Name: 보호 그룹 산 - 불안정의 보존에 적합한 니켈 쉬프 - 자료의 가수 분해 복잡한 사용 조건 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: 배우세요 니켈 쉬프-베이스 착물에서 비천연 아미노산을 EDTA 수분해로 분리하고 Fmoc 보호기를 도입하는 방법을. 산성 불안정한 측쇄 보호기를 보존하며 온화한 조건에서 고상 펩타이드 합성에 적합한 아미노산을 효율적으로 제조할 수 있습니다.

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미끄러운 바위 대학에서 제공하는 자금. 우리는 그들의 통찰력 T 보론 III (미끄러운 바위 대학)와 C하니 (펜실베니아 대학)에 감사드립니다.

니켈 쉬프-자료 단지 1. 가수 분해 <ol><li> 실온에서 250 mL의 둥근 바닥 플라스크를 교반하면서 N, N- 디메틸 포름 아미드 (DMF) 40 mL를 상기의 Ni-PBP - 쉬프 염기 착체 1 밀리몰 녹인다. </li><li> 수성 0.2 M EDTA 용액의 pH 4.5의 60 mL를 넣고. </li><li> 자기 교반 막대를 이용하여 플레이트를 교반 밤새 합성 용액을 교반한다. 쉬프 염기 복합 가수 분해로, 색상은 흰색에 깊은 적색에서 이동합니다. </li><li> 모든 적색 착색의 부재에 의해 나타낸 바와 같이, 반응 종결 후, 250 mL의 분액 깔때기에 반응 옮긴다. </li><li> 50 mL의 디클로로 메탄을 추가 분액 깔때기 캡 섞는다. 폐기물 비이커에 유기 세정 배수. PBP 및 잔여 니켈 PBP-쉬프 염기 단지를 제거하려면이 과정을 세 번 반복합니다. 250 mL의 둥근 바닥 플라스크에 남아있는 수성 층을 수집. </li></ol> 가수 분해 아미노산의 2 FMOC 보호 <ol><li&gt; 고체 중탄산 나트륨을 사용하여 pH 7로 상술 한 단계 150에서 분리 된 수성층을 조정한다. pH가 정기적으로 산도 테스트 스트립을 사용하여 확인합니다. </li><li> 용액에 168 mg의 탄산 수소 나트륨 (2.00 밀리몰, 2 당량)을 첨가하고 자기 교반 막대를 이용하여 교반하고 플레이트를 교반한다. </li><li> 10 ML 비얼에서 디 옥산 최소량 (약 4-5 ㎖)에 337 mg의 N의 FMOC -hydroxysuccinimide 에스터 (1.00 밀리몰, 1 당량)을 녹인다. 수용액이 용액을 전송하고, 밤새 교반 하였다. </li><li> 반응물을 밤새 교반시킨 후, 1 M 염산으로 pH 2로 생성 된 용액을 산성화. pH가 정기적으로 산도 테스트 스트립을 사용하여 확인합니다. </li><li> 250 ㎖의 분액 깔때기에 옮기고, 반응을 50 ㎖의 에틸 아세테이트를 추가한다. 상기 분별 깔때기 캡 잘 혼합하고, 250 mL의 삼각 플라스크에 유기층을 수집한다. 유기 추출물을 결합,이 과정을 두 번 더 추가를 반복합니다. 마그네슘 sulfat 대략 3g 합한 유기 추출물을 건조이자형. </li><li> 조 FMOC 보호 된 아미노산을 수득하는 회전 증발기를 사용하여 합한 유기 추출물을 농축시킨다. </li></ol>

<ol><li>Wang, J., Shi, T., Deng, G., Jiang, H., Liu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Enantio-+and+Diastereoselective+Mannich+Reactions+of+Chiral+Ni%28II%29+Glycinates+with+amino+sulfones.+Efficient+asymmetric+synthesis+of+aromatic+%CE%B1%2C%CE%B2-diamino+acids%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Org.+Chem%22%5BJournal%5D)">Highly Enantio- and Diastereoselective Mannich Reactions of Chiral Ni(II) Glycinates with amino sulfones. Efficient asymmetric synthesis of aromatic α,β-diamino acids.</a> J. Org. Chem. 73 (21), 8563-8570 (2011).</li>
<li>Wang, J., Lin, D., Zhou, S., Ding, X., Soloshonok, V. A., Liu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetric+synthesis+of+sterically+and+electronically+demanding+linear+%CF%89%2C-trifluoromethyl+containing+amino+acids+via+alkylation+of+chiral+equivalents+of+nucleophilic+glycine+and+alanine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Org.+Chem%22%5BJournal%5D)">Asymmetric synthesis of sterically and electronically demanding linear ω,-trifluoromethyl containing amino acids via alkylation of chiral equivalents of nucleophilic glycine and alanine.</a> J. Org. Chem. 76 (2), 684-687 (2011).</li>
<li>Wang, J., Zhou, S., Lin, D., Ding, X., Jiang, H., Liu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+diastereo-+and+enantioselective+synthesis+of+syn-%CE%B2%2C-substituted+tryptophans+via+asymmetric+Michael+addition+of+a+chiral+equivalent+of+nucleophilic+glycine+and+sulfonylindoles%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Highly diastereo- and enantioselective synthesis of syn-β,-substituted tryptophans via asymmetric Michael addition of a chiral equivalent of nucleophilic glycine and sulfonylindoles.</a> Chem. Commun. 47 (29), 8355-8357 (2011).</li>
<li>Belokon, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+catalytic+synthesis+of+%CE%B1%2C-amino+acids+under+phase-transfer+conditions+with+a+novel+catalyst%2Fsubstrate+pair%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Highly efficient catalytic synthesis of α,-amino acids under phase-transfer conditions with a novel catalyst/substrate pair.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 40 (10), 1948-1951 (2001).</li>
<li>Zhou, S., Wang, J., Lin, D., Zhao, F., Liu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enantioselective+synthesis+of+2-substituted-tetrahydroisoquinolin-1-yl+glycine+derivatives+via+oxidative+cross-dehydrogenative+coupling+of+tertiary+amines+and+chiral+nickel%28II%29+glycinate%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Org.+Chem%22%5BJournal%5D)">Enantioselective synthesis of 2-substituted-tetrahydroisoquinolin-1-yl glycine derivatives via oxidative cross-dehydrogenative coupling of tertiary amines and chiral nickel(II) glycinate.</a> J. Org. Chem. 78 (22), 11204-11212 (2013).</li>
<li>Belokon, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+%CE%B1%2C-amino+acids+via+asymmetric+phase+transfer-catalyzed+alkylation+of+achiral+nickel%28II%29+complexes+of+glycine-derived+Schiff+bases%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Synthesis of α,-amino acids via asymmetric phase transfer-catalyzed alkylation of achiral nickel(II) complexes of glycine-derived Schiff bases.</a> J. Am. Chem. Soc. 125 (42), 12860-12871 (2003).</li>
<li>Ueki, H., Ellis, T. K., Martin, C. H., Soloshonok, V. A. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ejoc.200200688/abstract">Efficient large-scale synthesis of picolinic acid-derived nickel(II) complexes of glycine.</a> Eur. J. Org. Chem. 2003 (10), 1954-1957 (2003).</li>
<li>Dener, J. M., Fantauzzi, P. P., Kshirsagar, T. A., Kelly, D. E., Wolfe, A. B. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/op010204f">Large-scale syntheses of Fmoc-protected non-proteogenic amino acids: useful building blocks for combinatorial libraries.</a> Org. Process Res. Dev. 5 (4), 445-449 (2001).</li>
<li>Cruz, L. J., Beteta, N. G., Ewenson, A., Albericio, F. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/op049917z">&#34;One-pot&#34;, preparation of N-carbamate protected amino acids via the azide.</a> Org Process Res. Dev. 8 (6), 920-924 (2004).</li>
<li>Hart, J. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHart%2C+JR+%22Ullmann%27s+Encyclopedia+of+Industrial+Chemistry%22">Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry</a>. , Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. (2000).</li>
<li>Adamson, J. G., Blaskovich, M. A., Groenevelt, H., Lajoie, G. A. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/jo00010a050">Simple and convenient synthesis of tert-butyl ethers of Fmoc-serine, Fmoc-threonine, and Fmoc-tyrosine.</a> J. Org. Chem. 56 (10), 3447-3449 (1991).</li>
<li>Seyfried, M. S., Lauber, B. S., Luedtke, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple-turnover+isotopic+labeling+of+Fmoc-+and+Boc-protected+amino+acids+with+oxygen+isotopes%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Lett%22%5BJournal%5D)">Multiple-turnover isotopic labeling of Fmoc- and Boc-protected amino acids with oxygen isotopes.</a> Org. Lett. 12 (1), 104-106 (2010).</li>
<li>Bonke, G., Vedel, L., Witt, M., Jaroszewski, J. W., Olsen, C. A., Franzyk, H. <a target="_blank" href="https://www.thieme-connect.de/DOI/DOI?10.1055/s-2008-1067171">Dimeric building blocks for solid-phase synthesis of α,-peptide-β,-peptoid chimeras.</a> Synthesis. 2008 (15), 2381-2390 (2008).</li>
</ol>

저자가 공개하는 게 없다.

상기 프로토콜은 두 가지 중요한 단계를 중성 pH 조건이 절연 아미노산 후속 FMOC 보호 하에서 니켈 쉬프 염기 착체의 아미노산 골격의 분리를 촉진하는 능력에 유용하다. 첫 번째 단계는 복잡에서 아미노산의 방출을 용이하게하기 위해 EDTA를 함유하는 DMF / 물 용액을 교반 포함한다. 잔류 착체 또는 유기 부산물 쉽게 추출하여 제거 될 수있다. 이 프로토콜의 두 번째 단계에서는 첫 번째 단계에서 추출에 의해 분리 한 후, 수층에있는 아미노산의 FMOC 보호를 포함한다. 우리는 약간의 산도에 민감한 사이드 체인 보호 그룹에 대한 필요가있다 상당한 유연성을 제공, 4.5 ~ 7.5의 pH 범위에서이 절차를 수정할 수있는 능력을 증명하고있다. 이 방법의 하나의 잠재적 인 한계는 절연 아미노산 FMOC 보호 반응 낮은 농도이다. 촉진 전자로fficient 가수 분해 반응 조건은 (1 밀리몰 규모 반응을 60 mL)에 상당한 양의 수성 EDTA 용액을 필요로하는 기판 EDTA 대하...

자연에서 발견 스물 개 자연적으로 발생하는 아미노산과 다를 자연스러운 아미노산 (UAA의) 베어링 측쇄 응용 프로그램의 넓은 범위에서 유틸리티를 발견했다. 이러한 UAA 년대의 합성 단, 측쇄의 구조 및 아미노산 주쇄의 입체 화학에 따라 어려울 수있다. 니켈 쉬프 염기 착체의 맥락에서 글리신의 크 본드 활성은 α, β 디아 미노 산 1, 2 또는 헤테로 측쇄 플루오르 UAA의 베어링을 포함한 아미노산 유도체의 다양성을 생성하기 위해 사용되었다. 삼 비 천연 측쇄를 첨가 한 후, UAA의 전형적 염산 (4)에 환류하여 쉬프 염기 착체로부터 제거하고,이어서 이온 교환 크로마토 그래피를 사용하여 분리되어 기능화. 일반적으로 효율적이지만,이 프로토콜은 발생고상 펩티드 합성 (SPPS)에서 사용되기에 부적합 할 수있다 미노 산. SPPS의 자연 그대로 이들 보호기의 UAA와의 분리를 방지 산해리 측쇄 보호기의 존재 및 일반적인 니켈 쉬프 염기 분해 조건 강산성 성질을 필요로한다. 우리의 지식으로, 단 하나의 대체 분해 방법이보고되어있다 : 에틸렌 디아민 테트라 아세트산 (EDTA) 및 하이드라진을 사용 승온에서, 그 자체가 몇몇 측쇄는 프탈이 미드로서 보호기에 적합하지 않을 수 5 조건있다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/55677/55677fig1.jpg" /> 도 1 : 니켈 2+, PBP, 글리신 (의 Gly)에서 니켈의 Gly-PBP의 합성. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55677/55677fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> </A&gt; 여기서 우리는, 니켈의 Gly-PBP (도 1) 니켈 쉬프 염기 착체의 가수 분해하는 방법을보고한다. 니켈 2+, 글리신, 및 피리딘 -2- 카르 복실 산 (2- 벤조일 페닐) - 아마이드 (PBP), 6 유래의이 복합체는 UAA의 다양한 합성에 유용한 플랫폼 증명 용이하다되었습니다 액세스 두 단계의 합성 경로를 사용. 이러한 착체의 합성 문헌 (7) - 이미 기재 고 수율이다. 우리의 결과는 6 이하의 UAA 베어링 산해리 측쇄가 보호기와 사용에 적합한 중성 pH 조건 약산성에서 EDTA를 이용하여 가수 분해 조건의 적용을 보여준다. 가수 분해 후, 생성 된 수성 용액을 분리 할 수 있고 FMOC 보호 된 아미노산을 수득 표준 FMOC 보호 상태 (도 2)에 즉시 실시. 그림 2 : 가수 분해 및 Ni-PBP-의 Gly에서 고립 된 아미노산의 FMOC 보호. 반응 조건 : 전. EDTA (12 당량), 4.5의 pH; II. pH 7로 세척하고 아세트산 에틸 조정; III. FMOC - 오스 (1 당량)의 NaHCO3 (2 당량). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55677/55677fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

<table><tbody>발표된 프로토콜 <tr><td>DMF</td><td>Fisher</td><td>D119-4</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher</td><td>S311-100</td><td></td></tr><tr><td>디클로로메탄</td><td>아크로스</td><td>AC610050040</td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨</td><td>Fisher</td><td>S233-500</td><td></td></tr> Fmoc-OSu Chem-Impex"00147"<tr><td></td><td></td>에서 합성된 Ni-PBP-Gly <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>다이옥산</td><td>피셔</td><td>D111-500</td><td></td></tr><tr><td>염산</td><td>피셔</td><td>A144-500</td><td></td></tr><tr><td>에틸 아세테이</td>트 <td>아크로스</td><td>AC610060040</td><td></td></tr><tr><td>황산 마그네슘</td><td>피셔</td><td>M65-500</td><td></td></tr><tr><td>ZEOPrep 60ECO 실리카 겔</td><td>ZEOChem</td><td></td><td></td></tr><tr><td>헥산</td><td>피셔</td><td>3200250.650.443</td><td></td></tr><tr><td>크로마토그래피 컬럼,</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH 테스트 스트립,</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>회전 증발기</td><td></td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>250mL 분리 깔때기</td><td></td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>250mL 원형 바닥 플라스크</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>, 교반 막대</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>, 교반 플레이트</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

보호 그룹 산 - 불안정의 보존에 적합한 니켈 쉬프 - 자료의 가수 분해 복잡한 사용 조건

Hydrolysis of a Ni-Schiff-Base Complex Using Conditions Suitable for Retention of Acid-labile Protecting Groups

비 천연 아미노산은 일반적으로 자연에서 보지 측쇄 작용기를 함유하는 아미노산 점점 합성 펩티드 서열에서 발견된다. 몇몇 비 천연 아미노산의 합성은 종종 니켈 양이온에 의해 안정화 쉬프 염기로 이루어지는 전구체의 사용을 포함한다. 비정상적인 측쇄이 쉬프 염기 착체에서 발견되는 아미노산 골격 상에 설치 될 수있다. 생성 된 비 천연 아미노산은 전형적 강산성 용액으로 환류를 이용하여, 쉬프 염기의 복잡한 분리하여 가수 분해 될 수있다. 비 천연 아미노산은 마이크로파를 이용한 고상 펩티드 합성에 사용되는 이러한 강산성 조건 산해리 필요한 측쇄 보호기를 제거 할 수있다. 본 연구에서, 우리는 효율적인 가수 분해 및 니켈 쉬프 염기 착체로부터 분리 아미노산 후속 FMOC 보호를 제시한다. 본 연구에 제시된 가수 분해 조건은 산해리의 유지에 적합IDE 쇄 보호기 및 비 천연 아미노산의 다양한 기판에 적용 할 수있다.

우리는 가혹한 pH 조건 없이도 쉬프 염기의 수성 가수 분해 효율을 허용 할 수있는 니켈의 Gly-PBP 복합체에서의 Ni 2+의 제거를 가정. EDTA가 저렴하고 잘 연구 킬레이트 제이기 때문에, 10 우리는 니켈 PBP-의 Gly의 용액에 EDTA를 첨가함으로써 복합체의 분해를 촉진 니켈 2+ 이온의 킬레이트 화를 촉진한다고 가정 하였다. 단독 EDTA 효과적으로 착물의 가수 분해를 촉진 할 수 있다는 우리의 이론을 테스트하기 위해서 pH를 4.5 수용액, 수성 EDTA 디 나트륨 염 수용액의 미 조정의 pH를 EDTA 당량 증가 실온에서 DMF 중의 Ni-PBP-의 Gly의 용액을 실시 . 가수 분해 반응의 진행은 용액의 색을 관찰함으로써 모니터링 될 수있다; PBP는 격리...

여기서, 우리는 효율적인 가수 분해 및 니켈 쉬프 염기 착체로부터 분리 아미노산 후속 FMOC 보호를 제시한다. 산해리 측쇄 보호기의 유지가 요구되는 경우 여기 제시된 가수 분해 조건을 사용하기에 적합하다. 이 기술은 천연 아미노산의 다양한 기판에 적용 할 수있다.

Unnatural amino acids, amino acids containing side-chain functionalities not commonly seen in nature, are increasingly found in synthetic peptide ...

본 절차의 전반적인 목표는 니켈 shift base 복합체로부터 비천연 아미노산을 편리하게 분리하고, 이후 이들 아미노산을 Fmoc로 보호하는 것입니다. 이 방법은 비천연 아미노산을 보다 쉽게 합성하는 방법과 같은 유기 화학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 산에 민감한 측쇄 보호기가 있는 아미노산을 니켈 shift base 복합체로부터 분리할 수 있다는 점입니다.니켈 복합체의 유기 용매 용해도가 제한적이기 때문에 이 방법에 익숙하지 않은 연구자들은 어려움을 겪을 수 있습니다. DMF는 복합체를 용해할 수 있고 물과 혼합 가능하므로 가장 적절한 용매입니다. 우리는 무기화학 교수인 Dr.Boron으로부터 니켈과 금속 킬레이트제에 관한 통찰을 얻었을 때 이 방법에 대한 처음 아이디어를 갖게 되었습니다.이 절차를 시작하려면 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 40 mL의 DMF를 넣습니다. 니켈 PBB Schiff base 복합체 1 mmol을 상온에서 교반하며 DMF에 용해시킵니다. 다음으로 pH 4.5인 0.2 M EDTA 수용액 60 mL를 첨가합니다.마그네틱 바와 교반기를 사용하여 용액을 하룻밤 동안 교반합니다. 반응이 완료되면 용액을 250 milliliter 분별 깔때기로 옮깁니다. DCM 50 milliliters를 추가합니다.그런 다음 분별 깔때기의 마개를 닫고 혼합합니다. 유기 세척액을 폐액 비커에 따라냅니다. DCM을 첨가하고 혼합한 후 유기 세척액을 제거하는 과정을 3회 반복합니다.그 후, 남은 수층을 250 milliliter 둥근 바닥 플라스크에 수집합니다. 먼저 고체 탄산수소나트륨을 사용하여 분리된 수층의 pH를 pH 7로 조정합니다. 다음으로 탄산수소나트륨 168 milligrams를 첨가합니다.마그네틱 스티어 바와 교반기를 사용하여 용액을 섞습니다. 중탄산나트륨 2당량을 첨가하기 위해 pH를 7로 조정하는 것이 매우 중요합니다. 이는 Fmoc 보호 반응을 촉진하기 위해 용액이 약염기성 상태여야 하기 때문입니다.10 milliliter 바이알에 337 milligrams Fmoc 및 hydroxysuccinimide ester와 5 milliliters의 dioxane을 넣어 녹입니다. 이 혼합물을 수용액으로 옮기고 밤새 교반합니다. 다음 날, 1 molar 염산을 사용하여 용액을 pH 2로 산성화합니다.이후 반응물을 250 milliliter 분별 깔때기로 옮깁니다. 50 milliliters FO-acetate를 첨가합니다. pH가 2 미만으로 떨어지지 않게 하는 것과 이 단계를 신속하게 완료하는 것이 중요합니다.그렇게 하지 않으면 곁사슬 보호기가 소실될 수 있습니다. 분별 깔때기의 마개를 닫고 잘 섞어줍니다. 그런 다음 유기층을 250 milliliter 삼각 플라스크에 수집합니다.에틸 아세테이트를 첨가하고, 혼합한 후 유기층을 수집하는 과정을 두 번 더 반복하여 유기 추출액을 합칩니다. 다음으로 약 3g의 황산마그네슘을 사용하여 합쳐진 유기 추출액을 건조합니다. 회전 증발기를 사용하여 합쳐진 유기 추출액을 농축함으로써 조(crude) Fmoc 보호 아미노산을 얻습니다.본 연구에서는 완만한 pH 조건 하에서 니켈 쉬프트 염기 복합체로부터 아미노산 골격을 분리한 후, 두 가지 핵심 단계를 거쳐 Fmoc 보호 반응을 수행합니다. 첫 번째 단계에서는 EDTA가 포함된 DMF 수용액을 교반하여 복합체로부터 아미노산의 방출을 촉진합니다. 방출된 아미노산을 분리 및 추출한 후, Fmoc 보호 조건에 노출시켜 Fmoc 보호 아미노산을 얻습니다.가수분해 반응의 진행 정도는 용액의 색상이 빨간색에서 흰색으로 변하는 것을 모니터링하여 추적합니다. EDTA가 8당량 미만으로 포함된 반응에서는 어느 정도의 색상 변화가 나타나지만 항상 불완전하게 진행됩니다. 반면, EDTA가 없는 반응에서는 색상 변화가 전혀 나타나지 않습니다.따라서 반응을 완결시키기 위해서는 최소 8당량의 EDTA가 필요합니다. 이어서 가수분해 반응의 유효 pH를 평가합니다. 상온에서 하룻밤 동안 교반했을 때, pH 4.5에서 7.5 범위의 조건에서 가수분해가 성공적으로 일어나는 것을 확인할 수 있습니다.이는 EDTA 가수분해의 유연성을 보여줍니다. 이후 다양한 측쇄 보호기를 가진 여러 아미노산을 사용하여 이러한 가수분해 조건의 타당성을 테스트합니다. 각 경우에 측쇄 보호기가 완전히 유지되었음을 proton NMR을 통해 확인하였습니다.이 기술을 숙달하면 적절하게 수행했을 때 48시간 이내에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 전체 과정에서 설명된 특정 pH 수준을 준수하는 것이 중요합니다. 이 절차 이후에는 산에 민감한 측쇄 보호기를 가진 다른 아미노산의 가수분해와 같은 다른 방법들을 수행하여, 이 기술이 다양한 기질에 대해 얼마나 유용한지와 같은 추가적인 질문들에 답할 수 있습니다.이 기술이 개발되면 유기 합성 분야의 연구자들이 산에 약한 측쇄 보호기를 가진 비천연 아미노산의 합성을 탐구할 수 있는 길이 열릴 것입니다. 이 영상을 시청한 후에는 완만한 pH 범위의 반응 조건을 사용하여 니켈 PPB 쉬프 염기 복합체로부터 아미노산을 분리하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 유기 용매, 특히 DMF를 사용하는 것은 매우 위험할 수 있으므로 이 절차를 수행하는 동안에는 항상 개인 보호 장구 착용과 같은 예방 조치를 취해야 함을 잊지 마십시오.

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연구

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Biochemistry

생화학

유기 리튬 시약의 안전하고 적절한 사용을 설명한다.

유기 리튬 시약을 사용하여 안전 리튬 화의 반응을위한 프로토콜

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Cryomilled 포유 동물 세포에서 단백질 단지 선호도 캡처

이 논문은 안정 동위원소 추적, 특정 세포 유형을 분리하기 위한 세포 분류 및 질량 분석법의 조합을 사용하여 여러 세포 유형의 복잡한 군집에서 세포 대사를 연구하는 방법을 설명합니다.

안정 동위 원소 추적을 사용하여 복잡한 세포 공동체의 정렬 된 부분 집단에서 대사를 측정하는 방법

고도로 채워진 마이크로미터 크기의 구성 요소를 포함하는 거대한 소포는 유용한 세포 모델입니다. 유중수(water-in-oil) 에멀젼 원심분리 방법은 캡슐화된 물질로 거대한 소포를 준비하기 위한 간단하고 강력한 도구입니다.

유 중수 에멀젼의 원심 분리에 의해 거 소포 캡슐화 미소 구의 제조

여기에 설명 된 수정 된 효모 하나 - 하이브리드 분석은 기능적 유전체학 연구를위한 이종 시스템에서 헤테로 머 단백질 복합체 - DNA 상호 작용을 연구하고 검증하기위한 고전적인 효모 1- 하이브리드 (Y1H) 분석법의 확장이다.

이성질체 단백질 복합체 -DNA 상호 작용 연구를위한 수정 된 효모 원 하이브리드 시스템

구 균 에서 탄수화물 기질 의무적인 단백질의 광범위 한 생 화 학적 및 구조 특성화를 수행 하기 위한 효율적인된 프로토콜 제공 됩니다.

탄수화물 전송 기질 바인딩 단백질 SP0092의 생 화 학적 및 구조적 특성

Toeprinting 목표 체 외에서 의 능력을 측정 하는 다양 한 조건에서 리보솜과 양식 번역 개시 복합물에 RNA를 복사할 수 있습니다. 이 프로토콜 toeprinting 포유류 RNA에 대 한 메서드를 설명 하 고 모자-종속 및 IRES 기반 번역 공부 하는 데 사용할 수 있습니다.

번역 개시 포유류 mRNAs에 복잡 한 대형의 Toeprinting 분석

배우세요 니켈 쉬프-베이스 착물에서 비천연 아미노산을 EDTA 수분해로 분리하고 Fmoc 보호기를 도입하는 방법을. 산성 불안정한 측쇄 보호기를 보존하며 온화한 조건에서 고상 펩타이드 합성에 적합한 아미노산을 효율적으로 제조할 수 있습니다.

보호 그룹 산 - 불안정의 보존에 적합한 니켈 쉬프 - 자료의 가수 분해 복잡한 사용 조건

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