June 10th, 2012
선충류을 유지하고 증식의 아마 C. elegans 그것으로 일하기 좋은 모델 생물하십시오. 동기화 웜의 가능성이 많은 동물에서 하나의 특정 프로세스의 연구를 용이하게 무엇 동일한 발달 단계에서 주제들을 상당히로 작업이 가능합니다.
이 비디오에서는 첫 번째 레벨 단계에서 C 우아함을 동기화하는 방법을 보여줄 것입니다. 이것은 간단한 방법이지만 매우 일반적이므로 매우 유용합니다. 당신은 아직 초보자입니다.
C 전문가라면 이 프로토콜을 최적화하기 위한 몇 가지 팁이 있을 수 있습니다. 벌레의 동기화의 기초는 알칼리성 차아염소산염 해결책 토끼 성인에 clen 그리고 배아의 관계되는 저항에 달려 있습니다. 내부에 많은 배아를 가진 이 성충은 차아염소산염 용액으로 배양되어 죽고 배아만 남습니다.
동기화의 두 번째 부분은 먹이가 부족하여 배아가 다른 시간에 잡히더라도 L 배아보다 더 멀리 발달하지 않습니다. 블리칭 프로토콜을 시작하는 첫 번째 단계는 알을 낳는 단계에 벌레를 두는 것이고 접시에 여러 개의 알을 흩어놓는 것입니다. M nine을 사용하여 수확하기 위해 성인을 회수하십시오.
또한, 이미 플레이트의 표면을 선도하고 있는 배아는 X-ray 필름 조각과 같은 부드러운 물질로 긁어내고, 여러 번의 M 나인 세척으로 회복된 박테리아를 씻어낼 수 있습니다. 보통 커플이면 충분합니다. 벌레를 씻었으면 선호도에 따라 갓 준비한 표백 용액을 추가할 차례입니다.
튜브를 흔드는 동안 배양 시간을 조절하십시오. 실체 현미경으로 성인의 세대를 모니터링 할 수 있습니다. 지육이 거의 필요하지 않으면 튜브가 완전히 가득 찰 때까지 M nine을 추가하여 반응을 멈춥니다.
프로토콜을 완료하려면 최소 3회 세척을 수행합니다. M nine 알은 M nine buffer에서 밤새 계속 머뭇거리며 부화하지만 벌레의 추가 발달을 방지합니다. 동기화는 15도에서 25도 사이의 모든 온도에서 수행할 수 있지만 15도를 사용하는 것이 좋습니다.
발달이 느리기 때문에 발달 과정에서 언급했듯이 엘레간은 기온에 따라 성체가 되기 전에 4개의 유충 단계를 거칩니다. C 형 elgan은 15도에서 25도 범위의 성장 온도를 견뎌냅니다. 그러나 성장률은 더 높습니다.
여기의 높은 온도는 24 시간 후에 벌레가 있는 단계가 어떻게 다른지 알 수 있습니다. 15도와 25도에서 48시간 후 25도에서 우리는 이미 배아를 관찰합니다. 그러나 판 표면에서 배아를 보려면 80시간 이상을 기다려야 합니다.
최적의 결과를 얻기 위해 15도에서 자란 웜의 경우 블리칭 실험을 수행할 때 몇 가지 문제를 고려해야 합니다. 실험이 수행되기를 원하는 단계인 벌레를 인식하는 것도 중요합니다. 따라서 크기, 차등 간섭, 조영제 현미경 또는 염색에 따라 단계를 구별하는 방법을 보여드리겠습니다.
이 그래프에서 우리가 말했듯이 온도에 따라 GaN 웜의 성장 속도가 25도에서 훨씬 더 빠르게 자라는 것을 알 수 있습니다. 동물의 크기와 바다 요소의 발달 사이에는 상관 관계가 있습니다. 적절한 소프트웨어를 사용하면 동물을 측정한 다음 적절한 발달 상태로 분류할 수 있습니다.
그러나 이 그래프에 따르면, 부위는 발달 단계의 총체적인 지표이다. 바다의 일부, 해부학을 관찰하여 차등 간섭, 조영제 현미경 또는 DPI 염색을 통해 사용하고 인식할 수 있는 보다 합의된 스테이징을 달성할 수 있습니다. 우리 실험실에서는 이 프로토콜을 사용하여 단일 염색, 현장 시각화 및 최대 염색의 마이크로 알로 다른 실험을 위해 웜을 동기화했습니다.
또한 이 프로토콜은 오염을 제거하는 데도 도움이 됩니다. 미분 간섭 대비 또는 nomar 현미경은 대비를 향상시키는 데 사용됩니다. 염색되지 않은 투명한 샘플에서 동물은 2%의 베이스에 산 채로 장착됩니다.아그로스는 미리 준비하고 필요할 때 4도에서 보관할 수 있습니다.
녹여서 65도에서 유지할 수 있습니다. 아그로스가 녹으면 슬라이드에 테이프를 붙이고 세 번째 슬라이드의 양쪽에 놓습니다. 조심스럽게 약간의 아그로스를 잡고 테이프 없이 슬라이드에 한 방울 떨어뜨립니다.
가로로 배치된 다른 슬라이드로 아그로스를 덮습니다. 경로가 단단해지면 두 슬라이드를 조심스럽게 다른 슬라이드에 밀어 분리합니다. 패드가 그 중 하나에 달라붙습니다.
패드에 아마존을 추가하여 벌레를 움직이지 못하게 하십시오. 해부 현미경 아래에서 벌레 몇 마리를 골라 렐레 방울로 옮깁니다. 경로 손상을 방지합니다.
커버 슬라이드를 가져 와서 가장자리에 매니큐어를 바르십시오 이 슬라이드에 커버 슬립을 조심스럽게 놓고 장 형성을 방지합니다. 제제는 현미경으로 즉시 관찰할 수 있습니다. c Elgan 해부학의 가장 쉬운 기능 중 하나는 Alva입니다.
예를 들어, 크리스마스 3 모양의 aava는 L 4 단계의 특징입니다. 개발을 통한 c elgan 해부학에 대한 자세한 정보는 www.orla.org 에서 얻을 수 있습니다. 타피스 염색은 개별 세포를 식별하는 일반적인 절차입니다.
터널에 고정하는 것은 벌레를 수정하는 빠른 방법입니다. 깔끔한 염색을 위해 먼저 M nine 버퍼를 현미경 슬라이드 표면에 한 방울 떨어뜨립니다. 플레이트에서 직접 웜을 골라 M nine의 드롭으로 옮기십시오.
파이프 또는 연조직으로 과도한 M nine을 제거하십시오. 웜에 터널을 추가합니다. 다시 하십시오.
첫 번째 방울이 마르면 준비물을 현미경으로 가져가기 전에 API와 Oversleep으로 장착 매체를 추가합니다. 바둑의 발달은 api가 있는 따뜻한 스텐트에서 쉽게 관찰할 수 있습니다.
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이 비디오는 첫 번째 유충 단계에서 선충 C. elegans를 동기화하는 간단하면서도 효과적인 방법을 보여줍니다. 동기화를 통해 연구자들은 균일한 선충 개체군에서 발달 과정을 연구할 수 있습니다.
Synchronization and precise observation of Caenorhabditis elegans populations enable high-confidence developmental and molecular studies critical for early-stage target validation and mechanistic de-risking. Uniform staging supports reproducible phenotypic screening and quantitative assay development, directly impacting predictive confidence in discovery pipelines. These foundational methods underpin scalable, cross-functional workflows for translational research and preclinical model alignment.
Synchronization and observation of C. elegans integrate at the interface of early discovery, lead identification, and preclinical research, supporting hypothesis-driven experimentation and scalable assay development.