Name: 미세 유체 공동 문화 장치를 사용하여 치아 세균 신경 분포를 개발 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: 배우세요 미세 유체 공동 문화 장치를 사용하여 마우스 삼차 신경절과 치아 배아를 분리하고 공동 배양하는 방법을. 이 기술은 신경 분포 패턴을 시각화하고 발달 생물학에서 신경-표적 상호작용을 연구하는 데 도움을 줍니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 연구는 취리히 대학의 자금 지원을 받았습니다. 저자는 공동 문화 조건을 확립하는 데 도움을 준 Estrela Neto와 Meriem Lamghari 박사에게 감사를 표하고 싶습니다.

모든 마우스는 스위스의 동물 복지법에와 칸톤 수의학 사무실, 취리히의 규정에 따라 유지 관리 및 처리되었다. 해부 소재, 문화 미디어, 미세 유체 장치 1. 준비 <ol><li> 오토 클레이브 마이크로 해부 집게와 가위 (121 ° C, 살균 시간 : 20 분) 및 멸균 용기에 보관. </li><li> 37 ° C에서 진탕 기에서 24 시간 동안 1 M 염산으로 이들을 배양하여 커버 글라스 (24mm X 24mm)을 소독. 에탄올 99 %와 멸균 증류수로 2 O 3 배를 세 번 씻으십시오. 건조 후 37 ℃에서 또는 멸균 흐름 후드 된 커버. 마지막으로, 오토 클레이브 또는 살균을 완료하기 위해 자외선 (30 분)로 된 커버를 노출. 커버 슬립 후 70 % 에탄올에 저장 될 수있다. </li><li> 멸균 집게를 사용하여 조심스럽게 패키지에서 축 축삭 격리 장치를 제거하고 멸균 페트리 접시에 배치합니다. </리&gt; <li> 멸균 생검 펀치 사용 (O : 1mm은) 문화 챔버의 대응 샘플 당 하나의 구멍을 배양 할 (그림 1)를 작성합니다. 참고 : 그들은 가해지는 압력에 의해 손상 될 수 있습니다로, 마이크로 그루브에 너무 가까이 펀치하지 마십시오. </li><li> 에탄올 70 %에이를 immerging에 의해 축 축삭 격리 장치를 소독. 완전히 멸균 흐름 후드 아래에 드라이 후 축 축삭 격리 장치 및 커버 슬립. 진행하기 전에 3 시간의 최소를 기다립니다. 참고 : 완전 건조는 미세 유체 장치의 결함 조립 발생합니다. </li><li> 6 웰 플레이트에서 35mm 페트리 접시로 또는 우물에 각 coverslip에 배치합니다. </li><li> 분리 장치와 유리 커버 슬립 사이의 완전한 접착력을 허용하기 위해 구부러진 끝 핀셋으로 조심스럽게 단단히 coverslip에 키를 누릅니다에 축 축삭 격리 장치를 놓습니다. </li><li> 각 배양 챔버 내에, 피펫 폴리 D 라이신 150 μL (멸균 된 0.1 ㎎ / ㎖는, H 2 증류수O). 배양 챔버로부터 모든 공기를 제거하기 위하여 5 분 동안 진공 하에서 미세 유동 장치를 놓는다. </li><li> 공기는 여전히 챔버 재 피펫 내의 챔버로 폴리 D 라이신 용액을 알 수있는 경우. </li><li> 37 ° C에서 폴리 D 리신 O / N을 갖는 장치를 부화. </li><li> 멸균 증류수 H 2 O와 챔버를 세 시간을 씻으십시오 </li><li> 150 (PBS에서 시그마 - 알드리치, 5 μg의 / ㎖, 또는 무 혈청 배지) μL 라미닌 작업 솔루션으로 챔버를 입력하고 37 ℃에서 O / N을 품어. </li><li> 다음으로 이루어지는, 삼차 신경절 배양 37 배지 50 ㎖를 준비한다 : 48 ml의 배지로 Neurobasal 배지 1 mL의 B-27 / ㎖ 페니실린 / 스트렙토 마이신, 2 mM L- 글루타민, 5 NG / ㎖ 신경 성장 인자 (100) U (NGF) 0.25 오후 시토신 아라 비노 시드. </li><li> 40 ㎖의 DMEM-F12, 10 mL의 소 태아 혈청 (FBS, 최종 농도 : 20 %)은 다음과 같이 이루어지는 치아 세균 배양 37 배지 50 ㎖를 준비, 100 U / ml의 페니실린 / 스트렙토 마이신, 2 mM L- 글루타민, 150 μg의 / ㎖ 아스코르브 산. </li></ol> 2. 마우스 배아 생성 및 해부 <ol><li> (질 플러그 : 개발 0.5, E0.5의 배아 일) 질 플러그에 따라 배아 나이를 결정하고 형태 학적 기준을 통해 그것을 확인합니다. 이 프로토콜을 위해, 우리는 일반적으로 E14.5-E17.5 마우스 배아를 사용합니다. </li><li> 해부 영역과 에탄올 70 %와 입체경을 청소합니다. </li><li> 자궁 경부 전위를 통해 임신 어머니를 희생. 그리드에 제 1 및 제 2 손가락으로 마우스의 목을 차단하고, 결정 꼬리를 잡아 당깁니다. </li><li> 낮은 복부 주위 피부를 해부하고, 가위를 사용하여 복부를 엽니 다. 자궁을 찾습니다 임신의 늦은 단계에서, 자궁이 풍부 복강을 입력합니다. </li><li> 얼음에 PBS로 채워진 튜브에 자궁과 장소를 해부하다. 때 얼음에, 조직은 여러 시간 동안 남아있을 수 있습니다. 제도적 지침에 따라 어머니의 시체를 버리고 </li> &lt;리&gt; 자궁에서 배아를 해부하고 자신의 배외 (extraembryonic) 조직에서 그들을 무료로 제공됩니다. 얼음에 PBS에서 배아를 놓습니다. </li><li> 가위를 이용하여 배아 목을 벨, 마이크로 해부 가위 (도 2A)를 사용하여 헤드의 나머지 아래턱을 분리한다. 삼차 신경에 손상을주지 않고, 정확하게 아래턱을 제거; 후자는 아래턱에 근접 지역화 같이 그들의 사고 손상이 가능하다. 얼음에 아래턱과 차가운 PBS의 머리의 나머지 부분을 보존합니다. </li><li> TG를 해부하기 위해 머리를 가지고 이전에 차가운 PBS로 가득 해부 유리 페트리 접시, 위에 놓습니다. 집게를 사용하여 피부와 두개골을 제거합니다. 다음 telencephalon 및 telencephalon 및 리프트 아래 집게를 배치하여 소뇌를 제거; telencephalon 및 소뇌 노출 두개골의 바닥을두고 함께 플립 것이다. </li><li> (도 2b에 도시) 삼차 신경절 지역화. 집게를 사용하여삼차 신경에서 TG를 분리합니다. 칼으로 해부 바늘을 사용하여 삼차 돌기의 잔해를 제거합니다. 차가운 PBS로 가득 페트리 접시에 해부 TG를 놓고 얼음에 보관하십시오. </li><li> 차가운 PBS로 가득 이전 해부 유리 페트리 접시에, 두개골에서 분리 아래턱을, 배치, 배아 치아를 해부합니다. 칼 같이 해부 바늘을 사용하여, 혀와 턱 주변의 피부를 제거한다. 턱의 중심선을 따라 절단하여 좌우 헤미 턱 별개. 도 1c에 도시 한 바와 같이 치아 세균은 쉽게 볼 수있다. 해부 바늘을 사용하여 치아의 세균을 분리하고 비 치아 조직의 초과를 제거합니다. 차가운 PBS로 가득 페트리 접시에 해부 치아 세균을 놓고 얼음에 보관하십시오. </li></ol> 3. 미세 유체 공동 문화 <ol><li> 절개 후 미세 유체 장치에서 라미닌를 제거합니다. respecti 200 μL와 챔버를 채우미디어를했습니다. </li><li> 집게로 (그림 1D)를 펀칭에 의해 생성 된 구멍에 ​​조심스럽게 해부 TG 치아 세균을 전송합니다. 치아의 세균이 떠 있지 않은지 확인하고이 된 커버에 닿을 때까지 그들은 침몰있다. </li><li> 배양 37 ° C의 배양기에서 샘플, 5 % CO 2. </li><li> 문화 매체마다 48 시간을 변경합니다. 완전히 챔버를 버리지 말 것, 그리고 문화 실에 직접 피펫하지 않습니다. 챔버 내의 기포의 형성을 초래 챔버 전체 비우는; 챔버에 직접 피펫은 축삭 손상을 초래할 것입니다. 우물의 외부 쪽을 향해 피펫을 가리키는 매체를 제거, 이러한 문제를 방지하려면; 마찬가지로, 챔버에 대향 위치한 웰의 측면에 새로운 배지를 피펫. </li><li> 배양 기간 동안 공동 배양을 용이하게 시간 경과 현미경으로 묘화 될 수있다. 공동 배양은 10 일 이상 동안 유지 될 수있다. </li><li> 문화 perio 후D는 실 당 하나의 우물에 PBS 150 μl를 피펫 팅하고, PBS를 실을 통해 세 번 흐를 수 있도록함으로써 실을 씻는다. </li><li> PBS를 제거하고 챔버 당 하나의 잘 파라 포름 알데히드의 150 μL (PBS)에 4 %를 피펫 팅하여 샘플을 수정; 실온에서 15 분 동안 품어. </li><li> 3.6에 기술 된 바와 같이 PBS로 두 번 챔버를 씻으십시오. </li><li> 추가 분석을 진행합니다. </li></ol>

<ol><li>Pagella, P., Jiménez-Rojo, L., Mitsiadis, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+innervation+in+developing+and+regenerating+orofacial+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+molecular+life+sciences+%3A+CMLS%22%5BJournal%5D)">Roles of innervation in developing and regenerating orofacial tissues.</a> Cellular and molecular life sciences : CMLS. 71, 2241-2251 (2014).</li>
<li>Kumar, A., Brockes, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+dependence+in+tissue%2C+organ%2C+and+appendage+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Nerve dependence in tissue, organ, and appendage regeneration.</a> Trends in neurosciences. 35 (11), 691-699 (2012).</li>
<li>Brownell, I., Guevara, E., Bai, C. B., Loomis, C. A., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve-derived+sonic+hedgehog+defines+a+niche+for+hair+follicle+stem+cells+capable+of+becoming+epidermal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+stem+cell%22%5BJournal%5D)">Nerve-derived sonic hedgehog defines a niche for hair follicle stem cells capable of becoming epidermal stem cells.</a> Cell stem cell. 8 (5), 552-565 (2011).</li>
<li>Katayama, Y., Battista, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signals+from+the+sympathetic+nervous+system+regulate+hematopoietic+stem+cell+egress+from+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Signals from the sympathetic nervous system regulate hematopoietic stem cell egress from bone marrow.</a> Cell. 124 (2), 407-421 (2006).</li>
<li>Fitch, S. R., Kimber, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+from+the+sympathetic+nervous+system+regulates+hematopoietic+stem+cell+emergence+during+embryogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+stem+cell%22%5BJournal%5D)">Signaling from the sympathetic nervous system regulates hematopoietic stem cell emergence during embryogenesis.</a> Cell stem cell. 11 (4), 554-566 (2012).</li>
<li>Knox, S. M., Lombaert, I. M. a, Reed, X., Vitale-Cross, L., Gutkind, J. S., Hoffman, M. P. Parasympathetic innervation maintains epithelial progenitor cells during salivary organogenesis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKnox%2C+SM+%22Science%28New+York%2C+N.Y.%29%22">Science(New York, N.Y.)</a>. 329 (5999), 1645-1647 (2010).</li>
<li>Knox, S. M., Lombaert, I. M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parasympathetic+stimulation+improves+epithelial+organ+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+communications%22%5BJournal%5D)">Parasympathetic stimulation improves epithelial organ regeneration.</a> Nature communications. 4, 1494(2013).</li>
<li>Oakley, B., Witt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Building+sensory+receptors+on+the+tongue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurocytology%22%5BJournal%5D)">Building sensory receptors on the tongue.</a> Journal of neurocytology. 33 (6), 631-646 (2004).</li>
<li>Oakley, B., Brandemihl, A., Cooper, D., Lau, D., Lawton, A., Zhang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+morphogenesis+of+mouse+vallate+gustatory+epithelium+and+taste+buds+requires+BDNF-dependent+taste+neurons.+Brain+research%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+brain+research%22%5BJournal%5D)">The morphogenesis of mouse vallate gustatory epithelium and taste buds requires BDNF-dependent taste neurons. Brain research.</a> Developmental brain research. 105 (1), 85-96 (1998).</li>
<li>Sun, H., Oakley, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+anterior+gustatory+epithelia+in+the+palate+and+tongue+requires+epidermal+growth+factor+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Development of anterior gustatory epithelia in the palate and tongue requires epidermal growth factor receptor.</a> Developmental biology. 242 (1), 31-43 (2002).</li>
<li>Mistretta, C. M., Goosens, K. a, Farinas, I., Reichardt, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+size%2C+number%2C+and+morphology+of+gustatory+papillae+and+taste+buds+in+BDNF+null+mutant+mice+demonstrate+neural+dependence+of+developing+taste+organs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+comparative+neurology%22%5BJournal%5D)">Alterations in size, number, and morphology of gustatory papillae and taste buds in BDNF null mutant mice demonstrate neural dependence of developing taste organs.</a> The Journal of comparative neurology. 409 (1), 13-24 (1999).</li>
<li>Mitsiadis, T. a, Graf, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+fate+determination+during+tooth+development+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+defects+research.+Part+C%2C+Embryo+today+reviews%22%5BJournal%5D)">Cell fate determination during tooth development and regeneration.</a> Birth defects research. Part C, Embryo today reviews. 87 (3), 199-211 (2009).</li>
<li>Mohamed, S. S., Atkinson, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+histological+study+of+the+innervation+of+developing+mouse+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+anatomy%22%5BJournal%5D)">A histological study of the innervation of developing mouse teeth.</a> Journal of anatomy. 136 (Pt 4), 735-749 (1983).</li>
<li>Luukko, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+localization+of+nerve+fibres+during+development+of+embryonic+rat+molar+using+peripherin+and+protein+gene+product+9.5+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+oral+biology%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical localization of nerve fibres during development of embryonic rat molar using peripherin and protein gene product 9.5 antibodies.</a> Archives of oral biology. 42 (3), 189-195 (1997).</li>
<li>Johnsen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innervation+of+teeth%3A+qualitative%2C+quantitative%2C+and+developmental+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+dental+research%22%5BJournal%5D)">Innervation of teeth: qualitative, quantitative, and developmental assessment.</a> Journal of dental research. 64, 555-563 (1985).</li>
<li>Mitsiadis, T. a, Dicou, E., Joffre, A., Magloire, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+localization+of+nerve+growth+factor+%28NGF%29+and+NGF+receptor+%28NGF-R%29+in+the+developing+first+molar+tooth+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%3B+research+in+biological+diversity%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical localization of nerve growth factor (NGF) and NGF receptor (NGF-R) in the developing first molar tooth of the rat.</a> Differentiation; research in biological diversity. 49 (1), 47-61 (1992).</li>
<li>Mitsiadis, T. a, Luukko, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophins+in+odontogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Neurotrophins in odontogenesis.</a> The International journal of developmental biology. 39 (1), 0214-6282 (1995).</li>
<li>Moe, K., Sijaona, A., Shrestha, A., Kettunen, P., Taniguchi, M., Luukko, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semaphorin+3A+controls+timing+and+patterning+of+the+dental+pulp+innervation%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%3B+research+in+biological+diversity%22%5BJournal%5D)">Semaphorin 3A controls timing and patterning of the dental pulp innervation.</a> Differentiation; research in biological diversity. 84 (5), 371-379 (2012).</li>
<li>Kettunen, P., Løes, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordination+of+trigeminal+axon+navigation+and+patterning+with+tooth+organ+formation%3A+epithelial-mesenchymal+interactions+and+epithelial+Wnt4+and+Tgfbeta1+regulate+semaphorin+3a+expression+in+the+dental+mesenchyme%5BTitle%5D)+AND+%22Development+%28Cambridge%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">Coordination of trigeminal axon navigation and patterning with tooth organ formation: epithelial-mesenchymal interactions and epithelial Wnt4 and Tgfbeta1 regulate semaphorin 3a expression in the dental mesenchyme.</a> Development (Cambridge, England). 132 (2), 323-334 (2005).</li>
<li>Tuisku, F., Hildebrand, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+a+neural+influence+on+tooth+germ+generation+in+a+polyphyodont+species%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Evidence for a neural influence on tooth germ generation in a polyphyodont species.</a> Developmental biology. 165, 1-9 (1994).</li>
<li>Zhao, H., Feng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretion+of+shh+by+a+neurovascular+bundle+niche+supports+mesenchymal+stem+cell+homeostasis+in+the+adult+mouse+incisor%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+stem+cell%22%5BJournal%5D)">Secretion of shh by a neurovascular bundle niche supports mesenchymal stem cell homeostasis in the adult mouse incisor.</a> Cell stem cell. 14 (2), 160-173 (2014).</li>
<li>Kettunen, P., Kvinnsland, H., Luukko, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+rudimentary+diastema+tooth+primordia+are+devoid+of+peripheral+nerve+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomy+and+embryology%22%5BJournal%5D)">Mouse rudimentary diastema tooth primordia are devoid of peripheral nerve fibers.</a> Anatomy and embryology. 205 (3), 187-191 (2002).</li>
<li>Lumsend, A., Buchanan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+study+of+timing+and+topography+of+early+tooth+development+in+the+mouse+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+oral+biology%22%5BJournal%5D)">An experimental study of timing and topography of early tooth development in the mouse embryo.</a> Archives of oral biology. , 301-311 (1986).</li>
<li>Kollar, E., Lumsend, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tooth+morphogenesis%3A+the+role+of+the+innervation+during+induction+and+pattern+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+de+Biologia+Buccale%22%5BJournal%5D)">Tooth morphogenesis: the role of the innervation during induction and pattern formation.</a> Journal de Biologia Buccale. 7 (1), 49-60 (1979).</li>
<li>Luukko, K., Kettunen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordination+of+tooth+morphogenesis+and+neuronal+development+through+tissue+interactions%3A+lessons+from+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+cell+research%22%5BJournal%5D)">Coordination of tooth morphogenesis and neuronal development through tissue interactions: lessons from mouse models.</a> Experimental cell research. 325 (2), 72-77 (2014).</li>
<li>Lillesaar, C., Eriksson, C., Johansson, C. S., Fried, K., Hildebrand, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tooth+pulp+tissue+promotes+neurite+outgrowth+from+rat+trigeminal+ganglia+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurocytology%22%5BJournal%5D)">Tooth pulp tissue promotes neurite outgrowth from rat trigeminal ganglia in vitro.</a> Journal of neurocytology. 28 (8), 663-670 (1999).</li>
<li>Lumsend, A., Davies, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotropic+effect+of+specific+target+epithelium+in+the+developing+mammalian+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chemotropic effect of specific target epithelium in the developing mammalian nervous system.</a> Nature. 323 (9), 538-539 (1986).</li>
<li>Lillesaar, C., Fried, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurites+from+trigeminal+ganglion+explants+grown+in+vitro+are+repelled+or+attracted+by+tooth-related+tissues+depending+on+developmental+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neurites from trigeminal ganglion explants grown in vitro are repelled or attracted by tooth-related tissues depending on developmental stage.</a> Neuroscience. 125 (1), 149-161 (2004).</li>
<li>Lillesaar, C., Eriksson, C., Fried, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+tooth+pulp+cells+elicit+neurite+growth+from+trigeminal+neurones+and+express+mRNAs+for+neurotrophic+factors+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Rat tooth pulp cells elicit neurite growth from trigeminal neurones and express mRNAs for neurotrophic factors in vitro.</a> Neuroscience letters. 308 (3), 161-164 (2001).</li>
<li>Petrinovic, M. M., Duncan, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+Nogo-A+regulates+neurite+fasciculation%2C+branching+and+extension+in+the+developing+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Development%28Cambridge%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">Neuronal Nogo-A regulates neurite fasciculation, branching and extension in the developing nervous system.</a> Development(Cambridge, England). 137 (15), 2539-2550 (2010).</li>
<li>Otsu, K., Fujiwara, N., Harada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odontogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Odontogenesis.</a> Methods in Molecular Biology. 887, (2012).</li>
<li>Mitsiadis, T. a, Drouin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+the+Pitx1+genomic+locus+affects+mandibular+tooth+morphogenesis+and+expression+of+the+Barx1+and+Tbx1+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+biology%22%5BJournal%5D)">Deletion of the Pitx1 genomic locus affects mandibular tooth morphogenesis and expression of the Barx1 and Tbx1 genes.</a> Developmental biology. 313 (2), 887-896 (2008).</li>
<li>Park, J. W., Vahidi, B., Taylor, A. M., Rhee, S. W., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+culture+platform+for+neuroscience+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+protocols%22%5BJournal%5D)">Microfluidic culture platform for neuroscience research.</a> Nature protocols. 1 (4), 2128-2136 (2006).</li>
<li>Hosmane, S., Tegenge, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toll%2Finterleukin-1+receptor+domain-containing+adapter+inducing+interferon-%CE%B2+mediates+microglial+phagocytosis+of+degenerating+axons%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+neuroscience+the+official+journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Toll/interleukin-1 receptor domain-containing adapter inducing interferon-β mediates microglial phagocytosis of degenerating axons.</a> The Journal of neuroscience the official journal of the Society for Neuroscience. 32 (22), 7745-7757 (2012).</li>
<li>Delamarche, E., Tonna, N., Lovchik, R. D., Bianco, F., Matteoli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacology+on+microfluidics%3A+multimodal+analysis+for+studying+celll-cell+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Pharmacology on microfluidics: multimodal analysis for studying celll-cell interaction.</a> Current opinion in pharmacology. 13 (5), 821-828 (2013).</li>
<li>Neto, E., Alves, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensory+neurons+and+osteoblasts%3A+close+partners+in+a+microfluidic+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Biology%22%5BJournal%5D)">Sensory neurons and osteoblasts: close partners in a microfluidic environment.</a> Integrative Biology. , (2014).</li>
<li>Pagella, P., Neto, E., Jiménez-Rojo, L., Lamghari, M., Mitsiadis, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidics+co-culture+systems+for+studying+tooth+innervation%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+physiology%22%5BJournal%5D)">Microfluidics co-culture systems for studying tooth innervation.</a> Frontiers in physiology. 5 (August), (2014).</li>
<li>Connor, R., Tessier-Lavigne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+maxillary+factor%2C+a+maxillary+process-derived+chemoattractant+for+developing+trigeminal+sensory+axons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Identification of maxillary factor, a maxillary process-derived chemoattractant for developing trigeminal sensory axons.</a> Neuron. 24, 165-178 (1999).</li>
</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

치아의 신경 분포의 시험 관내 연구에서 이전은 삼차 신경절 및 치아 조직 또는 세포 26,28,29의 기존의 공동 문화를 기반으로했다. 이러한 연구는 주로 감각 축색 돌기 (38)에이 세포 또는 조직의 매력적인 효과를 조사하기 위해 실시 하였다. 분야에서 상당한 발전을 가져 있지만, 몇 가지 기술적 인 문제가 발생했다. 치아 세균은 문화 (37)의 몇 일 후에 퇴화하기 시작합니다. 이러한 관찰에 기초하여, 동일한 배양 조건에서 성장하는 뉴런과 이빨이 두 조직 사이의 크로스 토크에 관여하는 분자의 임의의 최종 분석을 손상. 최적의 배양 조건은 삼차 신경절 및 치아 조직의 생리 분자량 프로파일을 유지하기 위해 필요하다. 마이크로 유체 시스템은 최적화 된 미디어 (34, 36)에 다양한 신경 세포 유형의 공동 - 배양 지금까지 사용되어왔다. 이 마이크로 유체 시스템은 더 믿음을 나타낼 수...

신경 분포는 기관 및 조직의 1,2- 개발, 항상성 및 재생에 중요한 역할을한다. 5 - 또한, 신경 분포는 줄기 세포의 증식, 분화 및 동원 (3)의 조절에 관여한다. 실제로, 구강 안면 복합체의 조직에서 실현하는 최근 연구는 부교감 신경이 타액의 발달 및 재생 -6,7- 땀샘 중에 상피 전구 세포의 기능을 위해 필요한 것으로 나타났다. 11 - 마찬가지로,이 신경 분포는 입맛 (8)의 개발 및 유지 보수에 대한 필요가 있다고 입증되었다. 따라서, 예컨대 이빨 다른 중요한 구강 안면 기관 및 조직의 신경 분포의 개발에 아직 무시 역할을 분석하는 것이 중요하다. 성인 치아 풍부한 신경 분포에도 불구하고, 반면에 본체 develo의 다른 모든 기관 및 조직에핑 치아는 생후 초기 단계에서 신경 지배되기 시작. 치아는 구강 외배엽과 두개골 신경 능선 유래 중간 엽 사이의 순차 및 상호 작용의 결과로 개발한다. 이러한 상호 작용은 상피 유래 ameloblasts 에나멜과 상아질, 각각 (12)의 형성에 대한 책임이 있습니다 중간 엽 유래 상아 아세포에 상승을 제공합니다. (15) - 우수한 경추 신경에서 삼차 신경과 교감 신경의 감각 신경은 성인 치아 (13)을 신경을 분포시키다. 배아 동안, 신경 섬유가 개발 치아 세균으로 삼차 신경절 프로젝트에서 나오는 점진적으로 그들을 둘러싸고 있지만 치과 유두 중간 엽 (13)에 침투하지 않습니다. 신경 섬유는 상아질 모세포의 분화와 상아질 매트릭스 증착 (16)와 상관 관계가 더 진보 된 발달 단계에있는 치과 펄프 중간 엽를 입력합니다. 치과 펄프 신경 분포는 COMPL입니다eted 곧 구강 (13) 치아 폭발 후. 19 - 다양한 semaphorins 및 뉴로이 odontogenesis 16시 신경 분포의 조절에 관여하는 것으로 이전의 연구 밝혀졌다. 이전 연구는 명확하게 신경 분포가 물고기 (20)의 치아 형성을위한 전제 조건임을 증명하고있다. 최근의 연구는 소닉 고슴도치 (쉬) (21)의 분비를 통해 감각 신경에 의해 조절된다 마우스 앞니 치과 간엽 줄기 세포의 항상성을 보여 주었다. 24 - 그럼에도 불구하고, 치아 개시, 개발 및 재생에 신경 분포의 역할은 여전히 포유 동물 (22) 매우 논쟁의 여지가있다. 생체 내 연구의 과다는 다양한 동물 모델 13,25,26의 개발 및 수리 과정에서 치아 조직의 신경 분포의 패턴에 대한 중요한 정보를 제공하고 있습니다. 그러나, 이들의 대부분은 아프로통증은 신경 섬유 및 대상 기관과 조직 사이의 상호 작용의 분자 기초를 강조 최적 없습니다. 29 - 공동 문화 조사하고 제어 및 격리 된 환경 (26)에서 신경 섬유와 치아 사이의 상호 작용을 조작 할 수있는 가치있는 방법을 구성한다. 동시에, 공동 배양은 다양한 기술에 따라 조정된다. (32) - 예를 들어, 신경 및 특정 치아 조직 (예를 들면, 치과 펄프, 치과 대과, 치과 상피) 종종 30 시간의 긴 기간 동안 조직의 생존을 보장하기 위해 서로 다른 배지를 필요로한다. 29 - 지난 수십 년 동안, 동일한 배양 배지를 이용하여, 종래의 공 배양 감각 신경 섬유 (27)에 구강 및 치아 조직의 개발은 매력적인 또는 반발 효과를 조사하기 위해 매우 짧은 기간 (예 이틀)에 대해 수행되었다.그러나, 배양 기간의 연장은 치아 형태 형성과 신경 분포 cytodifferentiation에의 영향을 조사하고, 표적 기관 내의 분기 신경 섬유의 역학을 연구 할 필요가있다. 따라서, 비 연속 공동 문화는 신경 - 치아 조직의 상호 작용에 대한 연구를 수행하는 것이 더 적합 할 것입니다. 마이크로 유체 시스템은 적절한 배지에서 신경원과 다른 종류의 세포 공동 배양을 허용한다. 그들의 표적 조직 (33)을 포함 함을 향해 마이크로 채널을 통해 신경 세포체에서 축삭 성장을 허용하면서 이러한 장치에서, 치아 조직 및 신경 세포는 다른 구획으로 분리된다. 미세 유체 장치가 이미 암 및 혈관 신생 (35)에 세포 상호 작용에 뉴런과 마이크로 글 리아 (34, 35) 사이의 상호 작용뿐만 아니라 세포를 연구하기 위해 사용되었다. 더욱이, 이러한 시스템은 DORS 간의 상호 작용을 연구하는데 사용되어왔다알 루트 신경과 조골 세포 (36). 우리는 최근 삼차 신경절 (TG)와 치아를 오랜 기간 동안 생존 할 수 있음을 입증 한 경우 공동 배양 한 미세 유체 장치 (37)에. 또한, 우리는 다른 발달 단계에서 이빨이 체외 조건들이 생체 (37)에 표시 삼차 신경 분포에 같은 반발 또는 매력적인 효과를 유지하고 있음을 증명하고있다. 이 프로토콜은 간단하고 강력하고 유연한 방식으로하는 공동 배양 신경 / 신경과 대상 조직 및 제어 및 격리 된 환경에서 이러한 상호 작용의 특정 분자의 역할을 연구에 대한 정보를 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>AXIS Axon Isolation Devices</td><td>Millipore</td><td>AX15010-TC</td><td>다양한 길이의 마이크로채널 사용 가능</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L2020</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal</td><td>Gibco</td><td>21103-049</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco</td><td>17504</td><td></td></tr><tr><td>재조합 마우스 beta-NGF</td><td>R& D 시스템</td><td>1156-NG-100</td><td>인간 및 쥐 베타-NGF(R& D Systems)는</td></tr><tr><td>DMEM-F12</td><td>Gibco</td><td>11320-033</td><td></td></tr>과 동등합니다</tbody></table>.

미세 유체 공동 문화 장치를 사용하여 치아 세균 신경 분포를 개발 분석

Analysis of Developing Tooth Germ Innervation Using Microfluidic Co-culture Devices

신경 분포는 기관 및 조직의 발달, 항상성 및 재생에 중요한 역할을한다. 그러나 이러한 현상의 기초가되는 메커니즘은 아직 잘 이해되지 않는다. 특히, 치아 발달 및 재생의 신경 분포의 역할은 무시된다. 생체 내 연구의 여러 다양한 동물 모델의 개발 및 수리 과정에서 치아 조직의 신경 분포의 패턴에 대한 중요한 정보를 제공하고 있습니다. 그러나 이러한 접근 방법의 대부분은 신경 섬유 및 대상 기관과 조직 사이의 상호 작용의 분자 기초를 강조 최적 없습니다. 공동 문화 조사하고 제어 및 격리 된 환경에서 신경 섬유와 치아 사이의 상호 작용을 조작 할 수있는 유용한 방법을 구성한다. 지난 수십 년 동안, 동일한 배양 배지를 이용하여 종래의 공동 배양이 매우 짧은 기간 동안 수행되었다 (예 이틀)감각 신경 섬유에 구강 및 치아 조직을 개발하는 매력 또는 반발 효과를 알아보고자 하였다. 그러나, 배양 기간의 연장은 치아 형태 형성과 신경 분포 cytodifferentiation에의 영향을 조사 할 필요가있다. 마이크로 유체 시스템은 적절한 배지에서 신경원과 다른 종류의 세포 공동 배양을 허용한다. 우리는 최근 삼차 신경절 (TG) 및 치아 장기간 생존 할 수 있음을 증명하고있다 때 공 배양 미세 유동 장치에있어서, 그들이 이러한 조건들은 생체 내에서 보여 같은 신경 분포 패턴을 유지하는 것이다. 이를 바탕으로, 우리는 분리하고 미세 공 배양하면 시스템의 프로토콜에서 삼차 신경과 치아 세균을 개발하고 공동 문화가 간단하고 유연한 방법에 공동 배양 신경 / 신경과 표적 조직 등을 설명하는 방법을 설명하는 역할을 연구하기 제어 방식에서 이러한 상호 작용에 대한 특정 분자olled과 격리 된 환경을 제공합니다.

이러한 결과는 절연 삼차 신경절은 절연 치아 세균의 개발은 미세 유체 소자의 다른 구획에서 장기간 지속되어, 추가로, 미세 유체 소자의 한 구획에서 성장할 수 있음을 나타낸다. 다른 문화 매체는 두 구획에 사용되는, 두 구획 사이의 마이크로 그루브가 개발 치아 세균으로 삼차 신경절에서 축삭의 확장을 할 수 있습니다. 그림 3 마우스의 공동 문화, 면역 형광 (37)를 통해 신경 미세 섬유의 시각화를 나타냅니다 설명 미세 공동 배양 시스템에서 배아 삼차 신경절 및 마우스 배아 절치. 마우스 앞니가 생체 내에서 개발하는 동안 신경 지배되지 않습니다. 지속적으로, 삼차 신경절에서 축삭만큼 10 일 문화의 개발 치아 세균에 의해 폐지되는 그림 3a는이의 축삭 챔버의 개요를 보여줍니다<html> 공동 배양 시스템. 그림 3B 및 3C 쇼 축삭 챔버 및 마이크로 숲 ...

공동 배양은 신경과 표적 조직 및 장기 간의 상호 작용을 연구하는 귀중한 방법을 나타냅니다. Microfluidic 체계는 다른 배양 매체에 있는 신경절 및 전체적인 발달 기관 또는 조직을 CO 배양하는 것을 허용해, 따라서 신경세포와 그들의 표적 사이 누화의 생체외 학문을 위한 귀중한 공구를 대표하.

Innervation plays a key role in the development, homeostasis and regeneration of organs and tissues. However, the mechanisms underlying these phenomena ...

이 실험 절차의 전반적인 목표는 발달 중인 삼차신경절과 치배를 분리하고 공배양하는 방법을 보여주는 것입니다. 이는 먼저 미세유체 장치를 멸균, 장착 및 코팅함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 관심 대상인 마우스의 특정 발달 단계에서 삼차신경절과 치배를 적출하는 것입니다.다음으로, 삼차신경절과 치배를 미세유체 장치에 넣고 공동 배양합니다. 마지막 단계는 세포를 고정하고 면역형광법을 사용하여 염색하는 것입니다. 최종적으로, 현미경을 통해 공동 배양의 결과로 나타난 신경 분포 패턴을 확인합니다.기존의 일반적인 공배양과 같은 방법들에 비해 이 기술이 가진 주요 장점은, 각 장기와 조직을 각각의 최적 배양 배지에서 공배양할 수 있다는 점입니다. 이 방법은 치아 혁신에 미치는 다양한 분자의 역할이나 치아 발달 과정에서 혁신의 규칙과 같이 인공 혁신 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 먼저 미세 해부 핀셋 한 쌍과 가위 한 쌍을 포함한 해부 도구들을 오토클레이브로 멸균하며 시작하십시오.다음으로, 24 mm x 24 mm 크기의 유리 커버슬립 한 배치를 1 M 염산 용액에 넣고 37 °C의 궤도 셰이커에서 24시간 동안 처리하여 멸균합니다. 그 후 커버슬립을 멸균 증류수로 3회 세척하고, 99% 에탄올로 3회 헹굽니다. 멸균 플로우 후드 내에서 커버슬립을 건조시킨 뒤, 건조가 완료되면 후드의 UV 램프를 30분 동안 켭니다. 이후 커버슬립을 사용할 때까지 70% 에탄올에 보관합니다.다음으로, 멸균 집게를 사용하여 패키지에서 축삭 분리 미세유체 장치를 조심스럽게 꺼내고, 1 mm 멸균 생검 펀치를 사용하여 멸균 페트리 접시에 놓습니다. 배양 챔버의 위치에 맞춰 각 샘플당 장치에 하나의 구멍을 뚫습니다.압력으로 인해 마이크로 홈(micro grooves)이 손상될 수 있으므로 홈에 너무 가까이 펀칭하지 않도록 주의하십시오. 다음으로, 장치들을 70% ethanol에 담가 멸균하십시오. 이때 내부에 갇힌 공기를 모두 제거하는 것에 유의하십시오.그런 다음 에탄올에서 장치들을 꺼내 멸균 flow hood 아래에서 완전히 건조합니다. 또한, 70% 에탄올 용액에서 커버 슬립을 꺼내 멸균 flow hood 아래에서 건조시킵니다. 다음 단계로 진행하기 전 최소 3시간 동안 기다립니다.각 커버슬립을 6-웰 플레이트의 웰에 넣습니다. 그런 다음 마이크로유체 장치를 커버슬립 위에 올리고, 분리 장치와 유리 커버슬립 사이에 완전히 밀착되도록 핀셋으로 부드럽지만 단단하게 누릅니다. 다음으로, 각 배양 챔버에 0.1 mg/mL poly-D-lysine 150 µL를 피펫으로 분주합니다.그 후, 챔버 내의 모든 공기를 제거하기 위해 미세유체 장치를 5분 동안 진공 상태로 둡니다. 만약 챔버 내에 여전히 공기가 보인다면, 폴리 D 라이신(poly D lysine) 용액을 챔버에 다시 주입하십시오.장치를 poly-D-lysine과 함께 37 °C에서 하룻밤 동안 배양한 후, 다음 날 멸균 증류수로 챔버를 세 번 세척하고, 5 µg/mL 농도의 lamin 작업 용액 150 µL를 챔버에 채워 37 °C에서 하룻밤 동안 배양합니다. 이어서, 함께 제공된 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 삼차신경절 및 치배 배양을 위한 배지를 준비합니다.에탄올 70%로 해부 구역과 실체 현미경을 세척하고, 희생 후 해부 도구를 배치합니다. 배아 단계가 E 14.5에서 E 17.5인 임신한 마우스의 하복부 주변 피부를 절개합니다. 그런 다음 가위를 사용하여 복부를 조심스럽게 엽니다.자궁의 위치를 확인하여 제거한 후, 얼음이 채워진 튜브에 넣습니다. 차가운 PBS를 사용하여 배아를 박리하고, 얼음처럼 차가운 PBS가 채워진 새로운 페트리 접시에 각각 하나씩 옮깁니다. 모든 배아가 배아 외 조직에서 제거되면, 가위를 사용하여 머리 부분을 절단합니다.미세 해부 가위를 사용하여 삼차신경절이 손상되지 않도록 주의하며 하악골을 머리의 나머지 부분에서 분리합니다. 다음으로, 머리를 냉각된 해부용 유리 페트리 접시에 놓습니다. 핀셋을 사용하여 피부와 두개골을 제거합니다.그 다음 핀셋을 두부(cephalon) 아래에 배치하고 들어 올립니다. 두부와 소뇌를 제거하려면 삼차신경절(trigeminal ganglia)의 위치를 확인하고, 핀셋과 해부용 바늘을 사용하여 삼차신경절을 삼차신경에서 분리한 후 신경절을 세척합니다. 해부용 바늘을 칼처럼 사용하여 이들을 차가운 PBS에 보존하십시오.혀와 턱 주변의 피부를 제거합니다. 턱의 중앙선을 따라 절개하여 좌우 반턱을 분리합니다. 그런 다음 치배(tooth germs)의 위치를 확인하고 해부용 바늘을 사용하여 분리합니다. 삼차신경절과 치배를 해부한 후, 미세유체 장치에서 라미닌을 제거하고 각 챔버에 해당 배지 200 µL를 채웁니다.포셉을 사용하여 해부된 삼차신경절과 치배를 바이옵시 펀치로 만든 구멍 안으로 조심스럽게 옮깁니다. 이때 치배가 떠 있지 않고 커버슬립에 닿을 때까지 가라앉았는지 확인하십시오. 샘플을 37°C, 5% CO₂ 조건의 인큐베이터에서 배양합니다.배지를 교체하기 위해 10일 동안 48시간마다 배양액을 갈아줍니다. 먼저, 피펫을 웰의 외부 방향으로 향하게 하여 배지를 제거합니다. 그다음, 배양 기간 동안 챔버 반대편에 위치한 웰의 측면에 미리 데워둔 신선한 배지를 추가합니다.광학 현미경을 사용하여 언제든지 공배양 세포를 이미지화하십시오. 배양 기간이 끝나면 각 챔버의 웰당 150 µL의 PBS를 피펫팅하여 주입하고, PBS가 챔버를 통해 흐르게 하여 챔버를 세척하십시오. 마지막 세척 후 총 3회 세척을 반복하십시오.PBS를 제거하고, 챔버당 한쪽 웰에 4% paraformaldehyde/PBS 150 µL를 피펫팅하여 다른 챔버로 흐르게 함으로써 샘플을 고정합니다. 장치를 상온에서 15분 동안 배양합니다. 그런 다음 챔버를 PBS로 두 번 세척하고, 면역형광 염색 및 성장을 통한 이미징과 같은 추가 분석을 진행합니다.공배양 동안, 삼차신경절의 신경돌기들이 배양 구획에서 뻗어 나와 발달 중인 치배를 향해 연장됩니다. 고배율로 관찰하면 신경돌기들이 미세유체 장치의 축삭 챔버와 미세 홈을 통해 연장되는 것을 확인할 수 있습니다. 신경 성장의 진행 과정을 시간에 따라 추적하여 신경의 발달 과정을 설명할 수 있습니다.이 절차 이후에는, 예를 들어 혁신 이후 표적 조직에서의 유전자 발현 또는 단백질 분비의 변화를 연구하기 위해 RNA 또는 단백질 분석과 같은 다른 방법들을 수행할 수 있습니다.

analysis-developing-tooth-germ-innervation-using-microfluidic-co

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 연구는 소설 neuronal 축삭과 (천체) glia 공동 문화 플랫폼을 설정하는 절차를 설명합니다. 이 공동 문화 시스템에서 하나의 축삭 (및 단일 glial 세포) 사이의 직접 상호 작용 조작은 glial 신호에 대한 상호 신경 세포의 기계론의 분석을 수 있도록 가능한된다.

마이크로 유체 문화 플랫폼에 Glia 상호 작용 (MCP) 기반 Neuronal 축삭과 Glia 공동 문화 시스템에 신경의 영상 분석

이 비디오는 미세유체 장치를 사용하여 신경근 접합부의 형성을 보여줍니다. 신경 전구 세포와 근육 전구 세포는 장치 내의 다른 웰에 파종되고 각각 운동 뉴런과 근관으로 성숙하도록 방치됩니다. 부피와 화학적 구배의 생성은 활성 신경근 접합부의 발달로 이어집니다.

미세유체 소자(microfluidic device)를 이용한 신경근접합부 생성

이 비디오는 트랜스웰 필터를 사용하여 삼차 뉴런과 1차 치아 치수 세포의 공동 배양을 확립하는 기술을 보여줍니다. 이렇게 물리적으로 분리된 상태에서 치수조직에서 얻은 중간엽 세포는 모공을 통과하는 부분비 신호 분자를 분비하여 중간엽 세포를 향한 뉴런의 분화 및 이동을 촉진하여 공동 배양 시스템을 구축합니다.

교차 의사소통을 위한 치아 치수 세포와 삼차 신경 세포의 공동 배양 확립

이 비디오는 치아 생식 치수와 삼차신경절 사이의 상호 작용을 연구하기 위해 미세유체 장치를 활용하는 방법을 보여줍니다. 미세유체 장치 내부의 조직 배치를 보여주고 장치의 미세 홈을 통해 치아 세균을 향한 삼차 신경돌기 성장에 대한 자세한 시각화를 제공합니다. 또한, 치아 생식 치수로의 신경돌기 확장을 촉진하거나 억제하는 치아 유래 분자 요인의 역할을 강조하며, 이는 효율적인 출생 후 치아 신경 분포를 보장하는 데 중요합니다.

미세유체 공동 배양 시스템을 사용한 치아 세균 및 삼차신경절 상호 작용 분석

이 비디오는 다전극 어레이가 있는 미세유체 장치를 사용하여 hiPSC 유래 피질 글루타메이터 뉴런과 신경교종 세포의 공동 배양에서 뉴런 전기 활동을 평가하는 방법을 보여줍니다.

공동 배양에서 글루타메이트성 뉴런과 신경교종 세포 상호작용 평가

여기에 디테일이 조직 헬기를 이용하여 하악 조각 문화 치아 세균에 방법을 우리는. 이 방법은 전통적인 배양 방법을 사용하여 사용 가능한 조작과 혈통 추적하지를위한 절호의 기회를 제공하고, 개발하는 동안 치아에 고유 한 액세스 할 수 있습니다.

이식편 문화 치아 세균의 개발을 다음과 같은 사항에 대해 슬라이스 문화 방법

하나의 신경 세포의 미세 유체의으로 배열 및 생체 적합 물질 코팅의 칩 플라즈마 패턴 물 마스킹을위한 프로토콜을 설명합니다. 고도로 상호 공동 배양은 최소 셀 입력을 사용하여 제조 될 수있다.

단일 셀의 정밀도와의 연결을 공동 문화의 준비

우리는 치과 펄프 (DP) 1 차 세포의 격리, 분산 및 도금이 지나치게 트랜스웰 필터 위에 배양된 삼차 (TG) 뉴런을 설명합니다. DP 세포의 세포 반응은 면역 형광 또는 RNA /단백질 분석으로 분석 될 수있다. 공초점 현미경검사법을 가진 신경 마커의 면역형광은 신경질성 파생 반응의 분석을 허용합니다.

치과 펄프 파라크린 신호에 대한 응답으로 노이라이트 의 성장을 연구하는 공동 문화 방법

Trowell 형 장기 배양 방법은 치아 발달을 제어하는 복잡한 신호 네트워크를 밝히고 최근에는 지속적으로 성장하는 마우스 앞니의 줄기 세포와 관련된 조절을 연구하는 데 사용되었습니다. 형광 리포터 동물 모델과 라이브 이미징 방법은 치과 줄기 세포와 특정 틈새 미세 환경에 대한 심층 분석을 용이하게합니다.

치아 줄기 세포의 조절 연구를 위한 트로웰형 장기 배양 사용

최근 작품은 고급 소아 신경 교종에 신경 영향을 발견 (pHGG) 세포와 그들의 상호 작용. 본 작품은 생체 외 모델의 발달을 pHGG 세포와 글루타미터기뉴런과 기록하여 그 간 작용을 모방하였다.

글루타미터기뉴런과 소아 고학년 신경교세포의 공동 배양을 미세유체 장치로 결합하여 전기 적 상호 작용을 평가합니다.

neuroHuMiX는 근접 및 대표 공동 배양 조건에서 박테리아, 상피 및 신경 세포의 상호 작용을 연구하기 위한 고급 gut-on-a-chip 모델입니다. 이 모델을 통해 장내 마이크로바이옴과 신경계 사이의 통신의 기초가 되는 분자 메커니즘을 밝힐 수 있습니다.

장내 마이크로바이옴-신경계 축을 연구하기 위한 gut-on-a-chip 모델

배우세요 미세 유체 공동 문화 장치를 사용하여 마우스 삼차 신경절과 치아 배아를 분리하고 공동 배양하는 방법을. 이 기술은 신경 분포 패턴을 시각화하고 발달 생물학에서 신경-표적 상호작용을 연구하는 데 도움을 줍니다.

미세 유체 공동 문화 장치를 사용하여 치아 세균 신경 분포를 개발 분석

더 많은 동영상 탐색