Name: 비 투명 공사장 공중 발판에 이미징 세포 생존 - 소설 니트 티타늄 임플란트의 예를 사용하여 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 28 s
Description: 학습하세요 형광 이미징 기술을 사용하여 비투명 니트 티타늄 임플란트에서 세포 부착과 생존을 시각화하는 방법을. 이 기술은 조직 공학 분석을 향상시키고 세포-재료 상호작용을 이해하는 데 도움을 줍니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 프로젝트는 부분적으로 Zentrales Innovationsprogramm Mittelstand에 (ZIM) 데 Bundesministeriums 대 Wirtschaft 싶게 에네르기 -KF3010902AJ4에 의해 투자된다. 발행 수수료는 BG 외상 병원 튀빙겐, 독일에 의해 덮여있다.

<ol><li>Bridwell, K. H., Anderson, P. A., Boden, S. D., Vaccaro, A. R., Wang, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What%27s+new+in+spine+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Joint+Surg+Am%22%5BJournal%5D)">What's new in spine surgery.</a> J Bone Joint Surg Am. 95, 1144-1150 (2013).</li>
<li>Adams, M. A., Dolan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intervertebral+disc+degeneration%3A+evidence+for+two+distinct+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anat%22%5BJournal%5D)">Intervertebral disc degeneration: evidence for two distinct phenotypes.</a> J Anat. 221, 497-506 (2012).</li>
<li>Schizas, C., Kulik, G., Kosmopoulos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disc+degeneration%3A+current+surgical+options%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Cell+Mater%22%5BJournal%5D)">Disc degeneration: current surgical options.</a> Eur Cell Mater. 20, 306-315 (2010).</li>
<li>Lewis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleus+pulposus+replacement+and+regeneration%2Frepair+technologies%3A+present+status+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res+B+Appl+Biomater%22%5BJournal%5D)">Nucleus pulposus replacement and regeneration/repair technologies: present status and future prospects.</a> J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 100, 1702-1720 (2012).</li>
<li>Cunningham, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+scientific+considerations+in+total+disc+arthroplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Spine+J%22%5BJournal%5D)">Basic scientific considerations in total disc arthroplasty.</a> Spine J. 4, 219-230 (2004).</li>
<li>Implant for surgical use in humans or vertebrates. US8728164 B2. Google Patents. , (2014).</li>
<li>Kettler, A., Kaps, H. P., Haegele, B., Wilke, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomechanical+behavior+of+a+new+nucleus+prosthesis+made+of+knitted+titanium+filaments%5BTitle%5D)+AND+%22SAS+J%22%5BJournal%5D)">Biomechanical behavior of a new nucleus prosthesis made of knitted titanium filaments.</a> SAS J. 1, 125-130 (2007).</li>
<li>Nerurkar, N. L., Elliott, D. M., Mauck, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+design+criteria+for+intervertebral+disc+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">Mechanical design criteria for intervertebral disc tissue engineering.</a> J Biomech. 43, 1017-1030 (2010).</li>
<li>Elias, C. N., Lima, J. H. C., Valiev, R., Meyers, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomedical+applications+of+titanium+and+its+alloys%5BTitle%5D)+AND+%22JOM%22%5BJournal%5D)">Biomedical applications of titanium and its alloys.</a> JOM. 60, 46-49 (2008).</li>
<li>Hallab, N., Link, H. D., McAfee, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterial+optimization+in+total+disc+arthroplasty%5BTitle%5D)+AND+%22Spine+%28Phila+Pa+1976%29%22%5BJournal%5D)">Biomaterial optimization in total disc arthroplasty.</a> Spine (Phila Pa 1976). 28, 139-152 (2003).</li>
<li>Gustafsdottir, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+cytological+profiling+assay+to+measure+diverse+cellular+states%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Multiplex cytological profiling assay to measure diverse cellular states.</a> PLoS One. 8, e80999(2013).</li>
<li>Bocker, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introducing+a+single-cell-derived+human+mesenchymal+stem+cell+line+expressing+hTERT+after+lentiviral+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Introducing a single-cell-derived human mesenchymal stem cell line expressing hTERT after lentiviral gene transfer.</a> J Cell Mol Med. 12, 1347-1359 (2008).</li>
<li>Ehnert, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transforming+growth+factor+beta1+inhibits+bone+morphogenic+protein+%28BMP%29-2+and+BMP-7+signaling+via+upregulation+of+Ski-related+novel+protein+N+%28SnoN%29%3A+possible+mechanism+for+the+failure+of+BMP+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Med%22%5BJournal%5D)">Transforming growth factor beta1 inhibits bone morphogenic protein (BMP)-2 and BMP-7 signaling via upregulation of Ski-related novel protein N (SnoN): possible mechanism for the failure of BMP therapy.</a> BMC Med. 10, 101(2012).</li>
<li>Morgan, S. P., Rose, F. R., Matcher, S. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMorgan%2C+SP+%22Optical+Techniques+in+Regenerative+Medicine%22">Optical Techniques in Regenerative Medicine</a>. , CRC Press. (2013).</li>
<li>Vielreicher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taking+a+deep+look%3A+modern+microscopy+technologies+to+optimize+the+design+and+functionality+of+biocompatible+scaffolds+for+tissue+engineering+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Taking a deep look: modern microscopy technologies to optimize the design and functionality of biocompatible scaffolds for tissue engineering in regenerative medicine.</a> J R Soc Interface. 10, 20130263(2013).</li>
<li>Curtis, A., Wilkinson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topographical+control+of+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Topographical control of cells.</a> Biomaterials. 18, 1573-1583 (1997).</li>
<li>Niu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+imaging+of+endothelial+cells+in+bioengineered+blood+vessels%3A+the+impact+of+crosslinking+of+the+scaffold%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Fluorescent imaging of endothelial cells in bioengineered blood vessels: the impact of crosslinking of the scaffold.</a> J Tissue Eng Regen Med. , (2014).</li>
<li>Chan, B. P., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffolding+in+tissue+engineering%3A+general+approaches+and+tissue-specific+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Spine+J%22%5BJournal%5D)">Scaffolding in tissue engineering: general approaches and tissue-specific considerations.</a> Eur Spine J. 17, Suppl 4 467-479 (2008).</li>
<li>Navarro, M., Michiardi, A., Castano, O., Planell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterials+in+orthopaedics%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Biomaterials in orthopaedics.</a> J R Soc Interface. 5, 1137-1158 (2008).</li>
<li>Priyadarshani, P., Li, Y., Yao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+biological+therapy+for+nucleus+pulposus+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Advances in biological therapy for nucleus pulposus regeneration.</a> Osteoarthritis Cartilage. , (2015).</li>
<li>Thermofisher Fluorescence Spectraviewer. , Source:
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/de/de/home/life-science/cell-analysis/labeling-chemistry/fluorescence-spectraviewer.html">https://www.thermofisher.com/de/de/home/life-science/cell-analysis/labeling-chemistry/fluorescence-spectraviewer.html</a> (2016).</li>
</ol>

저자는 더 경쟁 관심이 없음을 선언합니다. 작품의 어떤 부분은 없었 또는 게시를 위해 고려중인 현재 또는 다른 곳에 게시 된있다.

골격 표면하여 임플란트를 기능적 내구성을 결정 생체 내에서 주변 조직과의 상호 작용에서 중요한 역할을한다. 따라서, 지지체의 생체 적합성의 지지체 상에 플레이 팅 세포를 이용한 시험 관내 분석법 (SCP1 세포주)에 의해 연구된다. 얇고 광학적으로 투명 지지체와 잘 작동 현미경 기술은 가난 생체 적합성을 연구하는 불투명 발판 적합합니다. 이것은 불투명 지지체 상당한 왜곡없이 15 침투하는 광을 방지 주로 때문이다. 부분적으로 이러한 문제점을 극복하기 위해, 우리는 이것과 각종 형광체를 사용하는 니트 제조 티타늄 지지체의 ON / 셀 평가 방법을 확립한다. 티타늄 와이어 폴딩 하였다 편성을 가능하게하기 위해, 재료는 강한 부식성 및 독성 물질 (윤활제, 매염제, 전기와 접촉트레이스는 발판에 /에 남아있는 경우 지지체의 생체 적합성을 변경할 수있는 솔루션을), -polishin...

만성 허리 통증은 다 인성 질환이다. 퇴행성 디스크 질환의 최소 침습적 치료 방법에 대한 관심은 1950 년대 이후 성장했다. 오늘날, 척추의 분절 다중 융합은 가장 널리 사용되는 치료는 상태가 될 때까지. 이후,이 방법은 종종 영향을받는 세그먼트 1, 2의 이동성의 한계에 이르게의 전 치환술 시대의 탐사는 넓은 관심이되었다. 전체 디스크 교체 및 핵 교체에 상당한 발전 만성 허리 통증 1을 치료하는 좋은 대안이되고있다. 거대한 진전에도 불구하고, 방법 중 어느 것도 임상 적으로 평가되지 않았다. 덜 엄격한 핵 이식은 전체 디스크 교체에 유망한 대안을 나타내는 섬유륜이 3,4 그대로 것이어야한다. 그러나, 시장에 현재 존재하는 핵 이식은 종종 추체, 전위, 디스크 및 t의 수직 높이 손실의 변화와 같은 합병증과 연관된필요한 관련 기계 강성 5 그는 부족. 현재의 문제점을 해결하기 위하여, 티탄 니트 와이어로 이루어지는 신규 한 핵 이식이 성공적 6 개발되었다. 때문에 독특한 니트 구조로, 새로 개발 된 인공 지지체는 예를 들어, 고유 생체 역학적 특성, 감쇠 기능, 기공 크기, 적재 능력 및 신뢰성 (7)을 보여 주었다. 이 새로운 핵 임플란트의 생체 적합성 시험을 목표 임플란트의 불투명 특성 기인 (광) 분석 기술에 심각한 제한을 도시. 생체 적합성을 테스트하기 위하여, 세포 - 금속의 상호 작용이 중요한 역할을한다 8-10. 세포와 지지체 사이의 상호 작용은 호스트 시스템 내에 더 주입 통합 안정화 때문에 필요하다. 그러나, 점점 증식 깊이는 지지체의 기계적 성질을 변경할 수있다. inves의 목표발판 표면은 세포 부착, 증식 및 분화 또는를위한 기반을 제공하는지 여부 tigate 금속은 세포 생존에 영향을 미치는 여부가 불투명 불투명 지지체에 /에서 세포 이미징의 공통 잘 알려진 문제를 해결하는 것이 중요하다. 이 제한 여러 형광을 극복하기 위해 기반 기술을 탐구 하였다. 기업은 살아있는 세포, 세포 구획, 또는 특정 세포 상태 (11)를 시각화 형광체의 넓은 범위를 제공한다. 이 실험 형광체 가장 우리 형광 현미경을 맞추기 위해 온라인 툴 스펙트럼 시청자의 도움으로 선택되었다. 온 세포의 추적을 허용하는 osteochondro-전구 세포는 1) 형광체 (녹색 형광 단백질 / GFP) 표지 : 불투명 니트 티타늄 지지체의 /에 부착 세포 거동의 분석을 위해 개발 된 전략들은 다음을 포함 지지체, 2) 측정 가능성 (미토chondrial 활동) 세포, 3) 시각화 세포 - 세포와 지지체에서 세포 물질의 상호 작용. 절차는 쉽게 다른 부착 세포 및 기타 비 투명 또는 불투명 지지체에 전사 될 수 있다는 장점을 갖는다. 또한, 생존 및 증식 패턴은 며칠에 걸쳐 모니터링 할 수있다 따라서, 이것은 지지체 재료 또는 세포의 제한된 양으로 사용될 수있다. 본 연구는 세포 생존율을 측정 불투명 니트 티타늄 지지체의 ON / osteochondro-전구 세포의 성장 패턴을 시각화 현재 프로토콜의 성공적 사용을 설명한다. 또한, 개발 된 프로토콜 골격 불순물을 결정하고 세척 프로토콜을 확인하기 위해 사용될 수있다.

<table><tbody><tr><td>6/24/48 웰 플레이트, T25/ T75 배양 플라스크</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>*</td><td></td></tr><tr><td>* 24 웰 플레이트</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>CELLSTAR 662 160</td><td></td></tr><tr><td>* 48 웰 플레이트</td><td>Corning Incorporated USA</td><td>3548</td><td></td></tr><tr><td>* 6웰 플레이트</td><td>Falcon</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>* T25</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>690 175</td><td></td></tr><tr><td>* T75</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>658 175</td><td></td></tr><tr><td>아세트산, 푸럼 &ge; 99.0%</td><td>Carl Roth</td><td>3738.4</td><td></td></tr><tr><td>아세톤</td><td>Carl Roth</td><td>5025.1</td><td></td></tr><tr><td>Axioplan-2&nbsp;</td><td>Carl Zeiss, 독일</td><td></td><td></td></tr><tr><td>생물 안전 작업대</td><td>Thermo Scientific</td><td>safe 2020</td><td></td></tr><tr><td>Calcein acetoxymethyl ester (calcein AM)</td><td>Sigma</td><td>17783</td><td></td></tr><tr><td>Cell Culture Incubtator</td><td>Binder, Tuttlingen, Germany</td><td>9040-0078</td><td></td></tr><tr><td>Filter unit (0.22 &micro; m)</td> <td>Millipore, IRL</td><td>SLGP033RS</td><td></td></tr><tr><td>원심 분리기 5810 R 및 5417 R</td><td>Thermo Fisher Scientific, NY</td><td>Megafuge 40R</td><td></td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid (DMSO)</td> <td>Carl Roth</td><td>4720.2</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco ' s Ca 없이 PBS & Mg</td><td>시그마</td><td>H15-002</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 99%</td><td>&nbsp; SAV 액체 prod. GmBH</td><td>475956</td><td></td></tr><tr><td>Ethidium homodimer</td><td>Sigma</td><td>46043</td><td></td></tr><tr><td>EVOS 형광 이미징 시스템</td><td>Life technologies</td><td>AMF4300</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FCS)</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td></td></tr><tr><td>혈구계</td><td>Hausser Scientific, PA, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Sigma</td><td>14533-100MG</td><td></td></tr><tr><td>니트 티타늄 핵 임플란트</td><td>Buck co & KG, 독일</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MEM 알파 수정 글루타민 w/o 뉴클레오시드</td><td>시그마</td><td>E15-832</td><td></td></tr><tr><td>오메가 마이크로플레이트 리더</td><td>BMG Labtech, 독일</td><td>FLUOstar 오메가</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>시그마</td><td>P11-010</td><td></td></tr><tr><td>레사주린 나트륨 염</td><td>시그마</td><td>199303-1G</td><td></td></tr><tr><td>설포로다민 B 나트륨 염</td><td>시그마</td><td>S1402-1G</td><td></td></tr><tr><td>시험관 회전기</td><td>Labinco BV, 네덜란드</td><td>모델 LD-76</td><td></td></tr><tr><td>TRIS (하이드 록시 메틸) 아미노메탄</td><td>Carl Roth</td><td>AE15.1</td><td></td></tr><tr><td>Triton</td><td>Carl Roth</td><td>3051.2</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue 0.5 %</td> <td>Carl Roth</td><td>CN76.1</td><td></td></tr><tr><td>트립신 / EDTA</td><td>시그마</td><td>L11-004</td><td></td></tr></tbody></table>

비 투명 공사장 공중 발판에 이미징 세포 생존 - 소설 니트 티타늄 임플란트의 예를 사용하여

Imaging Cell Viability on Non-transparent Scaffolds &#8212; Using the Example of a Novel Knitted Titanium Implant

추간판 퇴행과 추간판 탈출증은 허리 통증의 주요 원인 중 하나입니다. 세포외 기질의 고갈은 NP(nucleus pulposus) 압출로 절정에 이르며 추간판 파괴로 이어집니다. 현재 이용 가능한 외과적 치료법은 통증을 감소시키지만 척추의 기계적 기능을 회복시키지는 못합니다. 따라서 척추의 기계적 특징을 보존하기 위해 전체 디스크 또는 핵 교체가 광범위한 관심사가 되었습니다. 그러나 이 관절 치환술 시대는 기존 제품 중 어느 것도 임상적으로 평가되지 않았기 때문에 여전히 미성숙한 상태에 있습니다.
이 연구는 니트 티타늄 와이어로 만든 새로운 핵 임플란트의 생체 적합성을 테스트하기 위한 것입니다. 모든 기계적 장점에도 불구하고, 이 재료는 결과 임플란트가 불투명하기 때문에 기존 광학 분석에 한계가 있습니다. 여기에서는 골격에 있는 골연골전구세포의 체외 시각화, 추적 및 생존력 테스트를 설명하는 전략을 제시합니다. 이 프로토콜은 세척 프로토콜의 효율성을 시각화하고 이러한 골격 및 기타 불투명 골격의 생체 적합성을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 또한, 이 프로토콜은 세포의 부착 패턴뿐만 아니라 골격 상에서/골격 내에서 세포 생존율 및 증식률을 보여주는 데 사용할 수 있습니다. 이 체외 생체 적합성 검사 분석은 불투명 및 불투명 골격에서 세포-물질 상호 작용을 분석할 수 있는 유용한 도구를 제공합니다.

예비 결과는 설명 새로운 핵 이식뿐만 아니라 좋은 댐핑 기능을 가지고뿐만 아니라 SCP-1 세포와 생체 적합성 인 것으로 나타났다. 임플란트의 제조 공정 동안, 강한 부식성 및 독성 물질 (윤활제, 매염제, 전기 연마 용액)와 접촉한다. 간접 형광 염색하는 기술을 사용하여, 우리는 잔여 불순물을 시각화하고, 결과적으로, 골격에 물질 부하의 상당한 감소를 도시하는 클리닝 프로토콜을 최적화 할 수 있었다. (3)이 성립 세정 프로토콜의 효율을 나타낸다. 프로토콜 부 (6) 트랜스 상당한에 설명 된대로 셀 재 계면에서 발생하는 이벤트에 의해 결정된다 치환술 치료에 사용되는 임플란트의 성공.도 4는 도금의 24 시간 후 지지체에 부착 된 세포를 나타낸다SCP-1 세포의 fect...

여기에서는 불투명 티타늄 지지체에 세포 생존을 검출뿐만 아니라, 골격 불순물 일별을 검출하는 형광 기반 이미징 기술을 제시한다. 이 프로토콜은 비 투명 지지체에 세포 세포 또는 세포 상호 작용 금속을 묘화의 결점이 문제를 해결합니다.

Intervertebral disc degeneration and disc herniation is one of the major causes of lower back pain. Depletion of extracellular matrix, culminating in ...

이 실험의 전반적인 목표는 형광 이미징 기술을 사용하여 비투명 편직 티타늄 핵 임플란트의 미세 구조와 그 위의 세포 부착을 시각화하는 것입니다. 이 방법은 비투명 스캐폴드를 이용한 조직 공학 분석을 발전시킵니다. 이 기술의 한 가지 장점은 정의된 배양 조건하에서 스캐폴드 상의 세포 증식뿐만 아니라 세포 생존율을 추적할 수 있다는 점입니다.형광 염색과 이후의 시각화 과정이 까다롭기 때문에 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다. 기공 크기와 같은 개별 스캐폴드의 특성이 소요 시간에 영향을 줄 수 있으며, 스캐폴드의 형광 특성에 따라 사용할 형광단의 선택이 달라질 수 있습니다. 두께가 6 또는 7 mm인 스캐폴드를 최대 5개까지 50 mL 튜브에 넣고, 1회 세척 시 20분씩 총 3회 물로 세척합니다.실온에서 부드럽게 교반하며 이 과정을 진행하십시오. 다음으로, 동일한 조건에서 30 milliliters의 1% Triton X-100 용액으로 스캐폴드를 세척하십시오. 그 후, 물 세척을 두 번 더 수행하십시오.이제 스캐폴드를 시약 등급의 99% acetone, 99% isopropanol, 99% ethanol 순으로 차례대로 초음파 처리합니다. 각 초음파 처리 단계를 5분씩 두 번 수행합니다. 그런 다음, 스캐폴드를 증류수에서 3회 더 초음파 처리하여 총 15분 동안 수행합니다.스캐폴드를 보풀 없는 티슈 위에 올려놓고 실온에서 하룻밤 동안 공기 건조하여 마무리합니다. 다음 날, 121 °C, 15 PSI 조건에서 15분 동안 스캐폴드를 오토클레이브합니다. 세척이 제대로 되었는지 확인하기 위해 간접 형광법을 사용합니다.12-웰 플레이트의 한 웰에 갓 제조한 황-Rhodamine B 염색 용액 2000 microliters를 넣고, 핀셋을 사용하여 스캐폴드를 해당 웰로 옮깁니다. 그다지 RFP LED 큐브 필터 세트가 장착된 형광 현미경을 사용하여 스캐폴드의 네거티브 이미지를 촬영하고 고배율에서 불순물이 있는지 확인합니다. 생물안전작업대 내에서 깨끗한 스캐폴드들을 24-웰 플레이트의 웰로 옮깁니다.각 웰에 37 °C의 배양액 500 µL를 넣고, 스캐폴드를 15분 동안 담가둡니다. 그동안 배양액 1 mL당 Ad-GFP가 감염된 SEP1 세포 500,000개를 준비합니다. 15분 후, 스캐폴드에서 배양액을 완전히 흡입하여 제거하고, 100 µL의 세포 현탁액을 접종합니다.그 다음, 37 °C에서 30분 동안 배양합니다. 짧은 배양 후, 배양액 500 µL를 추가로 넣고 스캐폴드를 24시간 동안 배양합니다. 다음 날, 부착되지 않은 세포를 제거하기 위해 배양액을 교체합니다.그 후, GFP LED 큐브 필터 세트가 장착된 형광 현미경을 사용하여 스캐폴드 상에서 세포의 부착 및 퍼짐 정도를 평가합니다. 생사 염색(live-dead staining)을 위해, 먼저 이전과 동일하게 SEP1 세포를 스캐폴드에 플레이팅합니다. 24~48시간 후, 배양액을 완전히 흡입하여 제거하고 실온에서 5분 동안 DPBS로 스캐폴드를 세척합니다.이제 Calcein AM, Hoechst 33342 및 Ethidium homodimer가 포함된 배양액을 사용하여 세포를 염색합니다. 이 세 가지 형광 물질은 모두 빛에 민감하므로, 이후 과정에서 세포를 암소에 보관하는 것이 매우 중요합니다. 형광 물질이 스캐폴드 전체에 균일하게 분포될 수 있도록 세포를 30분 동안 배양합니다.특정 스캐폴드의 특성에 따라 이 배양 시간은 달라질 수 있습니다. 배양 후, 웰당 1 mL의 DPBS를 사용하여 세포를 3회 세척하십시오. 각 세척 과정은 실온에서 5분 동안 수행하십시오.세척 직후 형광 현미경을 사용하여 스캐폴드를 기록합니다. 시간에 따른 세포 생존율을 측정하려면 레사주린 전환 측정을 사용하십시오. 먼저, 24웰 플레이트에 배양된 SEP1 세포의 배양액을 완전히 흡입하여 제거하고, 웰당 500 microliters의 DPBS로 세포를 세척합니다.그 다음, 필요한 부피의 멸균된 resazurin 작업 용액으로 세포를 덮고, resazurin만 포함된 웰을 하나 추가합니다. 그 후, 세포를 37 °C에서 약 30분 동안 배양합니다. 배양 후, 각 웰에서 100 µL의 조건화된 상층액을 96-웰 플레이트로 옮겨 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 형광을 측정합니다.추가 배양을 위해 웰에서 resazurin을 제거하고, 1 mL의 DPBS로 3회 세척합니다. 각 세척은 상온에서 5분 동안 수행합니다. 3회 세척 후, 각 세포 웰에 500 µL의 배양액을 첨가하고, 추가적인 시간 경과 측정물을 위해 배양을 계속합니다.간접 형광 염색법을 사용하여 세척 프로토콜을 최적화하기 위해 세척 전 불순물을 기록하였습니다. 스캐폴드 상의 물질 부하가 유의하게 감소한 것은 기술된 세척 프로토콜의 효율성을 보여줍니다. 관절 성형술 치료에 사용되는 연속적인 임플란트의 성패는 세포-재료 계면에서 발생하는 사건들에 의해 결정됩니다.스캐폴드에 24시간 동안 부착시킨 후, SEP1 세포가 부착되었음을 확인하였습니다. 그 다음, 스캐폴드 상에서 일정 기간 동안의 세포 사멸 및 증식을 관찰하기 위해 형광 염료를 처리하였습니다. 생사 염색(Live-dead staining) 결과, 사멸한 세포에서는 적색 형광이, 살아있는 세포에서는 녹색 형광이 나타났으며 핵은 청색으로 염색되었습니다.또한, 레사주린(resazurin) 전환 분석법을 사용하여 스캐폴드 상의 세포 생존율을 정량화하였습니다. 2주 동안 스캐폴드가 있는 조건과 없는 조건에서 배양된 세포에 대한 데이터를 수집하였습니다. 이 절차를 수행할 때는 사용하는 형광체가 보유한 스캐폴드 및 현미경에 적합한지 확인하고 조정하는 것이 중요합니다.이 절차 이후에 면역형광 염색과 같은 다른 방법들을 적용하여 단백질의 존재나 신호 전달 경로의 활성화를 시각화할 수 있습니다. 이 기술의 함의는 인공관절 치환술 치료까지 확장되는데, 이는 생체 내에서 세포가 주변 조직과 상호작용하는 방식이 세포의 기능과 내구성을 결정하기 때문입니다.

imaging-cell-viability-on-non-transparent-scaffolds-using-example

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

Electrospun의 공사장 공중 발판은 조직 공학 응용 프로그램을위한 포스트 프로덕션을 처리할 수 있습니다. 여기 불임 (무균 생산 또는 멸균 포스트 생산)을 달성하기 위해하고 적절한 biomechanical 속성을 달성위한 두꺼운 공사장 공중 발판을 (멀티 layering이 열을 사용하거나 증기가 풀림으로) 제작을 위해, 복잡한 공사장 공중 발판을 (연속 회전으로) 회전하는 방법을 설명합니다.

조직 공학을위한 Electrospun의 Fibres의 Postproduction 처리

이 비디오에서는, 우리는 그들의 기능을 개선하고 세포의 이동을 제어하는​​ 다공성 금속 임플란트에 대한 수정 방법을 보여줍니다. 기술은 3D 및 기저막의 생산은 2-D에서 세포의 움직임을 제어하는​​ 모방에서 세포의 움직임을 제어하는​​ 기공 그라디언트의 개발을 포함한다. 또한, 혈액 단백질의 분석을 통해 생체의 모니터링 임플란트 통합을위한 HPLC 기반 방법이 설명되어 있습니다.

모공 그라디언트, 고분자 전해질 및 그들의 간접적 인 모니터링과 금속 임플란트의 멀티 스케일 변경<em&gt; 생체 내</em

혈관은 성공적인 조직 공학의 접근 방법의 핵심입니다. 따라서, 신뢰성있는 기술은 조직 구조에서의 혈관 망의 발달을 평가하기 위해 필요하다. 여기서 우리는 시각화 및 생체 내에서 혈관 생성을 정량화하기 위해 간단하고 비용 효율적인 방법을 제시한다.

전체 피부 결함 모델은 생체의 혈관 신생을 평가하기<em&gt; 생체</em

동물의 희생까지 생체 내에서 엔드 - 투 - 엔드 문합 및 실시간 디지털 평가를 사용하여 양의 경동맥에 조직 설계된 선박 (TEVs)의 상호 위치 배치를위한 단계별 프로토콜입니다.

티슈 엔지니어링 혈관 이식 및 이후의 이식을위한 수술 기법<em&gt; 생체</em&gt; 모니터링

엔지니어링된 마이크로 채널이 있는 뼈대와 같은 템플릿을 만드는 단계별 일반 프로세스가 제공됩니다. 템플릿의 높은 흡수 및 유지 능력은 마이크로 채널을 통한 모세관 작용으로 입증됩니다.

마이크로 채널로 독특한 모세관 액션 뼈 같은 템플릿 대형 나폴레옹 결함의 복원에 대한 세포의 모집을 향상시킬 수 있습니다

생체 활성 및 기계적으로 신뢰할 수 있는 금속 골격은 다공성 Ti 제조를 위한 동적 동결 주조와 Ti 골격의 코팅 및 치밀화의 두 가지 공정으로 구성된 방법을 통해 제작되었습니다. 밀집화 공정은 간단하고 효과적이며 기능적으로 등급이 매겨진 골격 제작에 적용할 수 있습니다.

바이오 메디컬 응용 프로그램을위한 기계적 조정 및 생리 활성 금속 비계의 제조

여기에 제시된 것은 혈관 및 기타 관 구조의 조직 공학에 적합한 중공 비계의 한 단계 제작을 위한 사용이 간편한 코어/쉘, 3차원 생체 인쇄 설정입니다.

관 구조의 조직 공학을 위한 코어/쉘 인쇄 비계

이 논문은 이전에 설명한 3차원 콜라겐 기반 스캐폴드에 신경모세포종 세포주를 파종하고, 미리 결정된 기간 동안 세포 성장을 유지하고, 다양한 실험 목표를 충족하도록 적응할 수 있는 여러 세포 성장 및 세포 행동 분석 및 다운스트림 애플리케이션을 위한 스캐폴드를 검색하는 데 필요한 단계를 나열합니다.

콜라겐 기반 스캐폴드를 사용한 신경모세포종의 3차원 체외 생체모방 모델

이 연구에서는 식물 기반 생체 재료의 탈세포화, 물리적 특성화, 이미징 및 생체 내 이식 방법과 스캐폴드의 세포 파종 및 분화 방법을 자세히 설명합니다. 설명된 방법을 통해 뼈 조직 공학 응용 분야를 위한 식물 기반 생체 재료를 평가할 수 있습니다.

뼈 조직 엔지니어링을 위한 탈세포화된 사과 유래 스캐폴드 , In Vitro 및 In Vivo

이 프로토콜은 3D 레이저 프린팅을 사용하여 이식형 통합 이미징 창을 제작하는 방법을 설명합니다. 창은 마이크로 스캐폴드와 결합 된 마이크로 렌즈 시스템으로 구성됩니다. 이 방법은 생체 적합성 감광액 SZ2080의 이광자 중합(2PP)을 연속적인 순서로 포함하여 제조 효율성과 서로 다른 구성 요소 간의 정렬을 최적화합니다.

Advanced In Vivo Imaging을 위한 미세 구조 이미징 창에 통합된 이식형 광학 장치의 미세 제작

학습하세요 형광 이미징 기술을 사용하여 비투명 니트 티타늄 임플란트에서 세포 부착과 생존을 시각화하는 방법을. 이 기술은 조직 공학 분석을 향상시키고 세포-재료 상호작용을 이해하는 데 도움을 줍니다.

비 투명 공사장 공중 발판에 이미징 세포 생존 - 소설 니트 티타늄 임플란트의 예를 사용하여

더 많은 동영상 탐색