Name: 담관의 보행을 연구하기위한 Whole-mount Immunohistochemical method의 사용 Suncus murinus (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-15T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: 학습하세요 Suncus murinus의 담관 신경 분포를 시각화하는 전체 장착 면역조직화학법. 이 간단한 기술은 작거나 불규칙한 내장 기관의 신경 분석에 적용하여 연구자들이 다양한 종의 내장 신경 분포를 연구할 수 있게 합니다.

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모든 실험 절차는 도쿄 도립 대학 동물 애호 관리위원회 (IACUC)의 승인을 받았습니다. 실험실 동물 의 관리와 사용을위한 안내서와 동물 보호에 관한 캐나다위원회 의 실험 동물 의 관리와 사용 안내서에 따라 동물을 수용하고 취급했습니다. 우리는 일본 동경 메트로폴리탄 대학교 (Functional Morphology Laboratory) 프런티어 보건 과학부에서 사육되고 유지 된 동물들을 사용했습니다. 1. 동물 배려 및 주거 <ol><li> 폐쇄 형 번식 식민지에서 7 S. murinus (암컷 3 마리와 체중 70 ~ 90g의 4 마리)를 얻습니다. </li><li> 종이 스트립이 들어있는 나무 둥지 상자가있는 플라스틱 케이지에서 이유 후 (출생 후 20 일) 개별적으로 S. murinus를 감금하십시오. 전통적으로 컨디셔닝 된 동물 룸 (23-27 ° C), 습도 조절 장치, 12시 12시 (h : 12시 12 분)의 암흑 사이클을 유지하십시오. 공급 commerc송어 알갱이와 물을 자유롭게 먹는다. </li></ol> 2. 조직 준비 <ol><li> 4 % (w / v) 파라 포름 알데히드 (PFA)를 준비하기 위해 PFA 40g을 0.01M 인산염 완충 생리 식염수 (PBS, pH 7.4) 1,000mL에 녹인다. 흄 찬장에서 용액이 깨끗해질 때까지 와동을 사용하여 혼합하십시오. 4 % PFA O / N를 4 ℃에서 보관하십시오. 주의 : PFA를 취급 할 때는 적절한 개인 보호 장비 (PPE)를 착용하십시오. </li><li> 동물을 관류 및 고정하기 위해 에테르로 마취 한 다음 somnopentyl (pentobarbital sodium, 0.6 mL / kg bodyweight)을 복강 내에 주입하십시오. </li><li> 동물이 완전히 마취 된 후, 메스로 복강을 열고 3cm 정도의 중간 선 복부 절개를 만듭니다. 대동맥을 절개하는 동안 대정맥을 절개하면서이 동맥 분기점 바로 위의 복부 대동맥에 복강 내 카테터를 삽입하여 장골 동맥을 만든다. </li><li> somnopentyl을 주사하십시오 (그래서 pentobarbital1.0 mL / kg 체중). 완전한 안락사 후, 0.01 M PBS (pH 7.4)로 관류시킨 다음 흄 찬장에서 4 % PFA로 관류시킨다. </li><li> 관류 후, 흰 네오프렌 라텍스 (증류수 (DW)가있는 희석 된 흰색 네오프렌 라텍스 3 : 2) 2 ~ 3 mL를 혈관에 라벨을 붙이도록 주사합니다. </li><li> 간, 담낭, 총 담관, 십이지장 및 췌장을 포함한 복부 기관을 관련 신경 및 혈관과 함께 추출합니다. </li><li> 담낭에 약 12 ​​mL의 파란색 네오프렌 라텍스 (희석 한 흰색 네오프렌 라텍스 10 mL에 파란색 잉크 한 방울 넣기)를 담낭에 약 0.1 mL 주입하십시오. </li><li> 전체 마운트 면역 염색을 위해 4 ℃에서 4 % PFA로 밤새 수정하십시오. 주의 : PFA는 유독합니다. PFA를 직접 취급하지 마십시오. PFA는 연기 찬장에서 사용해야합니다. </li></ol> 3. Whole-mount Immunohistochemistry 참고 : 세척, 항체 배양 및 착색을 포함하여 프로토콜 전반에서 the 시편은 4 ℃에서 또는 RT에서 가볍게 흔들어 고정 장치에 남아 있어야합니다 . <ol><li> 1 일 : 잠재적 인 내인성 퍼 옥시 다제의 효소 처리 및 불 활성화 <ol><li> DW 4x로 준비된 시험편을 RT에서 적당한 크기의 유리 병에 1 시간 씩 씻으십시오. PFA를 제거하기 위해 시료를 nutator에서 조심스럽게 흔들어주십시오. 솔루션을 교환 할 때 표본이 손상되지 않도록하십시오. </li><li> 1 % (w / v) 오르토과 요오드 산을 준비하려면 DW 100 mL에 1 g의 오르토 요오드 산을 용해시킨다. </li><li> 내재 peroxidase 반응을 방지하기 위해 RT에서 20 분 동안 1 % orthoperiodic 산성에서 표본을 품어. </li><li> 0.04 mol / L Tris-HCl 완충액 (pH 7.6) 100 mL에 파파인 0.004 g을 녹여 0.004 % (w / v)의 파파인을 준비한다. </li><li> DW로 표본을 RT에서 10 분 동안 씻으십시오. </li><li> 부드러운 흔들림이있는 항온조에서 37 ° C에서 2 시간 동안 새로 준비한 0.004 % 파파인으로 표본을 배양하십시오. </li><li> D로 표본을 씻는다.W에서 50-60 분 동안 처리 하였다. </li><li> 4 ° CO / N에서 4 % PFA에 검체를 보관하십시오. </li></ol></li><li> 2 일째 : 효소 처리 <ol><li> 보관 된 시험편을 DW로 4 시간 동안 RT에서 1 시간 씩 씻으십시오. </li><li> 부드러운 흔들림이있는 항온조에서 37 ° C에서 2 시간 동안 새로 준비한 0.004 % 파파인으로 표본을 배양하십시오. </li><li> DW로 표본을 RT에서 50-60 분 동안 씻으십시오. 4 ° CO / N에서 4 % PFA에 검체를 보관하십시오. </li></ol></li><li> 3 일째 : 동결 치료 <ol><li> 위와 같이 저장된 표본을 DW 4x로 각각 1 시간 동안 RT에서 씻으십시오. </li><li> 2.5 g, 5 g, 10 g의 자당을 각각 0.01 M PBS 100 mL에 녹여 2.5 % (w / v), 5 % (w / v), 10 % (w / v) pH 7.4). </li><li> 2.5 % (w / v), 5 % (w / v) 및 10 % (w / v) 자당에 각각 30 분 동안 표본을 담그십시오. </li><li> -20 ° C에서 30-60 분 동안 표본을 동결시킨 다음 RT에서 완전히 녹입니다. 3x 사이클을 반복하십시오. </li><li> 피2 % Triton X-100 (v / v)을 다시 채우고 0.01 M PBS (pH 7.4) 100 mL에 2 mL의 Triton X-100을 첨가한다. </li><li> 4 % CO / N에서 2 % Triton X-100에 시험편을 보관하십시오. </li></ol></li><li> 주 4 : 일차 항체 배양 <ol><li> BSA (Bovine Serum Albumin) 0.2g, Triton X-100 0.3mL 및 sodium azide 0.1g을 0.01M PBS (pH 7.4) 100mL에 녹여 1 차 항체 희석액을 준비한다. 주의 : 나트륨 아자 이드는 매우 독성이 있습니다. 흡입과 접촉은 피해야합니다. 적절한 PPE를 착용하십시오. </li><li> 1 차 항체 (NFP) 1 : 600을 상기 희석 완충액 (단계 3.4.1)에서 희석한다. 검체가 Nator 항체로 4 ° C에서 3 ~ 6 일 동안 배양하여 표본이 nutator에서 부드럽게 흔들리지 않게하십시오. 더 큰 표본은 배양 시간을 늘려야합니다. </li></ol></li><li> 이차 항체 배양 <ol><li> RT에서 각각 1 시간 동안 PBS 4x에서 검체를 씻어서 항체가 결합되지 않은 항체를 제거합니다. </li&gt; <li> 0.2 g의 BSA와 0.3 mL의 Triton X-100을 0.01 M PBS (pH 7.4) 100 mL에 녹여 2 차 항체 희석액을 준비한다. </li><li> 희석 버퍼 (단계 3.5.2)에서 보조 항체 (peroxidase - 접합, 친화 - 정제 양 항 마우스 IgG - HRP) 1 : 600을 희석. 검체를 2 차 항체와 함께 4 ° C에서 3 일 동안 배양하고 검체를 nutator에 부드럽게 흔들어 놓습니다. </li></ol></li><li> 천연색 <ol><li> 짙은 냄새가 나는 곳에서 0.05 mol / L Tris-HCl 완충액 (pH 7.6) 100 mL에 3,3&#39;- 디아 미노 벤지딘 테트라 히드로 클로라이드 (DAB) 0.002 g을 넣고 용액을 어둡게 유지하여 DAB 착색 용액을 조제한다. </li><li> 각각 1 시간 동안 PBS에서 4x RT로 시료를 씻으십시오. </li><li> 갓 준비된 DAB 착색 용액에 30 % H 2 O 2 10 μL를 넣고 4 ° C / N 용액 또는 3 일 동안 incubate 한 후 nutator에서 부드럽게 흔들어 준다. </li><li> pla로 반응 중지최적의 염색 강도에 도달하면 0.04 % 나트륨 아자 이드로 PBS로 표본을 넣는다. 참고 :이 단계까지 나트륨 아자 이드의 사용을 피하십시오. 이는 양 고추 냉이 퍼 옥시 다제를 억제하기 때문입니다. </li></ol></li><li> 얼룩진 조직 이미징 <ol><li> PBS가 담긴 페트리 유리 접시 (높이 5cm, 직경 10cm)에 조심스럽게 표본을 옮긴다. 실체 현미경에 장착 된 카메라를 사용하여 전체 장착 이미지를 캡처하십시오. 참고 : 전체 마운트 스테인드 조직은 투명 유리 접시에 PBS에 완전히 담근 채로 이미지해야합니다. </li></ol></li></ol>

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</ol>

저자는 아무런 이해 상충이 없다고 선언합니다.

이 작품은 neurofilament 단백질에 대한 항체를 사용하여 extrahepatic 담즙 관의 innervation의 시각화를위한 실험 절차를 설명합니다. 이 프로토콜은 쿠라 타니 (Kuratani)와 다나카 (Tanaka) 1 , 2 , 3 에 의해 기술 된 프로토콜로부터 수정되었습니다. 이 실험에서는 전체 마운트 염색 접근법이 2 ~ 3 주 동안 계속되므로 각 실험에 대한 타임 라인을 계획하십시오. 동결 / 해동 과정을 제외하고 조직을 담는 용기는 항상 nutator에서 회전해야합니다. 특히 1 차 항체 및 2 차 항체와 함께 항온 처리하는 동안 시험편을 반응 용액에 균일하게 노출시키기 위해 견본을 시험관에서 회전시키면서 냉장 보관실에 놓았다. 몇 가지 솔루션 - 1 % (w / v) 오르토과 요오드 ...

집 사향 갈기 , Suncus murinus , 주문 Insectivora과 가족 Soricidae에 속한다. 이 작은 포유 동물은 동남 아시아 전역에 분포하며 인간의 거주지 또는 소 펜 4 근처에 위치한 잔디와 풀밭에 서식합니다. 이 종은 마우스, 쥐 및 토끼와 같은 다른 실험 동물보다 인간과 더 유사한 일반적인 형태학적인 특성을 나타낸다. 이전에, S. murinus neurofilament protein (NFP)에 대한 말초 신경 마커를 이용한 whole-mount immunostaining은 췌장 6 , 주요 십이지장 유두 7 , 유두 8 , 담낭 5 및 간외 담도 9 에서 말초 신경을 표지하기 위해 사용되었습니다. NFP는 성숙한 신경 세포 뼈대의 일부인 거대 분자 복합체입니다. 신경 필라멘트 관련 단백질NFP와 접합체 사이의 상호 작용을 매개한다. 효소 기능과 링커 단백질의 구조는 NFP 10 에 의해 조절됩니다. NFP 복합체는 NF-L (70 kDa), NF-M (150-160 kDa) 및 NF-H (200 kDa)의 세 가지 폴리 펩타이드로 이루어져 있습니다. NFP는 중추 신경계와 말초 신경계에서 신경 세포의 축색 돌기에서 발견 될 수 있습니다. 항 인간 NFP 항체는 중추 신경계와 말초 신경계의 축삭을 표지하는 것으로 나타났습니다. 해부학 적 및 전기 생리 학적 연구 결과에 의하면 괄약근, 담낭 및 근위부 위장관은 11 , 12 , 13 , 14 로 연결되어 있음이 입증되었습니다. 그러나, 그들의 연결 연결의 형태 학적 특징은 아직 정의되지 않았다. 이 연구는 S. murinus bil의 innervation을 표시하기 위해 whole-mount immunohistochemical 염색법을 사용하는 방법을 보여줍니다NFP 항체가있는 iary tract.

<table><tbody><tr><td>orthoperiodic acid</td><td>Wako</td><td>162-00732</td><td></td></tr><tr><td>papain</td><td>Wako</td><td>164-00172</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 (BSA)</td><td>Wako</td><td>010-15131</td><td></td></tr><tr><td>아지드</td><td>Nacalai 나트륨 Tesque</td><td>312-33</td><td></td></tr><tr><td>신경 필라멘트 단백질 (NFP) 항체</td><td>Dako</td><td>M0762, lot 089, 클론 : 2F11</td><td></td></tr><tr><td>peroxidase-conjugated 친화성 정제 양 안티 마우스 IgG-HRP</td><td>MBL</td><td>코드 330</td><td></td></tr><tr><td>3,3'-디아미노벤지딘 테트라하이드로클로라이드(DAB)</td><td>Wako</td><td>349-00903</td><td></td></tr><tr><td>이미다졸</td><td>시그마</td><td>I-0125</td><td></td></tr></tbody></table>

담관의 보행을 연구하기위한 whole-mount immunohistochemical method의 사용<em&gt; suncus murinus</em

Using a Whole-mount Immunohistochemical Method to Study the Innervation of the Biliary Tract in Suncus murinus

이 작품은 전체 마운트 immunohistochemistry 얼룩 방법을 자세하게 설명합니다, 신경 섬유 단백질 항체를 사용하여 Suncus murinus ( S. murinus 의 담즙 기관의 innervation을 표시하기 위해 &#160; ). 먼저 표본을 S. murinus 에서 해부시키고 4 % 파라 포름 알데히드 (PFA)에 고정시켰다. 둘째, 효소 처리 및 잠재적 인 내재적 퍼 옥시 다제 불 활성화가 수행되었다. 그 다음, 시험편을 1 차 항체, 항 - 신경 필라멘트 단백질 항체에 3-6 일 동안 노출시켰다. 이어서, 양 고추 냉이 과산화 효소가 접합 된 2 차 항체와 함께 항온 배양 하였다. 표적을 3,3&#39;- 디아 미노 벤지딘 (DAB) 기질과 반응시켜 발색 반응을 나타내었다. 이 방법은 모든 내장 기관의 신경 분포 분석에 적용 할 수 있습니다. 또한,이 프로토콜은 다른 뉴런 항체를 테스트하기 위해 적응할 수 있지만, 항체의 최적화es가 먼저 수행되어야합니다. 이 방법은 원래 Kuratani와 Tanaka 1 , 2 , 3 에 의해 도입되었습니다.

그림 1 - 4 는 S. murinus의 간외 담관에서 NFP 양성 신경 섬유에 대한 전형적인 결과를 보여줍니다. NFP에 대한 항체는 간외 담도 ( 그림 1 ), 담낭 ( 그림 2 ), 상부 담관 ( 그림 3 ) 및 십이지장 유두 부위 ( 그림 4 )의 전체 이미지에서 높은 특이도 및 최소 배경. 표본의 모든 조직에 대해, 모양과 크기에 관계없이, tegmental 신경은 동시에 염색 수 있습니다. 간외 담도의 신경 분포 외에도 식도와 위의 미주 신경의 진행 및 분포 밀도...

Suncus murinus 의 외 간성 담도계에서 neurofilament 단백질 발현을 시각화하기위한 whole-mount immunohistochemical 접근법 . 여기에 제시됩니다. 이 프로토콜은 S. murinus 또는 다른 종의 모든 내장 기관의 innervation을 분석하는 데 사용할 수 있습니다.

담관의 보행을 연구하기위한 Whole-mount Immunohistochemical method의 사용<em&gt; Suncus murinus</em

This work describes the whole-mount immunohistochemistry staining method in detail, using neurofilament protein antibody to label the innervation of the ...

본 절차의 전반적인 목적은 Suncus murinus의 담도 내 신경 분포를 시각화하기 위해 전장 면역조직화학 염색을 이용하는 것입니다. 이 방법은 여러 종의 내장 기관, 특히 표준 방법으로는 평가하기 어려운 불규칙하거나 작은 기관의 신경 분포를 분석하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 조작법이 간단하다는 점입니다.이 방법은 복잡한 절차가 필요하지 않으며 성공률이 높습니다. 본 실험 절차의 시연은 제 실험실의 대학원생인 Yidan Dai와 연구원인 Shuang-Qin Yi가 담당하겠습니다. 먼저 흄 후드 내에서 개별 PBS와 4% paraformaldehyde 관류를 통해 동물을 세척하는 것으로 시작하십시오.그런 다음 혈관을 표지하기 위해 흰색 네오프렌 라텍스 2~3mL를 관류 카테터를 통해 복부 대동맥으로 주입합니다. 관심 있는 모든 조직이 표지되면 복부 장기와 관련 신경 및 혈관을 적출합니다. 그런 다음 담도계를 표지하기 위해 담낭에 파란색 네오프렌 라텍스 약 0.1mL를 주입하고, 전체 마운트 면역염색을 위해 조직을 4% 파라포름알데히드에 넣고 4°C에서 하룻밤 동안 사후 고정합니다.다음 날 아침, 샘플을 유리 바이알로 옮기고 뉴테이터(nutator)를 사용하여 증류수로 상온에서 1시간씩 4회 세척합니다. 마지막 세척 후, 내인성 peroxidase 반응을 방지하기 위해 갓 제조한 1% orthoperiodic acid에서 20분 동안 상온으로 배양합니다. 그 다음, 샘플을 증류수로 상온에서 10분 동안 세척하고, 이어서 갓 제조한 0.004% papillon 용액에 넣어 37 °C 항온수조에서 부드럽게 흔들어주며 2시간 동안 배양합니다.배양이 끝나면, 증류수로 시편을 50분에서 60분 동안 세척합니다. 그런 다음 조직을 4% paraformaldehyde에 넣고 4°C에서 하룻밤 동안 보관합니다. 다음 날 아침, 방금 보여드린 것과 같이 증류수로 샘플을 세척한 후, 새로 준비한 papillon에서 2시간 동안 추가로 배양합니다.증류수로 시료를 50~60분 동안 더 세척한 후, 4% 파라포름알데히드(paraformaldehyde)에서 하룻밤 동안 고정합니다. 셋째 날 아침에 조직을 증류수로 4회 세척하고, 이어서 30분 간격으로 농도가 점진적으로 높아지는 세 단계의 수크로스(sucrose) 배양액에 순차적으로 침지합니다. 그 다음 시료를 -20°C에서 30~60분 동안 냉동시킨 후, 상온에서 완전히 해동합니다.세 번째 동결-해동 사이클 후, 샘플을 2% Triton X-100로 옮겨 4°C에서 하룻밤 동안 배양합니다. 다음 날 아침, 샘플을 목적하는 1차 항체가 들어 있는 용기에 옮기고, 표본의 크기에 따라 4°C의 너테이터(nutator)에서 3~6일 동안 부드럽게 흔들어 줍니다. 적절한 표지 기간이 지난 후, 실온의 PBS로 1시간씩 4회 세척하여 결합하지 않은 1차 항체를 제거하고, 4°C에서 3일 동안 부드럽게 흔들어 주며 적절한 2차 항체로 표본을 표지합니다.2차 항체 라벨링 기간이 끝나면, 시료를 PBS로 4회 세척합니다. 그 후, 갓 조제한 0.002% DAB 발색 용액 100 mL에 30% 과산화수소 10 µL를 혼합하여, 4°C에서 16~72시간 동안 부드럽게 흔들어주며 조직을 배양합니다. 최적의 염색 강도에 도달하면, 발색 반응을 중단시키기 위해 시료를 PBS 내의 0.04% sodium azide로 옮깁니다.그 다음 샘플을 신선한 PBS가 들어 있는 10 centimeter 페트리 접시에 조심스럽게 담근 뒤, 실체 현미경에 장착된 카메라를 사용하여 조직의 전체 마운트 이미지를 촬영합니다. 간외 담도 신경 분포의 시각화와 더불어, 뉴로필라멘트 양성 신경 섬유에 대한 항체 표지는 식도를 따라 위로 이어지는 미주신경의 경로와 분포 밀도를 명확하게 식별할 수 있게 합니다. 담낭의 혈관을 흰색 네오프렌 라텍스로 표지하면 주변 조직과 대비되어 얇은 신경 섬유증이 고대조로 나타나며, 담낭의 기저부보다 경부에서 더 높은 신경 분포 밀도가 관찰됩니다.상부 담관에서는 두 종류의 신경 다발이 라벨링되는데, 담관의 표면 및 내부에 유착되어 불규칙하고 조밀한 신경망을 형성하는 미세 신경 다발과 담관 표면에 평행하게 분포하는 더 두꺼운 신경 다발이 그것입니다. 총담관을 청색 네오프렌 라텍스로, 혈관을 백색 네오프렌 라텍스로 라벨링하면 총담관 끝부분과 십이지장 유두 영역의 얇은 신경 섬유를 시각화할 수 있습니다. 이 절차를 시도하기 전에 전체 과정이 완료되기까지 2~3주가 소요되므로 각 실험의 타임라인을 주의 깊게 계획하시기 바랍니다.용액을 교체할 때 표본이 손상되는 것을 방지하기 위해, 핀셋으로 표본을 꺼내는 대신 항상 용액을 따라내어 제거하십시오. 이 영상을 시청한 후에는 다양한 내장 기관 내의 여러 신경 표지에 이 기술을 적용할 수 있어야 합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

Cajal (ICC)의 중간 세포는 위장 (GI) 트랙트의 맥박 조정기 세포입니다. 그들은 평활근 세포와 GI 수축성 조절에 게시할 - ganglionic의 연결 섬유 사이의 복잡한 네트워크를 형성하고 있습니다. 여기, 우리는 immunofluorescence 횡단면 방법과 murine ICC 네트워크 전체 마운트 시각화를 제시한다.

마우스의 Cajal (ICC) 네트워크의 중간 세포의 시각화

physiologic angiogenesis 그 부족 일반 성인 vascularized 포유류의 조직은 학습하는 데 사용됩니다 수술 개입에 노출되지 않았습니다 (I) 개시 및 시험 요원의 intraperitoneal 관리 다음 angiogenesis의 개발, 그리고 체계적인 관리 아래와 angiogenesis의 (2) 수정 테스트 에이전트를 선택했습니다.

쥐 장간막의 Angiogenesis 분석

이 동영상은 유방암의 쥐 모델에서 종양 표적 항체의 생체 내 분포를 연구하기 위한 IVIL(in vivo immunofluorescence localization) 기술을 보여줍니다. 마우스에 종양 특이적 항체를 정맥 주사하면 종양을 외과적으로 분리하고 종양 조직 내 항체의 국소화를 생체 외 면역 염색을 통해 확인합니다.

항체 생체내 분포를 연구하기 위한 In Vivo Immunofluorescence 국소화 방법

이 비디오는 면역형광 및 컨포칼 현미경을 사용하여 신경 세포 집단 분포를 시각화하고 분석하기 위해 배아 쥐 위장관의 면역 염색을 보여줍니다.

Immunofluorescent staining of neuronal populations in the embryonic murine gastrointestinal tract(배아 쥐 위장관에서 신경 세포 집단의 면역형광 염색)

신생아 쥐 망막에서 혈관 신생을 조절 다른 유전자 또는 약물의 역할의 조사를 허용하는 혈관의 잘 특성화 생리 학적 모델을...

혈관을 조사하기 위해 신생아 마우스 망막의 전체 마운트 면역 형광 염색<em&gt; 생체 내</em

장 신경계(ENS)는 장 반사를 제어하는 장 벽에 위치한 뉴런과 신경교세포의 네트워크입니다. 이 프로토콜은 Ca2+ 이미징을 사용하여 ENS의 실시간 제제에서 장 뉴런 및 신경교세포의 활동을 기록하는 방법을 설명합니다.

장용 신경계의 제자리 칼슘 이미징에서

장 신경계는 장에서 증식하고 이동하고 군체화하는 신경능선세포에 의해 형성됩니다. 신경능선세포(neural crest cell)는 신경전달물질 표현형에 특이적인 마커를 가진 뉴런으로 분화합니다. 이 프로토콜은 장 신경계 신경전달물질 발현을 시각화하기 위해 쥐 배아 위장관을 해부, 고정 및 면역 염색하는 기술을 설명합니다.

쥐 장내 신경 시스템 개발을 시각화하는 면역 염색

Echocardiographic 시험 쥐에서 자주 사용 됩니다. 비싼 고해상도 초음파 장치가이 목적을 위해 개발 되었습니다. 이 프로토콜에서는 심장 형태를 결정 하는 조직학 형태학 분석 함께 저렴 한 echocardiographic 절차를 설명 합니다.

마우스의 심장 형태학의 echocardiographic 및 조직학 검사

우리는 마우스 간에서 담관 밀도의 정확한 정량화를 위한 다소 간단하고 민감한 방법을 제시합니다. 이 방법은 유전 및 환경 수정자의 효과와 담즙 질환의 마우스 모델에서 잠재적 인 치료의 효과를 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다.

마우스 간에서 담관 밀도 결정

우리는 거꾸로 회전 디스크 공초점 현미경 검사법에 의해 뮤린 소장의 내장 영상을 사용하여 GFP 표지된 γδ IELs를 구상하는 방법을 기술합니다. 이 기술은 최대 4 시간 동안 점막 내의 살아있는 세포의 추적을 가능하게하고 장 내 면역 상피 상호 작용의 다양한 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

뮤린 소장에서 상피 내 림프구의 활력 영상

학습하세요 Suncus murinus의 담관 신경 분포를 시각화하는 전체 장착 면역조직화학법. 이 간단한 기술은 작거나 불규칙한 내장 기관의 신경 분석에 적용하여 연구자들이 다양한 종의 내장 신경 분포를 연구할 수 있게 합니다.

담관의 보행을 연구하기위한 Whole-mount Immunohistochemical method의 사용

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