Name: 인간화 된 마우스 모델에 HIV 감염에 대 한 줄기 세포를 기반으로 설계된 내성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 38 s
Description: 학습하세요 HIV 감염에 대한 줄기세포 기반 설계 면역을 테스트하는 인간화 BLT 마우스 모델 구축 방법을. CD34 양성 조혈줄기세포 분리 및 흉선 이식술을 활용하여 전임상 유전자 치료 연구에 활용합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

우리는 피규어를 만드는 데 예술적 조수를 제공해 주신 Ms. Jessica Selander에게 감사드립니다. 이 작업은 NIAID/NIH의 보조금으로 자금을 지원받았습니다. RO1AI078806, UCLA 에이즈 연구 센터(CFAR), 보조금 번호. P30AI28697, 캘리포니아 재생 의학 연구소(California Institute for Regenerative Medicine)는 보조금 번호. TR4-06845, 미국 에이즈 연구 연맹(amfAR), 보조금 번호. #108929-54-RGRL 및 UC 멀티 캠퍼스 연구 프로그램 및 이니셔티브, 캘리포니아 항바이러스 약물 발견 센터(CCADD)

<ol><li>Karpel, M. E., Boutwell, C. L., Allen, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BLT+humanized+mice+as+a+small+animal+model+of+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+virology%22%5BJournal%5D)">BLT humanized mice as a small animal model of HIV infection.</a> Current opinion in virology. 13, 75-80 (2015).</li>
<li>Zhen, A., Kitchen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem-cell-based+gene+therapy+for+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Stem-cell-based gene therapy for HIV infection.</a> Viruses. 6 (1), 1-12 (2014).</li>
<li>Goulder, P. J. R., Watkins, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+and+SIV+CTL+escape%3A+implications+for+vaccine+design%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Immunology%22%5BJournal%5D)">HIV and SIV CTL escape: implications for vaccine design.</a> Nature Reviews: Immunology. 4 (8), 630-640 (2004).</li>
<li>Kitchen, S. G., Bennett, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+Antigen-Specific+T+Cells+from+Genetically+Modified+Human+Hematopoietic+Stem+Cells+in+Immunodeficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Engineering Antigen-Specific T Cells from Genetically Modified Human Hematopoietic Stem Cells in Immunodeficient Mice.</a> PloS one. 4 (12), e8208(2009).</li>
<li>Goulder, P. J. R., Watkins, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+and+SIV+CTL+escape%3A+implications+for+vaccine+design%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Immunology%22%5BJournal%5D)">HIV and SIV CTL escape: implications for vaccine design.</a> Nature Reviews: Immunology. 4 (8), 630-640 (2004).</li>
<li>Kitchen, S. G. S., Levin, B. R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+suppression+of+HIV+by+antigen+specific+T+cells+derived+from+engineered+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">In vivo suppression of HIV by antigen specific T cells derived from engineered hematopoietic stem cells.</a> PLoS Pathogens. 8 (4), e1002649(2012).</li>
<li>Yang, O. O., Tran, A. C., Kalams, S. A., Johnson, R. P., Roberts, M. R., Walker, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysis+of+HIV-1-infected+cells+and+inhibition+of+viral+replication+by+universal+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Lysis of HIV-1-infected cells and inhibition of viral replication by universal receptor T cells.</a> PNAS. 94 (21), 11478-11483 (1997).</li>
<li>Zhen, A., Kamata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-specific+Immunity+Derived+From+Chimeric+Antigen+Receptor-engineered+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">HIV-specific Immunity Derived From Chimeric Antigen Receptor-engineered Stem Cells.</a> Molecular Therapy. 23 (8), 1358-1367 (2015).</li>
<li>Barrett, D. M., Singh, N., Porter, D. L., Grupp, S. A., June, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+Antigen+Receptor+Therapy+for+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer.</a> Annual Review of Medicine. 65 (1), 333-347 (2014).</li>
<li>Pejchal, R., Doores, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Potent+and+Broad+Neutralizing+Antibody+Recognizes+and+Penetrates+the+HIV+Glycan+Shield%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A Potent and Broad Neutralizing Antibody Recognizes and Penetrates the HIV Glycan Shield.</a> Science. 334 (6059), 1097-1103 (2011).</li>
<li>Caskey, M., Klein, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viraemia+suppressed+in+HIV-1-infected+humans+by+broadly+neutralizing+antibody+3BNC117%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Viraemia suppressed in HIV-1-infected humans by broadly neutralizing antibody 3BNC117.</a> Nature. 522 (7557), 487-491 (2015).</li>
<li>West, A. P., Scharf, L., Scheid, J. F., Klein, F., Bjorkman, P. J., Nussenzweig, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+insights+on+the+role+of+antibodies+in+HIV-1+vaccine+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Structural insights on the role of antibodies in HIV-1 vaccine and therapy.</a> Cell. 156 (4), 633-648 (2014).</li>
<li>Lan, P., Tonomura, N., Shimizu, A., Wang, S., Yang, Y. -G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+a+functional+human+immune+system+in+immunodeficient+mice+through+combined+human+fetal+thymus%2Fliver+and+CD34%2B+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of a functional human immune system in immunodeficient mice through combined human fetal thymus/liver and CD34+ cell transplantation.</a> Blood. 108 (2), 487-492 (2006).</li>
<li>Melkus, M. W., Estes, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mice+mount+specific+adaptive+and+innate+immune+responses+to+EBV+and+TSST-1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Humanized mice mount specific adaptive and innate immune responses to EBV and TSST-1.</a> Nature medicine. 12 (11), 1316-1322 (2006).</li>
<li>Shultz, L. D., Brehm, M. A., Garcia-Martinez, J. V., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mice+for+immune+system+investigation%3A+progress%2C+promise+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Immunology%22%5BJournal%5D)">Humanized mice for immune system investigation: progress, promise and challenges.</a> Nature Reviews: Immunology. 12 (11), 786-798 (2012).</li>
<li>Vatakis, D. N., Bristol, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+the+BLT+humanized+mouse+as+a+stem+cell+based+gene+therapy+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Using the BLT humanized mouse as a stem cell based gene therapy tumor model.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (70), e4181(2012).</li>
<li>De Rosa, S. C., Brenchley, J. M., Roederer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+six+colors%3A+a+new+era+in+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Beyond six colors: a new era in flow cytometry.</a> Nature medicine. 9 (1), 112-117 (2003).</li>
<li>Shimizu, S., Hong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+short+hairpin+RNA+potently+down-regulates+CCR5+expression+in+systemic+lymphoid+organs+in+the+hu-BLT+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A highly efficient short hairpin RNA potently down-regulates CCR5 expression in systemic lymphoid organs in the hu-BLT mouse model.</a> Blood. 115 (8), 1534-1544 (2010).</li>
<li>Denton, P. W., Olesen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+HIV+latency+in+humanized+BLT+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+virology%22%5BJournal%5D)">Generation of HIV latency in humanized BLT mice.</a> Journal of virology. 86 (1), 630-634 (2012).</li>
<li>Zhou, J., Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryoid+bodies+formation+and+differentiation+from+mouse+embryonic+stem+cells+in+collagen%2FMatrigel+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Genetics+and+Genomics%22%5BJournal%5D)">Embryoid bodies formation and differentiation from mouse embryonic stem cells in collagen/Matrigel scaffolds.</a> Journal of Genetics and Genomics. 37 (7), 451-460 (2010).</li>
<li>Vatakis, D. N., Arumugam, B., Kim, S. G., Bristol, G., Yang, O., Zack, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+Exogenous+T-cell+Receptors+Into+Human+Hematopoietic+Progenitors+Results+in+Exclusion+of+Endogenous+T-cell+Receptor+Expression%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Introduction of Exogenous T-cell Receptors Into Human Hematopoietic Progenitors Results in Exclusion of Endogenous T-cell Receptor Expression.</a> Molecular Therapy. 21 (5), 1055-1063 (2013).</li>
<li>Ito, R., Takahashi, T., Katano, I., Ito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+advances+in+humanized+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+%26+Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Current advances in humanized mouse models.</a> Cellular & Molecular Immunology. 9 (3), 208-214 (2012).</li>
<li>Martinez-Torres, F., Nochi, T., Wahl, A., Garcia, J. V., Denton, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypogammaglobulinemia+in+BLT+humanized+mice--an+animal+model+of+primary+antibody+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Hypogammaglobulinemia in BLT humanized mice--an animal model of primary antibody deficiency.</a> PloS one. 9 (10), e108663(2014).</li>
<li>McCune, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+applications+of+the+SCID-hu+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Development and applications of the SCID-hu mouse model.</a> Seminars in Immunology. 8 (4), 187-196 (1996).</li>
<li>Srivastava, S., Riddell, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+CAR-T+Cells%3A+Design+Concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+immunology%22%5BJournal%5D)">Engineering CAR-T Cells: Design Concepts.</a> Trends in immunology. 36 (8), (2015).</li>
</ol>

저자는 공개할 것이 없습니다.

CAR 및 임상 연구 향해 HSC 기반 설계 내성 획득 모멘텀 밀접 설계된 세포 분화 및 기능을 검토하기위한 적절한 동물 모델을 사용하는 것이 중요하다. 이 프로토콜에서 우리는 건설 및 HIV에 대한 설계 유 전적으로 변형 된 줄기 세포와 인간화 된 쥐를 시험하기위한 방법을 설명했다. 이식 전에 줄기 세포의 효율적인 전달을하는 것이 중요합니다. 그러나, 표적 세포의 인식에 따라 증식하는 T 세포의 능력으로 인해, 줄기 세포 변성 낮은 수준은 HIV 복제 8에 대해 강력한 응답을 생성하기에 충분 하였다. 그럼에도 불구하고, 줄기 세포 변형의 높은 수준을 달성하기 위해, 우리는자가 흉선 대신 간 및 다른 곳에서 13 ~ 15 설명했다 쥐 수술 흉선 청크와 젤라틴 단백질 혼합물에 형질 도입 CD34 + 세포를 사용하는 것이 좋습니다. 젤라틴 단백질 혼합물이다 solubiliz세포 외 기질 단백질이 풍부 에드 조직의 기저막. 정상적인 생리적 조...

조합 된 항 - 레트로 바이러스 요법의 성공에도 불구하고 HIV 감염은 여전히​​ 평생 질환이다. HIV에 대하여 세포 성 면역 반응은 HIV 복제를 조절하는데 매우 중요한 역할을한다. 줄기 세포 조작에서의 최근 발전은 HIV 치료 1-3 유전자 치료 접근의 급속한 발전을 허용했다. 그 결과, HIV에 대한 세포 - 기반 치료법의 효능의 생체 내 연구에 있도록 적절한 동물 모델을 사용하는 것이 중요하다. 동물 모델에서 작업하는 HIV 바이러스는 인간 세포를 감염한다는 사실에 의해 복잡하게된다. 이러한 제한을 피하기 위해, 과학자들은 붉은 털 원숭이에서 4,5- 유인원 면역 결핍 바이러스 (SIV)과 같은 질병 모델을 사용하는 것에 의존하고있다. 불행하게도 인해 종에 걸쳐 고유 차이와 SIV와 HIV 사이의 차이점이 모델의 주요 제한 사항이 있습니다. 또한, 단지 고도로 전문화 된 시설은 C는인간이 아닌 영장류 각각의 원숭이와 함께 작업을 지원 apable 큰 투자를 필요로한다. 따라서, HIV 감염 / 발병되기 쉽다 인간의 면역 시스템을 이용하여, 적은 경제적 금지하는 모델에 대한 가압이 필요하다. (또는 NSG) 혈액 / 간 / 흉선 (BLT) 인간화 된 마우스 모델은 점점 입증하는 중요한 도구 비 비만 당뇨병 (NOD)가 결합 된 면역 결핍 (SCID) -common 감마 체인 녹아웃 (- - / C γ)를 -severe HIV 감염을 연구합니다. 조혈 줄기 세포 (조혈 모세포) 태아 흉선을 주입함으로써, 마우스 개발 인간 면역계 1-3 요점을 되풀이 할 수있다. 줄기 세포 기반 유전자 치료제의 한 종류는 항원 특이 T 세포로 분화하는 조혈 줄기 세포 (조혈 모세포)를 재 프로그래밍함으로써 HIV를 타겟팅 말초 T 세포를 &#39;재지&#39;포함한다. 우리는 이전에 도시했는지 분자 클로닝 된 항 HIV 특이 T 세포와 재 설계 조혈SL9 에피토프 (아미노산 77-85; SLYNTVATL) 대 ceptor (TCR) HIV-1 개그는 인간화 NSG-BLT 마우스 모델 6에서 HIV 복제를 억제하는 성숙한 T 세포 형성에 줄기 세포를 리다이렉트 할 수있다. 분자 클로닝 TCR 사용의 경고는이 치료의 적용을 제한하는 특정 인간 백혈구 항원 (HLA) 서브 타입으로 제한된다는 것이다. 키메라 항원 수용체 (CAR)는 반면, 보편적 모두 HLA 서브 타입에 적용될 수있다. 초기 연구는 CD3의 도메인 신호 세포 내 ζ에 융합 된 인간 CD4의 세포 외 및 횡단 도메인으로 구성된 자동차를 이용하여 수행 하였다합니다 (CD4ζCAR 불린다). CD4ζCAR는 HIV 엔벨로프를 인정하고, T 세포 수용체 (7)에 의해 매개되는 것과 유사한 세포 독성 T 세포 반응을 유발할 수 CD8 T 세포에서 발현. 우리는 최근 인간의 조혈 모세포가 다음 여러 조혈 리로 분화 할 수 CD4ζCAR으로 수정 될 수 있음을 증명하고있다인간형 마우스 모델 8에서 HIV 복제를 억제 할 수있는 작용 성 T 세포를 포함 neages. 암 9 키메라 항원 수용체 치료의 급속한 발전, 그리고 강력한 광범위 중화 항체 단일 사슬 항체 자동차의 건설을 허용 HIV에 대한 10-12의 지속적인 특성, 그것은인지 CD4ζCAR 외에도 많은 새로운 후보의 구조이며, 생성 및 HIV 질환 및 기타 질환의 줄기 세포 기반 유전자 치료에 대해 시험한다. 또한, 이러한 항원 특이 차량을 포함하는 인간화 NSG-BLT 마우스 모델은 밀접하게 생체 내에서 인간 T 세포 반응을 조사하기 위해 유용한 도구를 제공 할 수있다. 중요한 것은, 우리의 프로토콜은 BLT 마우스 그 조혈 모세포는 젤라틴 단백질 혼합물에서 태아 간 트렁크 (16) 대신에 사용됩니다에서 13-15의 인간화의 건설 이전에 기술 된 방법과 다릅니다. 이 프로토콜은 설명 humani 1) 건설CD4ζCAR으로 설계 평탄화 BLT 마우스; 2) 유전자 변형 세포의 분화의 특성화; 유 전적으로 변형 된 세포 기능, 3) 특성화.

<table><tbody><tr><td>CD34 마이크로비드 키트</td><td>Miltenyi</td><td>130-046-702</td><td>인간 CD34+ 전구 세포 분류용</td></tr><tr><td>Bambanker</td><td>Wako</td><td>302-14681</td><td>동결 세포용</td></tr><tr><td>QIAamp Viral RNA 키트&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>52904</td><td>혈청 내 바이러스 부하 측정용</td></tr><tr><td>MACSQuant 유세포 분석기</td><td>Miltenyi</td><td></td><td>유동 분석용</td></tr><tr><td>BD LSRFortessa&trade;</td><td>BD biosciences</td><td></td><td>플로우 분석을 위한</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma</td><td>H6254-500MG&nbsp;</td><td>조직 소화를 위해</td></tr><tr><td>데옥시리보뉴클레아제 I&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>워딩턴</td><td>LS002006&nbsp;</td><td>조직 소화를 위해</td></tr><tr><td>콜라겐 분해 효소</td><td>생명 기술</td><td>17104-019&nbsp;</td><td>조직 소화를 위해</td></tr><tr><td>CFX 실시간 PCR 검출 시스템</td><td>Biorad</td><td></td><td>바이러스 부하 및 유전자 발현</td></tr><tr><td>Mice, strain NOD를 측정하기 위해. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>5557</td><td>인간화 마우스</td></tr><tr><td>페니실린 스트렙토마이신(Pen Strep)</td>을 구성하기 위해<td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10378016</td><td>세포 배양용</td></tr><tr><td>Piperacillin/tazobactam</td><td>Pfizer</td><td>Zosyn</td><td>Anti-fungal</td></tr><tr><td>Amphotericin B (Fungizone antimycotic)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15290-018</td><td>Anti-fungal</td></tr><tr><td>Autoclip Wound Clips, 9 mm - 1,000 units</td><td>Becton Dickinson</td><td>427631&nbsp;</td><td>수술용</td></tr><tr><td>멸균 폴리-강화 오로라 수술 가운, 케이스당 30개&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>메드라인</td><td>DYNJP2707&nbsp;</td><td>수술용</td></tr><tr><td>봉합사, 4-0, vicryl&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>오웬스와 마이너</td><td>23000J304H&nbsp; &nbsp;</td><td>수술용</td></tr><tr><td>알코올 준비 패드&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Owens and Minor</td><td>3583006818</td><td>수술용</td></tr><tr><td>장갑, 수술용, 6 1/2</td><td>Owens 및 Minor</td><td>4075711102</td><td>수술용</td></tr><tr><td>Yssel' s 세럼-프리 T-세포 매체</td><td>제미니 바이오 제품</td><td>400-102</td><td>CD34+ 세포 도입</td></tr><tr><td>인간 혈청 알부민&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9511</td><td>CD34+ 세포 형질도입용</td></tr></tbody></table>

인간화 된 마우스 모델에 hiv 감염에 대 한 줄기 세포를 기반으로 설계된 내성

Stem-cell Based Engineered Immunity Against HIV Infection in the Humanized Mouse Model

HIV에 대한 줄기 세포 기반 유전자 요법의 급속한 발전으로, 유전자 변형 세포의 조혈 및 분화 면역 기능을 연구하기위한 동물 모델에 대한 요구 사항을 가압있다. 인간화 뼈 골수 / 간장 / 흉선 (BLT) 마우스 모델은 T 세포, B 세포, NK 세포 및 단핵구를 포함하는 주변의 인간 면역 시스템의 전체 재구성을 허용한다. 인간의 흉선 이식은자가 흉선 조직에서 T 세포의 흉선 선택할 수 있습니다. HIV 감염의 연구 이외에도, 모델은 조혈 줄기 세포 (조혈 모세포)에서 유래 된 세포의 분화, 발달 및 기능을 연구하기위한 강력한 도구로 나타낸다. 형질 도입 조혈 모세포와 -Bone 골수 / 간 / 흉선 (NSG-BLT) 마우스 여기에 우리가 결합 된 면역 결핍 (SCID) -common 감마 체인 녹아웃 (- - / C γ)를 -severe 인간화 비 비만 당뇨병 (NOD)의 건설 개요 CD4 키메라 항원 수용체와 (CD4CAR)렌티 바이러스 벡터입니다. 우리는 CD4CAR 조혈 성공적 다중 계통으로 분화, 항 HIV 활성을 가질 수 있다는 것을 보여준다. 이 연구의 목적은 HIV에 대한 면역 설계에 대한 생체 내 모델로서 NSG-BLT 마우스 모델의 사용을 설명한다. 그것은 렌티 바이러스와 인체 조직이 사용되기 때문에, 실험과 수술이 특별한주의 (BSL2의 +) 설비와 바이오 안전성 레벨 2 (BSL2)에 클래스 II 생물 안전 캐비닛에서 수행해야하는 것이 주목할 가치가있다.

도 1은 변형 된 줄기 세포와 인간형 BLT 쥐 구성의 개략을 나타낸다. 10주 임플란트 수술 후, 마우스는 유전자 변형 된 세포의 분화 및 발달을 평가하기 위해 희생되었다. 도 2에 도시 된 바와 같이, 다수의 림프 조직 (혈액, 비장, 흉선 및 골수) CD4ζCAR 변성 된 마우스로부터 수거 하였다. 이 프로토콜에 사용되는 CD4ζCAR는 항 CD4 항체 및 GFP 8의 발현에 의해 검출 될 수 CD4 키메라 항원 수용체와 GFP가 포함되어 있습니다. 세포를 단리하고 인간 CD45에 대한 항체뿐만 아니라 항 CD4 항체로 염색하고 유동 세포 계측법에 의해 분석 하였다. GFP 및 CD4 이중 양성 세포는 여러 림프 조직에서 CD4CAR + 세포의 존재를 나타내는 검출되었다. 유...

이 프로토콜은 HIV 감염에 대한 줄기 세포 기반 엔지니어링 면역을 가진 인간화 된 골수/간/흉선 마우스 모델을 구성하는 방법을 설명합니다.

인간화 된 마우스 모델에 HIV 감염에 대 한 줄기 세포를 기반으로 설계된 내성

With the rapid development of stem cell-based gene therapies against HIV, there is pressing requirement for an animal model to study the hematopoietic ...

이 실험 절차의 전반적인 목표는 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor)로 수정된 인간화 마우스를 제작하는 것입니다. 이 방법은 HIV 감염 및 기타 만성 감염 및 악성 종양에 대해 줄기세포 기반의 공학적 면역 효능을 테스트함으로써 HIV 및 면역학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 예를 들어, 면역 부전의 메커니즘과 면역 체계를 강화하는 방법, 그리고 더 나은 항바이러스 또는 항종양 면역을 생성하기 위한 치료법 개발 등이 이에 해당합니다.이 기술의 주요 장점은 많은 양의 실험적 조작이 가능하다는 것입니다. 인간화 BLT 마우스 모델은 인간의 면역 체계를 모사하며, 본 사례에서는 HIV 감염에 대한 세포 기반 유전자 치료제의 전임상 시험을 가능하게 합니다. 절차 시연은 저희 실험실의 기술자인 Valerie Rezek과 Brianna Lam이 진행하겠습니다.보충제가 첨가된 RPMI 배지가 담긴 디쉬에서 메스를 사용하여 흉선을 약 1mm³ 크기의 작은 조각으로 자릅니다. 그런 다음 곡선형 둔단 핀셋(curved blunt forceps)을 사용하여 흉선 조각을 96-웰 플레이트의 각 웰에 하나씩 넣습니다. 조직이 마르지 않도록 모든 웰에 100-200 µL의 배지를 추가합니다.현미경으로 조직을 관찰하여 흉선이 아니거나 결합 조직이 붙어 있는 조직을 제거합니다. 다음으로, 확인된 흉선 조각들을 수거하여 T25 세포 배양 플라스크에 넣습니다. 플라스크에 항생제가 첨가된 RPMI 배지 7 mL를 넣고 부드럽게 흔들어 섞어줍니다.그 다음 플라스크를 조직 배양 배양기에 넣습니다. 이 단계는 조직의 세균 오염을 방지합니다. IMDM이 담긴 접시에서 두 개의 메스를 사용하여 태아 간을 약 3mm³ 크기의 작은 조각으로 절단하여 CD34 양성 HSCs의 분리를 시작합니다.흰색 결합 조직을 제거하여 버립니다. 그런 다음 16 gauge blunt needle이 장착된 10 milliliter 시린지를 사용하여 간 조각과 배지를 흡입해 50 milliliter conical tube로 옮깁니다. 조직을 완전히 균질화하기 위해 다섯 번에서 일곱 번 정도 조심스럽게 흡입하고 배출하는 과정을 반복합니다.10 milliliters의 IMDM 배지를 준비한 후, collagenase, hyaluronidase, 항생제, Dnase 및 항진균제를 첨가합니다. 배지를 0.22 micron 필터로

stem-cell-based-engineered-immunity-against-hiv-infection-humanized

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

인간화 마우스를 사용하여 종양 특정 T 세포의 생성 및 특성이 여기에 설명되어 있습니다. 인간 thymic 조직 및 유전자 변형 인간의 조혈 줄기 세포는 면역 저하 된 쥐에 이식되어 있습니다. 안티 종양 면역 반응의 생체 시험에서 허용하는 엔지니어링 인간의 면역 시스템의 reconstitution에이 발생합니다.

줄기 세포 기반 유전자 치료 종양 모델로 BLT 인간화 마우스를 사용하여

이 비디오는 인간 면역 체계(HIS) 마우스를 생성하는 기술을 보여줍니다. CD34+ 조혈모세포(HSC)는 항체로 코팅된 마그네틱 비드를 사용하여 인간 제대혈 버피 코트 세포에서 분리됩니다. CD34+ HSC는 사이토카인이 풍부하고 동결 보존된 성장 배지에서 확장됩니다. 마지막으로, 해동된 HSC를 면역결핍 새끼 마우스에 주입하여 HIS 마우스 모델을 확립합니다.

제대혈 조혈 줄기세포를 분리하여 인간 면역계 마우스를 생성하다

이 비디오는 인간 면역 체계와 간 세포를 가진 이중 인간화 마우스 모델을 생성하는 방법을 보여줍니다. 이는 인간 간 세포와 조혈 줄기 및 전구 세포를 비장 내 주사를 통해 형질전환 면역 결핍 마우스에 이식하여 간 세포의 생착과 인간 면역 세포의 발달을 유도하는 것을 포함합니다.

인간 간 세포와 면역 세포를 이용한 인간화 마우스 모델 개발

이 비디오는 인간 면역 결핍 바이러스(HIV)에 대한 줄기 세포 기반 엔지니어링 면역을 가진 인간화 마우스 모델을 생성하는 기술을 보여줍니다. 인간 태아 흉선 조직과 조작된 조혈모세포(HSC)는 면역이 심하게 저하된 쥐의 신장 캡슐에 이식됩니다. HIV에 대항하여 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 HSC는 흉선 조직과의 공동 국소화를 촉진하는 젤라틴 단백질 혼합물에 혼합되어 있습니다. 시술 후 HSC는 다양한 인간 면역 세포로 분화되어 HIV에 대한 기능적 인간 면역 체계를 가진 인간화 마우스 모델을 개발합니다.

HIV에 대한 공학적 면역을 가진 인간화 마우스 모델 구축

이 프로토콜 신생아 NSG 쥐 방사선 조절로 인간 조 혈 줄기 세포의 intrahepatic 주입을 통해 humanized 쥐 (hu-NSG)를 설정 하는 방법을 제공 합니다. Hu NSG 마우스 HIV 감염 및 조합 항 레트로 바이러스 치료 (장바구니)에 취약 하 고 HIV 복제 및 대기 시간 조사에 대 한 적합 한 병 태 생리 모델 역할.

HIV 복제 및 대기 연구를 위한 인간 답게 끄 덕/SCID/IL2rγnull (hu-NSG) 마우스 모델

이 프로토콜은 인간 면역 계통 및 간 세포 둘 다로 인간화한 마우스를 설치하는 믿을 수 있는 방법을 제공합니다. 인간 간세포 및 CD34+ 조혈 줄기 세포의 경내 주사를 통해 달성된 이중 재구성 면역 결핍 마우스는 인간 면역 결핍 바이러스-1 감염에 취약하고 관찰된 바와 같이 간 손상을 재현합니다. HIV에 감염된 환자.

HIV 관련 간 병인을 위한 이중 인간화 TK-NOG 마우스 모델 구축

여기에 기술된 것은 인간화된 마우스에 있는 HIV 감염의 역학을 공부하기 위한 3개의 실험적인 접근입니다. 첫 번째는 만성 감염 사건의 연구를 허용하는 반면, 두 후자는 1 차감염 또는 바이러스 재활성화 후 급성 사건의 연구를 허용합니다.

인간화 면역 결핍 마우스 모델에서 만성, 급성 및 재활성화 HIV 감염

우리는 줄기 세포 이식, 질 내 인간 면역 결핍 바이러스 노출 및 액적 디지털 PCR RNA를 기반으로 인간화 및 인간 면역 결핍 바이러스 감염 NOG 마우스 모델의 생성 및 평가를위한 프로토콜을 개발했습니다. 정량화.

질 내 HIV 노출 및 HIV 감염 치료를 위한 인간화된 NOG 마우스

이 프로토콜은 인간화 마우스에서 HIV-1 RNA 복제를 성공적으로 억제하는 경구 조합 항레트로바이러스 약물을 전달하는 새로운 방법을 설명합니다.

HIV-1에 감염된 인간화 마우스에서 경구 조합 항레트로바이러스 치료

이 프로토콜은 면역 종양학 연구를 위한 인간 면역 체계(HIS) 마우스의 생성을 간략하게 설명합니다. 이 모델에 이식된 인간 종양에 대한 인간 면역치료제를 시험하기 위한 이 모델의 사용에 있어서의 지침 및 고려사항은 종양에 대한 인간 면역계의 반응을 특성화하는 것에 중점을 두고 제시된다.

인간 종양을 지닌 인간화 마우스 모델에서 암 면역 치료제 테스트

학습하세요 HIV 감염에 대한 줄기세포 기반 설계 면역을 테스트하는 인간화 BLT 마우스 모델 구축 방법을. CD34 양성 조혈줄기세포 분리 및 흉선 이식술을 활용하여 전임상 유전자 치료 연구에 활용합니다.

인간화 된 마우스 모델에 HIV 감염에 대 한 줄기 세포를 기반으로 설계된 내성

더 많은 동영상 탐색