분리 및 설치류 대동맥 절제; 심혈관 질환의 연구에 다목적 기술

이 절차의 전반적인 목표는 쥐 대동맥을 완전히, 분리 및 절제하는 것입니다. 이것은 먼저 흉강과 복강을 노출시킴으로써 이루어집니다. 두 번째 단계는 차갑고 멸균된 식염수를 관류하는 것입니다.

다음으로, 흉강과 복강의 장기를 제거하고 심장을 대동맥에 붙인 상태로 만듭니다. 마지막 단계는 대동맥에서 혈관 주위 지방 조직과 출현 조직을 절제하는 것입니다. 궁극적으로 해부 현미경을 사용하여 주변 조직이 모두 제거되었는지 확인하고 대동맥은 다양한 실험 분석에 사용할 수 있습니다.

따라서 이 기술은 동맥류 발병 및 죽상경화성 플라크 형성과 같은 심혈관 연구 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 됩니다. 그래서 여러분은 유전자와 단백질 발현과 같은 분자 생물학의 변화를 살펴봄으로써 그것들을 볼 수 있습니다. 마우스를 안락사시킨 후 발가락 꼬집기로 안락사 상태를 확인합니다.

다음으로, 복부 털을 70% 에탄올로 적셔 피부를 살균합니다. 그런 다음 부속물을 쭉 뻗은 상태로 수술 보드에 마우스를 고정합니다. 집게를 사용하여 xiphoid process보다 바로 아래에 있는 복부 피부를 찾아 분리하여 수술을 시작합니다.

다음으로 피부를 들어 올려 가위로 잘라냅니다. 이것은 복막의 상부와 하흉강을 노출시켜야 합니다. 그런 다음 집게와 가위를 사용하여 xiphoid process를 들어 올리고 늑골하 가장자리를 따라 바로 아래쪽 측면 절개를 만듭니다.

흉강을 절개하려면 횡격막을 통해 들어가며 그 과정에서 심장이나 주요 혈관이 손상되지 않도록 주의하십시오. 이제 두개골은 늑골 아래 가장자리를 따라 측면 절개를 확장합니다. 따라서 흉곽의 앞부분을 제거하십시오.

이러한 절개를 완료하기 위해 전방 흉벽에서 심장을 제거하기 위해 둔기 절개가 필요할 수 있습니다. 이제 거즈를 사용하여 흉강에서 과도한 체액을 제거하여 장기에 더 쉽게 접근할 수 있도록 합니다. 그런 다음 집게와 가위 엽을 사용하여 폐를 제거합니다.

그런 다음 심장과 대동맥이 완전히 노출되고 심장 천자를 통해 혈액을 채취할 수 있도록 쉽게 접근할 수 있어야 합니다. 지금 그렇게 하십시오 심장을 관류하기 위해 관류를 진행하기 전에 10cc 주사기에 10ml의 멸균 얼음처럼 차가운 XPBS를 채웁니다. 그런 다음 25 게이지 바늘을 부착합니다.

좌심실에 바늘을 조심스럽게 삽입합니다. 그런 다음 다음 단계에서 순환계에 과도한 압력이 형성되지 않도록 우심방을 절개합니다. 이제 2-3분에 걸쳐 주사기에서 PBS를 심장으로 천천히 배출합니다.

PBS 배출 중에는 멸균 거즈를 사용하여 절개 부위의 심방에서 쏟아져 나오는 액체를 흡수합니다. PERFUSE 8이 모두 배출되면 흉강을 깨끗하게 볼 수 없도록 거즈로 남아 있는 액체를 모두 흡수합니다. GI 내용물을 노출시키려면 복벽을 통해 조금씩 잘라내고 절개 부위를 치골 상부까지 확장합니다.

일단 하지를 향해 양측으로 절단하여 피부 피판을 만들고 핀으로 고정하거나 절제할 수 있습니다. 계속 진행하면 여러 장기, 즉 간의 엽, 췌장, 비장, 장 및 하부 식도를 제거합니다. 이렇게 하면 대동맥을 볼 수 있습니다.

이 부위에는 대동맥에서 신장 동맥까지 표재성 가지가 있으므로 perren 부위를 해부하는 동안 특히 주의하십시오. GI의 박테리아가 다른 조직을 오염시킬 수 있기 때문에 정확하고 조심스럽게 해부하고, 하나의 XPBS로 깨끗한 부위를 헹구고 거즈로 과도한 용액을 흡수하면 대동맥에 쉽게 접근할 수 있습니다. 따라서 가위와 집게를 사용하여 대동맥과 척추를 분리하십시오.

둔기 해부가 적절하며 해부 현미경을 사용하는 것이 좋습니다. 대동맥은 대동맥을 제거할 수 있으며, 처음에는 coddly 또는 cran으로 시작할 수 있습니다. 중요한 것은 조직을 청소하고 분리하는 질서 정연한 식물 과정입니다.

혈관 주위 지방 조직을 절제 할 때는 대동맥 벽이 손상되지 않도록 미세한 마이크로 가위를 사용하여 제거하십시오. 이것은 대동맥 평활근 세포를 배양할 때 섬유아세포 오염의 가능성을 최소화합니다. 혈관 주위 조직, 지방 조직 및 외막을 조심스럽게 절제하는 것이 매우 중요합니다.

남은 조직은 세포 배양에 오염을 일으킬 수 있을 뿐만 아니라 분자 분석에 편향을 일으킬 수도 있습니다. 이 절차를 사용하면 심장에서 시작된 온전한 대동맥이 흉강과 복강으로 내려갑니다. 여전히 부착된 신장 동맥을 얻은 상태에서 대동맥을 현장에서 이미지화하여 형태 변화를 정량화할 수 있으며, 이는 복부 대동맥류 연구에서 진단할 수 있습니다.

그 후, 대동맥을 제거, 고정 및 염색하여 hemat, toin 및 eoin 염색과 같은 조직학적 변화를 살펴보거나 ver Hoff Van Geen 염색을 통해 엘라스틴 밴드를 보고 대동맥의 구조적 무결성을 볼 수 있습니다. 대동맥 세포는 또한 일차 세포 분리 및 생존력 연구 및 단백질 국소화와 같은 체외 연구에도 사용할 수 있습니다. 절차에 따라 단백질 및 RNA 분리와 같은 다른 기술을 사용하여 단백질 발현, 효소 활성 및 유전자 발현을 볼 수 있습니다.