. 그런 다음 5분간의 4-아미노피리딘 유도 활성을 기록하고 약물을 테스트하거나 4-아미노피리딘의 안정성을 확인하기 위해 후속 기록을 준비합니다.