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미세아교세포에서 형광 단백질을 발현하는 마취된 형질전환 마우스를 예로 들어보겠습니다. 2광자 현미경 아래에서 전동 스테이지가 있는 정위 프레임에 고정합니다.
두개골에는 해마 각질 암모니스 1 또는 CA1 영역 위의 폐포를 부드럽게 평평하게 하는 유리 바닥 금속 튜브가 장착되어
있어기본 조직에 과도한 압력을 가
하지 않고 명확한 광학 인터페이스를 보장합니다.광 전송을 최적화하기 위해 금속 튜브에 물을 채웁니다.
여기 파장에서 펄스 레이저를 활성화합니다.
뇌 실질의 형광과 금속 튜브의 반사광을 사용하여 CA1 영역의 초점을 조정합니다.
마우스 헤드의 위치를 변경하여 유리 바닥을 이미징 평면과 평행하게 정렬하여 시야 전체에 균일한 초점을 보장합니다.
최적의 해상도를 위해 대물렌즈를 조정하고 CA1 영역에서 생체 내 미세아교세포 역학을 관찰합니다.
다음으로, 형광 미세아교세포가 CA1 무결성을 확인하는 치상회를 이미지화합니다.
2광자 현미경의 대물 렌즈 아래와 전동 XY 스캐닝 스테이지의 헤드 고정 장치에 마우스를 설정합니다. 그런 다음 기포를 만들지 않고 유리 바닥과 대물 렌즈 사이의 공간을 물로 채웁니다. 펄스 레이저에 의한 지속적인 조명 하에서 뇌 실질에서 방출되는 형광과 금속 튜브 가장자리에서 반사된 빛의 안내를 통해 초점을 CA1로 조정합니다.
유리 바닥이 이미징 평면과 평행이 되도록 헤드 고정 장치를 기울여 마우스 헤드의 각도를 조정합니다. 그런 다음 대물렌즈의 보정 칼라를 조정하여 CA1의 대상 구조 깊이에서 가장 높은 해상도를 달성합니다. 다음으로, 유리 바닥에서 500마이크로미터 깊이의 치상회(DG)의 분자층에 있는 형광 세포가 전체 시야에서 이미지화되는지 확인합니다. 수술이 성공한 경우에만 DG 신호를 즉시 감지할 수 있습니다.
미세아교세포가 분열된 형태를 회복했는지 확인하십시오. 그런 다음 CA1의 관심 층에 대해 생체 내 이미징을 수행합니다.
