투과 전자 현미경을 사용한 마우스 뇌 절편의 초구조 분석

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레진 블록에 내장된 사산화오스뮴 고정 마우스 뇌 절편을 가져 가십시오.

단면 이미지를 얻고 미리 준비된 아틀라스 이미지와 정렬하여 관심 영역을 식별합니다.

블록에 이 영역의 경계를 표시하십시오.

수지를 가열하여 부드럽게 하고 표시된 부분을 절제합니다.

시편을 유리 고정 막대에 붙이고 다듬습니다.

초극소절개기를 사용하여 반박형 및 초박형 절편을 준비합니다.

반박형 및 초박형 섹션을 각각 유리 캐리어와 니켈 그리드에 옮깁니다.

핵산, 리보솜이 풍부한 세포질 및 세포외 기질에 결합하는 염료로 반박 절편을 염색합니다.

절편을 세척하고 광학 현미경으로 검사하여 표적 영역의 존재를 확인합니다.

투과 전자 현미경으로 초박형 절편을 관찰하십시오.

사산화오스뮴은 세포 및 소기관 막의 전자 밀도를 향상시켜 전자 밀도가 낮은 세포질에 대해 높은 대비를 제공하여 세포 미세 구조의 시각화를 가능하게 합니다.

관심 영역을 매핑하려면 이전에 준비된 이미지 아틀라스에서 관심 영역이 포함된 이미지를 선택합니다. 단면화된 이미지에 관심 영역의 경계를 스케치합니다. 현미경 아래에서 이러한 경계를 내장된 시편에 광학적으로 겹치고 1인치 26게이지 바늘을 사용하여 이 영역 경계를 수지 시편에 긁습니다. 그런 다음 수지를 부드럽게 하기 위해 시편을 섭씨 95도로 가열합니다.

그런 다음 오븐에서 따뜻한 수지 표본을 꺼내 면도날을 사용하여 관심 부위를 잘라냅니다. 시편을 적절한 구경의 아크릴 유리 고정 막대에 붙이고 반박형 및 초박형 절편을 위해 장착된 시편을 다듬습니다. 울트라마이크로톰을 사용하여 반박형 0.7마이크로미터 및 초박형 70나노미터 절편을 획득하여 유리 캐리어에 반박형 절편을 수집하고 니켈 그리드에 초박형 절편을 수집합니다.

PBS에서 1% 톨루이딘 블루로 반박 절편을 4분 동안 염색한 후 광학 현미경으로 절편을 검사하기 전에 탈이온수에서 여러 번 세척합니다. 그런 다음 초박형 절편은 추가 수정 없이 180킬로볼트에서 투과 전자 현미경으로 직접 평가할 수 있습니다.

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Last updated: 27 June 2026