광 반사율과 Autofluorescence 신호를 사용하여 마우스 후각 망울에서 이미징 냄새 Evoked 활동

이 실험의 전반적인 목표는 마우스를 마취하고 두개골을 노출시킨 후 고유 광학 신호 및 플라보단백질 자가형광 신호 또는 FAS 이미징을 사용하여 마우스의 후각구 표면에서 냄새 유발 활동을 매핑하는 것입니다. 후각구 위의 뼈는 얇아집니다. 메스 칼날의 끝을 사용하여 뼈 피판을 그린 다음 제거하고, 챔버는 치과용 시멘트로 만들어지며 후각구의 노출된 표면을 둘러쌉니다.

그것은 aros로 채워져 있고 이 준비 위에 덮개 유리가 놓여 있습니다. 후각 지도는 고유 광학 신호와 FAS 이미징을 사용하여 동일한 마우스에서 순차적으로 획득되며, 광학 반사 및 자동 형광 신호를 사용하여 마우스 후각구에서 유발된 다른 활동을 이미징하면 후각구의 특수 코팅 코팅과 관련된 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 두 개의 독시 포도당 이미징 또는 FMRI와 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 단일 글래머 목록의 특수 해상도에서 주문 유발 활동을 기록할 수 있다는 것입니다.

일반적으로 이러한 방법을 처음 접하는 개인은 수술 기술과 기구 기술 모두 습득이 느리기 때문에 작업 초기에 어려움을 겪을 것입니다. 이 방법의 시각적 시연은 수술 및 영상 절차의 중요한 단계에 주의를 환기시키는 데 중요합니다. 마우스의 뒷발을 꼬집어 마취를 확인하고 이발기를 사용하여 두피에서 털을 제거합니다.

증류수에 적신 멸균 거즈 패드로 피부에 남아 있는 털을 닦아냅니다. 주둥이가 머리 뒤쪽과 같은 평면에 있도록 입체 프레임에 마우스를 놓습니다. 후각구를 수평으로 배치하려면 귀와 코바를 단단히 고정하여 움직임을 방지하십시오.

이미징 중 건조를 방지하기 위해 눈에 안과 연고를 바르고 멸균 가위를 사용하여 베타딘으로 두피 부위를 소독합니다. 귀 사이 머리 뒤쪽을 절개한 다음 귀 아래쪽을 향해 양쪽을 자르고 눈꺼풀을 따라 이마를 향해 앞쪽 뒤쪽 방향으로 자릅니다. 주둥이의 피부를 잘라 두피 제거를 마칩니다.

노즈 바를 가이드로 사용합니다. 동물을 실체 현미경 아래에 놓고 식염수를 적신 면봉을 사용하여 두개골 상단의 골막을 부드럽게 분리합니다. 한 쌍의 집게를 사용하여 남은 조직을 제거하고 메스로 두개골 표면을 긁어 실험 내내 후각 전구 영역을 촉촉하게 유지하기 위해 깨끗한 준비를 보장합니다.

흡수성 젤라틴 조각, 증류수를 적신 스폰지를 눈 사이에 위치한 후각 전구 위의 뼈에 놓습니다. 젤라틴 스펀지를 제거하고 숫자 10 메스 칼날로 뼈를 부드럽게 긁는 것으로 시작합니다. 칼날과 뼈 사이의 각도를 45도로 일정하게 유지하고 칼날을 눈꺼풀에서 구근 영역의 시상 쪽으로 움직입니다.

얇아지는 과정에서 뼈에 수직으로 압력을 가하거나 정맥동 위의 뼈를 긁지 않도록 주의합니다. 5분마다 멈추고 수분이 있는 젤라틴 스펀지를 뼈에 올려 준비물을 식히십시오. 스펀지로 두개골을 닦아 뼈와 먼지를 제거하고 메스 끝을 주기적으로 닦아 깨끗하게 유지하고 날카롭게 유지합니다.

해면질 같은 뼈층이나 섬유주가 보일 때까지 계속합니다. 후각구의 미세한 혈관 구조가 보이면 뼈를 긁는 것을 멈추고 숫자 11 메스의 끝을 사용하여 직사각형 영역을 그리고 후각구를 닫습니다. 창을 정맥동(venous sinus)의 경계 내에 두면 직사각형 영역 내의 뼈가 계속 긁힙니다.

경막 표면을 만지지 않도록 메스 끝의 깊이에 각별히 주의하십시오. 나머지 뼈의 두께를 파악하려면 집게 파라 끝으로 부드럽게 밀어 넣습니다. 뼈가 압력으로 접히면 다음 단계로 이동합니다.

식염수 한 방울을 넣고 메스 끝을 수평으로 사용하여 뼈 피판을 들어 올립니다. 남은 뼈가 찢어지지 않도록 집게를 사용하여 플랩을 조심스럽게 제거합니다. 후각구 표면이 노출되면 출혈이나 혈관이 없는지 확인합니다. 문합.

식염수에 적신 젤라틴 스펀지로 해당 부위를 닦습니다. 후각구를 촉촉하게 유지하기 위해 29게이지 주사기를 사용하여 폴리아크릴레이트 치과용 시멘트를 바르고 두개골창 주변의 뼈에 우물을 형성합니다. 경막 위에 낮은 융점 한 방울을 놓고 이미징을 위해 두개골 창 위에 멸균 커버 유리를 놓습니다.

두개골 창이 시야 초점의 중앙에 있는 실체 현미경 아래에 입체식 프레임을 배치하여 모세혈관을 view. 580나노미터 녹색 조명으로 전환하고 해부학적 제어 이미지를 캡처하여 이미징 중 준비 상태를 확인합니다. 그런 다음 630나노미터 조명 미만의 고유 광학 신호 이미징 또는 480나노미터 미만의 플라보단백질 자가형광 신호 이미징을 사용하여 자극 시험을 캡처하고, 표준 이미징 세션에는 공기만 전달되는 5-10초의 기준선이 포함되며, 선택한 냄새 농도에 따라 3-10초 동안 냄새 자극이 이어집니다.

마지막으로 기준선 복구를 위해 70-82초의 공기 전달이 기록됩니다. 여기에서는 후각구의 혈관 구조를 두개골 창을 통해 이미지화한 다음, iOS 및 FAS 이미징을 사용하여 캡처한 냄새 물질로 h sinal을 사용하는 자극 시험의 결과를 보여줍니다. iOS 이미징을 사용하여 AL에 의해 활성화된 흡수 영역의 어두운 영역이 흰색 화살표로 표시되는 것처럼 냄새가 유발된 활동을 표시하고, 단일 및 평균 다중 시도 모두에서 활성 영역을 볼 수 있습니다.

동일한 마우스 OD 유발 활동에서 FAS 이미징으로 전환하면 이제 검은색 화살표로 표시된 자가형광 방출의 흰색 영역으로 표시되며, 단일 및 평균 다중 시험에서도 볼 수 있습니다. iOS 이미징을 사용하여 볼 수 있는 흡수의 블랙 영역과 FAS 이미징을 사용하여 볼 수 있는 자가형광 방출의 화이트 영역이 모두 겹칩니다. 이 공간적 일치는 두 기술을 통해 동일한 후각 사구체를 시각화할 수 있음을 확인시켜줍니다: 마스터 이미징 순서가 광학 반사 및 자가형광 신호를 사용하여 유발된 활동을 수술의 경우 1시간, 이미지 획득의 경우 2시간 내에 완료할 수 있습니다.

이러한 광학 이미징 방법을 사용하는 주요 단점은 자유롭게 움직이는 마우스의 후각 지도를 시각화하는 데 적용할 수 없다는 사실입니다. 그리고 생물학적 조직으로의 광자의 제한된 침투로 인해 90년대 후반에 발달한 후 복부 후각 사구체에 접근하지 못하고 후각 시스템의 고유 신호를 기록합니다. 아마도 광학 이미징 분야의 연구자들이 od의 특수 코팅의 특성을 탐구하는 방법 일 것입니다.

후각구에서 플라보단백질 자가형광 이미징은 내인성 광학 신호를 사용하여 OD의 특수 코팅에 대한 새로운 통찰력을 제공하는 유망한 기술입니다.