뇌실막이란 무엇인가요?

뇌실막은 뇌실에 있는 세포 네트워크로, 뇌척수액을 생성하는 역할을 합니다.

샘플 준비에서 고정은 왜 중요한가요?

고정은 세포 구조를 보존하고 후속 처리 단계에서의 분해를 방지합니다.

프로토콜에서 오스뮴 테트라옥사이드는 어떤 역할을 하나요?

오스뮴 테트라옥사이드는 세포막 지질에 결합하여 더 나은 이미징을 위해 막을 안정화합니다.

탈수가 조직 샘플에 어떤 영향을 미치나요?

탈수는 이미징 중에 수분 함량을 제거하여 조직 구조의 왜곡을 방지합니다.

샘플을 백금으로 코팅하는 목적은 무엇인가요?

백금 층은 SEM 중에 전자를 분산시켜 전하 축적을 방지하고 이미징 인공물을 최소화합니다.

Visualization of a Mouse Brain Choroid Plexus Using Scanning Electron Microscopy(주사 전자 현미경을 사용한 마우스 뇌 맥락막 신경총의 시각화)

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:23 min • June 17th, 2025

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표본 바구니에 담긴 쥐의 뇌에서 맥락막 신경총을 가져옵니다.

뇌실 내에 위치한 조직에는 정점 표면에 미세융모가 있는 상피 세포층이 포함되어 있습니다.

세포 구조를 보존하기 위해 고정 용액에서 조직을 배양합니다.

완충액으로 세척하여 과도한 고정액을 제거하고 pH를 안정화시킵니다.

세포막 지질에 결합하는 사산화오스뮴과 함께 조직을 배양하여 막 안정성을 유지한 다음 과도한 시약을 헹굽니다.

이미징 중 조직 왜곡을 방지하기 위해 알코올 농도를 증가시켜 조직을 탈수합니다.

조직을 건조시키고 탄소 코팅된 시편 마운트에 고정한 다음 전도성 백금 층으로 코팅합니다.

주사 전자 현미경을 사용하여 전자빔을 표면에 집중시킵니다. 백금 층은 전자를 소산하여 전하 축적을 방지하고 이미징 아티팩트를 최소화합니다.

검출기는 표면에서 후방 산란된 전자를 포착하여 미세융모가 있는 상피 세포를 나타내는 조직의 이미지를 생성합니다.

SEM을 위한 샘플 준비를 수행하려면 새로 분리된 맥락막 신경총을 새로 만든 고정 용액에 옮기고 섭씨 4도에서 밤새 배양합니다. 완료되면 3-5밀리리터의 0.1몰 카코딜레이트 나트륨 완충액을 사용하여 샘플을 각각 5분 동안 세 번 세척합니다.

샘플을 3-5밀리리터의 2% 사산화오스뮴에 0.1몰 카코딜레이트나트륨 완충액에 30분 동안 정착시킵니다. 그런 다음 3-5밀리리터의 초순수를 사용하여 각각 5분 동안 샘플을 세 번 세척합니다. 다음으로, 에틸 알코올 용액당 15분씩 얼음처럼 차가운 에틸 알코올 농도를 증가시키는 일련의 샘플을 탈수합니다. 임계점 건조기를 사용하여 샘플을 적절하게 건조하십시오. 카본 스티커가 있는 표본 마운트에 샘플을 조심스럽게 배치하고 SEM을 사용하여 맥락총 샘플을 시각화합니다.