인간의 췌장 Islets위한 염색법 프로토콜

이 절차의 전반적인 목표는 적혈구 및 에오신 염색 및 면역조직화학을 사용하여 인간의 췌장 구멍을 특성화하는 것입니다. 이는 파라핀 블록에 내장된 췌장 샘플에서 연속 절편을 생성하여 수행됩니다. 그런 다음 섹션이 원래 방향으로 슬라이드에 배치됩니다.

슬라이드의 일부는 적혈구와 어인으로 염색되고 나머지 슬라이드는 면역조직화학에 의해 염색되며, 마지막 단계는 염색된 슬라이드를 스캔하여 사례별로 정리하는 것입니다. 궁극적으로 이러한 이미지는 해당 분야의 다른 연구자가 볼 수 있는 온라인 병리학 데이터베이스에 업로드할 수 있습니다. 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 슬라이드가 원래 방향을 유지하면서 직렬로 염색된다는 것입니다.

이 절차를 시연하는 사람은 히스토 기술자인 린다 스나이더(Linda Snyder), 생물학자인 에밀리 몽고메리(Emily Montgomery), 그리고 제 연구실의 실험실 기술자인 티파니 히포(Tiffany Hippo)입니다. 시작하려면 파라핀 마이크로토미에 대한 표준 절차에 따라 수조와 마이크로톰을 설정합니다. 다음으로 양전하를 띤 슬라이드에 케이스 번호, 췌장 부위 및 슬라이드 번호를 표시합니다.

모든 것이 준비되면 파라핀 블록을 왼쪽에 카세트 레이블이 있는 마이크로톰 척에 놓습니다. 일반적인 마이크로토미 절차에 따라 조직이 균일하게 노출될 때까지 블록을 절단합니다. 조직이 고르게 만나면 약 4미크론 두께의 연속적인 절편의 리본을 생성합니다.

필요한 초기 염색 수에 따라 3-6개의 섹션이 필요합니다. 다음으로, 리본 메뉴의 섹션을 구분합니다. 각 섹션을 순서대로 선택하여 슬라이드에 배치합니다.

연필로 섹션 번호를 기록하십시오. 섹션을 사용할 수 없는 경우 해당 번호를 건너뛰고 정확한 순서로 섹션 번호를 계속 매깁니다. 슬라이드 레이블이 왼쪽 방향이 되도록 카세트에 있는 것과 동일한 슬라이드 방향을 유지하도록 주의하십시오.

그런 다음 슬라이드를 슬라이드 랙에 놓고 밤새 말리십시오. 실온에서 파라핀 블록의 표면을 얇은 파라핀 층으로 다시 밀봉하여 조직을 보존하고 실온 또는 섭씨 영하 20도에서 보관합니다. 다음 샘플에 대해 이 절차를 반복합니다.

위에서 h 및 e 염색에 대해 볼 수 있듯이 각 수준에서 일련 섹션에 대한 번호를 유지하는 것이 중요합니다. 각 블록의 첫 번째 슬라이드를 슬라이드 랙에 놓은 다음 랙을 자동 염색기의 첫 번째 트레이에 놓습니다. 표준 HE 프로그램을 선택하고 염색 과정을 시작합니다.

염색이 완료되면 자동 염색기에서 슬라이드를 제거하고 덮개가 미끄러질 수 있도록 후드에 넣습니다. 표준 기술을 사용하여 각 슬라이드에 커버 슬립을 놓습니다. 마지막으로, 슬라이드에 인쇄된 라벨로 라벨을 붙이고 후드에서 완전히 건조되도록 합니다.

자동 염색기를 설정하고 필요한 모든 시약을 준비하는 것으로 시작하십시오. 이중 염색을 위한 Daco 프로그램을 선택하십시오. 슬라이드의 수와 각각이 받게 될 치료를 입력합니다.

제조업체의 권장 사항에 따라 모든 시약을 자동 염색기에 로드합니다. 다음으로, TBST와 시트르산염, 완충액, 항체 및 시술에 필요한 기타 시약을 준비합니다. 슬라이드를 5분 동안 자일렌에 넣어 분리하십시오.

슬라이드가 건조되는 동안 과도한 배경과 모공 얼룩이 생길 수 있으므로 슬라이드가 건조되지 않도록 하십시오. 구연산염 완충액을 찜기에 붓고 사용하기 전에 예열하십시오. 다음으로, 일련의 에탄올 세척에 depa 슬라이드를 제출합니다.

슬라이드를 마지막으로 탈이온수로 한 번 헹굽니다. 예열된 시트르산 버퍼에 슬라이드를 넣고 30분 동안 찐다. 이 기간이 지나면 완전히 식을 때까지 슬라이드를 실온 수조로 즉시 옮기십시오.

냉각되면 슬라이드를 Dayco 자동 염색기 랙으로 옮기고 적절한 순서를 유지하도록 주의하십시오. 마지막으로, 이중 염색 프로그램이 완료되었을 때 이전에 로드된 이중 염색 프로그램을 실행합니다. 자동 염색기에서 슬라이드를 제거하고 탈수하기 전에 최소 1시간 동안 건조시키십시오.

탈수를 계속하려면 1분 동안 80% 에탄올로 옮깁니다. 슬라이드를 95% 에탄올에 담근 다음 100% 엔드로 계속 탈수하십시오. 마지막으로 슬라이드를 자일렌에 1분 동안 담그고 유지합니다.

cyto seal을 사용하여 커버 슬립이 있는 슬라이드를 즉시 장착하여 절차를 완료합니다. 기관 및 블록 번호, 얼룩 유형 및 날짜를 포함한 케이스 정보가 포함된 라벨을 인쇄합니다. 각 슬라이드에 레이블을 부착하여 얼룩 슬라이드를 스캔합니다.

스캐너 트레이에 놓고 표준 절차를 따릅니다. 얼룩 슬라이드는 실온에 보관하고 염색되지 않은 나머지 슬라이드는 나중에 사용할 수 있도록 섭씨 영하 20도에 보관하십시오. 마지막으로, 염색된 이미지를 보이는 기증자 및 조직 유형별로 정리합니다.

다음은 KI 67 plus 인슐린 염색의 예이며, 낮은 배율과 높은 배율 모두에서 염색됩니다. 염색된 췌장 절편의 이미지는 온라인 병리학 데이터베이스에 제출되어 가상 바이오뱅크를 생성합니다. 이 데이터베이스를 사용하여 연구자는 연구 및 제1형 당뇨병에 필요한 정보에 빠르게 액세스할 수 있습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 인간 췌장에서 고품질 슬라이드를 준비하고 염색하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.