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신경과학
0 조회수 • 4:42 분 • May 29th, 2025
취된 형질전환 제브라피쉬 유충을 아가로스에 고정하고 마취 용액이 들어 있는 페트리 접시에 넣는 것으로 시작합니다.
상세한 이미징을 위해 두 개의 광자를 사용하는 2 광자 레이저 현미경 아래에 배치하십시오.
뇌의 최상층과 최하층에 집중하여 이미징 경계를 설정합니다.
레이저 치료 전에 뉴런을 관찰하기 위해 다양한 깊이에서 이미지를 캡처합니다.
관심 영역에 초점을 맞추고 프레임 크기를 조정하여 뉴런에 초점을 미세 조정합니다.
2광자 레이저를 사용하여 뉴런을 선택하고 조사합니다.
레이저는 국부적인 열을 유도하여 주변 조직의 손상을 최소화하면서 신경 세포 사멸을 초래합니다. 이미지를 캡처합니다.
치료 전후 이미지를 비교하여 형광 변화를 평가합니다.
뉴런을 더 깊은 평면에 다시 집중시키고 조사를 반복하여 관심 영역의 모든 뉴런을 치료합니다..
이미지를 다시 캡처하고 처리 전 이미지와 비교합니다. 레이저 치료 후 형광 손실은 성공적인 신경 절제를 확인합니다.
아가로스 포매 유충을 2광자 레이저 스캐닝 현미경 아래에 놓고 현미경 시스템을 시작합니다. 이미지 획득 소프트웨어를 열고 레이저 탭에서 켜기 버튼을 클릭하여 레이저를 켭니다. 레이저 상태가 사용 중에서 잠금 모드로 바뀔 때까지 기다립니다.
채널 탭에서 레이저의 파장을 EGFP 절제의 경우 880나노미터, GcAMP 절제의 경우 800나노미터로 설정합니다. 렌즈 리볼버를 수동으로 움직여 20배 대물 렌즈를 선택합니다. 그런 다음 찾기 탭을 클릭합니다. GFP를 클릭하여 광학 경로를 변경하고 눈으로 형광을 직접 봅니다. 제브라피쉬 유충 뇌를 시야의 중앙에 배치합니다. 그런 다음 획득 탭을 클릭하여 2광자 현미경으로 돌아가 레이저 출력과 이득을 설정합니다.
절제 전 조건의 기록으로 Z-Stack을 클릭하여 Z-Stack 옵션을 선택합니다. 그런 다음 유충 뇌의 복부 끝에 초점을 맞춘 후 먼저 설정 버튼을 클릭하여 하한을 설정합니다. 그리고 뇌의 가장 등쪽 표면에 초점을 맞춘 후 마지막으로 설정 버튼을 클릭하여 상한을 설정합니다. 마지막으로 실험 시작 버튼을 클릭하여 Z-Stack 이미지 획득을 실행합니다.
그런 다음 렌즈 리볼버를 수동으로 움직여 63x 대물 렌즈를 선택합니다. 그런 다음 찾기 탭을 클릭하여 낙산화형광 현미경으로 전환합니다. 눈으로 절제할 세포를 중앙에 배치합니다. 그런 다음 획득 탭을 클릭하여 레이저 스캐닝 현미경으로 돌아갑니다.
획득 모드 탭에서 프레임 크기를 256 x 25
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