Name: Phthalic 산 에스테 르-바인딩 DNA Aptamer 선택, 특성, 및 전기 화학 Aptasensor 응용 프로그램 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-21T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 33 s
Description: 학습하세요 소수성 소분자에 결합하는 그룹 특이적 DNA aptamer를 선택하고 특성화하는 방법을. 전기화학적 aptasensor 개발에 활용하여 환경 오염 물질을 민감하게 검출할 수 있습니다.

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우리는 국립 자연 과학 재단 (21675112), 베이징 교육 위원회 (KZ201710028027)와 Yanjing 젊은 학자 프로그램의 수도 사범 대학의 과학 및 기술 계획의 프로젝트에서에서 재정 지원에 대 한 감사.

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<li>Sun, J. Z., He, H., Liu, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+phthalic+acid+esters+in+Chinese+white+spirit+using+dispersive+liquid-liquid+microextraction+coupled+with+sweeping+beta-cyclodextrin-modified+micellar+electrokinetic+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sep+Sci%22%5BJournal%5D)">Determination of phthalic acid esters in Chinese white spirit using dispersive liquid-liquid microextraction coupled with sweeping beta-cyclodextrin-modified micellar electrokinetic chromatography.</a> J Sep Sci. 37 (13), 1679-1686 (2014).</li>
<li>Yilmaz, P. K., Ertas, A., Kolak, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+determination+of+seven+phthalic+acid+esters+in+beverages+using+ultrasound+and+vortex-assisted+dispersive+liquid-liquid+microextraction+followed+by+high-performance+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sep+Sci%22%5BJournal%5D)">Simultaneous determination of seven phthalic acid esters in beverages using ultrasound and vortex-assisted dispersive liquid-liquid microextraction followed by high-performance liquid chromatography.</a> J Sep Sci. 37 (16), 2111-2117 (2014).</li>
<li>Sun, R., Zhuang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ultrasensitive+gold+nanoparticles+improved+real-time+immuno-PCR+assay+for+detecting+diethyl+phthalate+in+foodstuff+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">An ultrasensitive gold nanoparticles improved real-time immuno-PCR assay for detecting diethyl phthalate in foodstuff samples.</a> Anal Biochem. 480, 49-57 (2015).</li>
<li>Sun, R. Y., Zhuang, H. S. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2014/ay/c4ay02088j">A sensitive heterogeneous biotin-streptavidin enzyme-linked immunosorbent assay for the determination of di-(2-ethylhexyl)phthalate (DEHP) in beverages using a specific polyclonal antibody.</a> Anal Methods. 6 (24), 9807-9815 (2014).</li>
<li>Zhou, L., Lei, Y., Zhang, D., Ahmed, S., Chen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+ultra-sensitive+monoclonal+antibody-based+enzyme-linked+immunosobent+assay+for+dibutyl+phthalate+in+human+urinary%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">An ultra-sensitive monoclonal antibody-based enzyme-linked immunosobent assay for dibutyl phthalate in human urinary.</a> Sci Total Environ. 541, 570-578 (2016).</li>
<li>Shen, J., Li, Y., Gu, H., Xia, F., Zuo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+development+of+sandwich+assay+based+on+the+nanobiotechnologies+for+proteins%2C+nucleic+Acids%2C+small+Molecules%2C+and+ions%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Rev%22%5BJournal%5D)">Recent development of sandwich assay based on the nanobiotechnologies for proteins, nucleic Acids, small Molecules, and ions.</a> Chem Rev. 114 (15), 7631-7677 (2014).</li>
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<li>Nguyen, V. -T., Kwon, Y. S., Gu, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aptamer-based+environmental+biosensors+for+small+molecule+contaminants%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Aptamer-based environmental biosensors for small molecule contaminants.</a> Curr Opin Biotechnol. 45, 15-23 (2017).</li>
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<li>Yang, K. -A., Pei, R., Stojanovic, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+selection+and+amplification+protocols+for+isolation+of+aptameric+sensors+for+small+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">In vitro selection and amplification protocols for isolation of aptameric sensors for small molecules.</a> Methods. 106, 58-65 (2016).</li>
<li>Jing, M., Bowser, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+measuring+aptamer-protein+equilibria%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Methods for measuring aptamer-protein equilibria: a review.</a> Anal. Chim. Acta. 686 (1-2), 9-18 (2011).</li>
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<li>Mendonsa, S. D., Bowser, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+evolution+of+functional+DNA+using+capillary+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">In vitro evolution of functional DNA using capillary electrophoresis.</a> J Am Chem Soc. 126, 20-21 (2004).</li>
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<li>Cho, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+selection+of+DNA+aptamers+through+microfluidic+selection+and+high-throughput+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Quantitative selection of DNA aptamers through microfluidic selection and high-throughput sequencing.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 15373-15378 (2010).</li>
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<li>Song, K. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticle-based+colorimetric+detection+of+kanamycin+using+a+DNA+aptamer%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticle-based colorimetric detection of kanamycin using a DNA aptamer.</a> Anal Biochem. 415 (2), 175-181 (2011).</li>
<li>Yang, Z., Ding, X., Guo, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0925400517313278">Second generation of signaling-probe displacement electrochemical aptasensor for detection of picomolar ampicillin and sulfadimethoxine.</a> Sens Actuators B. 253 (2017), 1129-1136 (2017).</li>
<li>Lou, X., Zhao, T., Liu, R., Ma, J., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembled+DNA+monolayer+buffered+dynamic+ranges+of+mercuric+electrochemical+sensor%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Self-assembled DNA monolayer buffered dynamic ranges of mercuric electrochemical sensor.</a> Anal Chem. 85 (15), 7574-7580 (2013).</li>
<li>Zhao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoprobe-enhanced%2C+split+aptamer-based+electrochemical+sandwich+assay+for+ultrasensitive+detection+of+small+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Nanoprobe-enhanced, split aptamer-based electrochemical sandwich assay for ultrasensitive detection of small molecules.</a> Anal Chem. 87 (15), 7712-7719 (2015).</li>
<li>Lou, X., He, L. A. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0925400507006181">Surface passivation using oligo(ethylene glycol) in ATRP-assisted DNA detection.</a> Sens Actuators,B. 129 (1), 225-230 (2008).</li>
</ol>

저자는 경쟁 금융 관심을 선언합니다.

Aptamers의 뛰어난 이점 중 하나입니다 vivo에서 immunoreactions를 통해 항 체를 생성 하는 동안 그들은 체 외에서 방법을 SELEX 통해 식별 됩니다. 따라서, 항 체는 생리 적 조건에 제한 하는 반면 aptamers 잘 설계 된 실험 조건에서 원하는 대상으로 선택할 수 있습니다.
무료 시퀀스에서 바운드 시퀀스의 분리를 촉진 하기 위하여 몇 가지 수정 된 SELEX 최근 보고 되었습니다, 어떤 모 세관 전기 이동 법30, 마이크로31, 자석 / 아크릴 구슬 / agarose 구슬14, 등, nitrocellulose 필터 또는 선호도 열 보다 효율적인 분리를 달성을 대체 했다. 이러한 기법 중 구슬 기반 방법을 가장 널리 사용 된 aptamer 선택 때문에 그들의 간단한 작은 분자 ...

급속 한 경제 발전, 함께 산업화, 그리고 도시 건설, 환경 오염의 가속 그 어느 때 보다 더 심각 하다. 일반적인 환경 오염 물질 중 금속 이온, 독 소, 항생제, 농약, 내 분 비 분리기와 지속적인 유기 오염 물질 (Pop)을 포함합니다. 금속 이온과 독 소, 외 다른 오염 물질은 작은 분자는 꽤 congeners의 다양 한 구성 됩니다. 가장 독성 Pop 비페닐 (PCBs), 다 환 방향족 탄화수소 (PAHs), 폴 리 브롬 화 비페닐 에테르 (PBDEs), polychlorinated dibenzo-p-다이옥신 (PCDDs), polychlorinated dibenzofuran (PCDFs)를 포함 하는 예를 들어 고 phthalic 산 에스테 르 (PAEs)1,-2모든 많은 congeners의 구성. 작은 분자 검출 크로마토그래피/질량 분석 기반 기술을 응용 프로그램3,4,,56의 그들의 다양성 때문에 의해 주로 수행 되었습니다. 사이트 검색에 대 한 항 체 기반 방법을 최근 개발된7,,89되었습니다 합니다. 그러나, 이러한 방법은 특정 느리기에 대 한 매우 구체적인 이기 때문에, 여러 테스트를 수행 합니다. 더 심각한 것은 소설 congeners 성장 빠른 시간에 그들의 항 체를 생성할 수 없습니다. 따라서, 한 테스트에 모든 congeners의 총 레벨 모니터링 하 그룹 관련 바이오 센서의 개발 환경 오염 상태를 평가 하기 위한 귀중 한 통계를 제공할 수 있습니다.
최근, 핵 산 aptamers 널리 적용 된 다양 한 바이오 센 싱 플랫폼 다양 한 이온과 단백질 및 세포10,11 작은 분자에서 대상 인식의 그들의 기능 때문에 인식 요소 ,12. Aptamers는 시험관에 의해 호출 된 메서드 ligands의 체계적인 발전 지 수 농축 (SELEX)13,14을 통해 식별 됩니다. SELEX는 약 1014-1015 시퀀스 포함 임의의 합성 단일 가닥 oligonucleotide 도서관으로 시작 합니다. 무작위 라이브러리의 크기는 RNA 또는 DNA 후보 구조의 다양성을 보장합니다. 전형적인 SELEX 프로세스 라이브러리는 높은 친 화력 및 특이성 대상 시퀀스에 농축 될 때까지 농축의 여러 라운드로 구성. 최종 농축된 수영장 다음 시퀀스와 분리 상수 (Kd) 및 간섭 물질과 같은 다른 기술에 의해 결정 하는 잠재력에 대 한 선택 필터 바인딩, 친화성 크로마토그래피, 표면 플라스몬 공명 (SPR), 등. 15
매우 빈약한 물 가용성과 표면 동원 정지에 대 한 기능 그룹의 부족, pop aptamer 선택은 이론적으로 어렵습니다. SELEX에 대 한 중요 한 발전 aptamers 발견 가속화 했습니다. 그러나, 팝에 대 한 그룹별 aptamers의 선택은 하지 아직 알려졌다. 지금까지 특정 느리기에 대 한 높은 특이성으로 PCB 바인딩 DNA aptamers만 확인 된16되었습니다. PAEs는 주로 폴 리 염화 비닐 물자, 탄력 있는 플라스틱, 따라서 가소제 역할 하드 플라스틱에서 폴 리 염화 비닐을 변경에 사용 됩니다. 일부 PAEs 내 분 비 분리기로 확인 되었습니다, 심각한 손상을 일으킬 수 간 및 신장 기능, 남성 정자의 운동 성 감소 하 고 비정상적인 정자 형태와 고환 암17발생할 수 있습니다. 화합물-도 그룹 전용 PAE 바인딩 aptamers 보고 되었습니다.
이 작품의 목표 그룹-특정 DNA aptamers PAEs, 팝의 대표 그룹 등 매우 소수 작은 분자를 선택 하기 위한 대표적인 프로토콜을 제공 하는 것입니다. 우리는 또한 환경 오염 감지를 위한 선택 된 aptamer의 응용 프로그램을 보여 줍니다. 이 프로토콜 다른 소수 작은 분자의 aptamer 발견에 대 한 지침과 통찰력을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>UV-2550</td><td>Shimadzu, 일본</td><td></td><td>프로토콜, 섹션 3.8.2</td></tr><tr><td>DNA Engnine Thermal cycler, PTC0200</td><td>BIO-RAD</td><td></td><td>섹션 3.5.1.2 및 3.5.2</td></tr><tr><td>C1000 Touch</td><td>BIO-RAD</td><td></td><td>섹션 5.3.6 및 6.3</td></tr><tr><td>VMP3 다중 채널 전위차</td><td>Science, Claix, France</td><td></td><td>섹션 7.4, 7.8 및 7.11</td></tr><tr><td>에폭시 활성화 세파로스 6B</td><td>GE Healthcare(미국 뉴저지주 피스카타웨이</td>)<td>10220020</td><td>argarose beads, section 2.3 and 3.3</td></tr><tr><td>Dynabeads M-270 carboxylic acid magnetic beads</td><td>Invitrogen, USA</td><td>420420</td><td>magnetic beads,section 5.2. and 5.3</td></tr><tr><td>Premix Taq Hot Start Version</td><td>Takara,Dalian,China</td><td>R028A</td><td>polymerase, section 3.5.1.1</td></tr><tr><td>PARAFILM Sealing Membrane</td><td>Bemis, USA</td><td>PM-996</td><td>section 3.6.5</td></tr><tr><td>Lambda Exonuclease</td><td>Invitrogen, USA</td><td>EN0561</td><td>section3.7.1.2.The 10 &times; 반응 버퍼는 공급자에 의해 &lambda; 엑소뉴클레아제와 함께 제공됩니다.</td></tr><tr><td>Dr. GenTLE Precipitation Carrier Takara</td><td>, Dalian, China</td><td>9094</td><td>section 3.6.2 and 3.8.1</td></tr><tr><td>UNIQ-10 PAGE DNA recovery kit</td><td>Sangon Biotech (Shanghai)</td><td>B511135</td><td>section 4.2</td></tr><tr><td>SYBR Gold nucleic acid gel stain</td><td>Invitrogen, USA</td><td>1811838</td><td>nucelic acid stain dye, section 3.5.1.5</td></tr><tr><td>SYBR Premix Ex Taq II</td><td>Takara, Dalian, China</td><td>RR820A</td><td>중합효소 혼합 중합효소 및 dNTP, 섹션 5.3.5</td></tr><tr><td>2-(N-모르폴리노)에탄술폰산(MES)</td><td>시그마-알드리치</td><td>CAS: 1132-61-2</td><td>섹션 5.2.1</td></tr><tr><td>1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 염산염(EDC)</td><td>인비트로겐, 미국</td><td>CAS: 25952-53-8</td><td>섹션 5.2.2</td></tr><tr><td>N-하이드록시숙신이미드(NHS)</td><td>시그마-알드리치</td><td>6066-82-6</td><td>섹션 5.2.3</td></tr><tr><td>메르 캅토 헥산올 (MCH)</td> <td>시그마 - 알드리치</td><td>CAS : 1633-78-9</td><td>섹션 7.7</td></tr><tr><td>금 전극</td><td>상하이 Chenhua</td><td>CHI101</td><td>섹션 7.4.- 7.11</td></tr><tr><td>트리스 (2- 카르 복시 에틸) 포스핀 하이드로 클로라이드 (TCEP)</td> <td>시그마 - 알드리치</td><td>CAS : 51805-45-9</td><td>섹션 7.5</td></tr><tr><td>O- (2- 메르 캅토 에틸) -O'- 메틸 -헥사 - (에틸렌 글리콜)</td> <td>시그마 - 알드리치</td><td>CAS : 651042-82-9</td><td>섹션 7.7</td></tr><tr><td>디 에틸 헥실 프탈레이트 (DEHP)</td> <td>중국 국립 계측 연구소</td><td>CAS : 117-81-7</td><td>섹션 7.11</td></tr><tr><td>트윈 20</td><td>시그마 -알드리치</td><td>CAS : 9005-64-5</td><td>폴리 옥시 에티 렌 (20) 소르 바이탄 모노 라우 레이트</td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>시그마 알드리치</td><td>CAS : 9002-93-1</td><td>비이온 계 활성제</td></tr><tr><td>PBS</td><td>시그마-알드리치</td><td>P5368</td><td>10 mM 인산염 완충제 1M NaCl, pH 7.4 함유</td></tr></tbody></table>

phthalic 산 에스테 르-바인딩 dna aptamer 선택, 특성, 및 전기 화학 aptasensor 응용 프로그램

Phthalic Acid Ester-Binding DNA Aptamer Selection, Characterization, and Application to an Electrochemical Aptasensor

지속적인 유기 오염 물질의 주요 그룹의 phthalic 산 에스테 르 (PAEs) areone. PAEs의 그룹 전용 탐지는 congeners의 급속 한 성장으로 인해 매우 원한다. 점점 더 인식 요소 바이오 센서 플랫폼에 적용 된 DNA aptamers 하지만 선택 aptamers PAEs, 등 매우 소수 성 분자 표적으로 보고 거의. 이 작업 그룹-특정 DNA aptamers PAEs 선택 하도록 설계 된 비드 기반 방법을 설명 합니다. 아미노 그룹 공업화 틸 프 탈 레이트 (DBP-NH2) 앵커 대상 합성 했 고 에폭시 활성화 agarose 구슬에 움직일 immobilization 매트릭스의 표면에서 phthalic 에스테 르 그룹의 표시를 허용 하 고 따라서 그룹 전용 바인더의 선택. 자력 분리와 결합 하는 정량적 중 합 연쇄 반응에 따라 aptamer 후보자의 분리 상수 하 고. 상대 선호도 다른 PAEs에 aptamers의 선택도 경쟁 분석 실험에 의해 결정 되었다 aptamer 후보 DBP NH2 미리 경계 했다 연결 된 자석 구슬, 가진 외피에 상쾌한에 발표 테스트 PAEs 또는 다른 잠재적인 간섭 물질입니다. 경쟁 분석 결과 표면 동원 정지에 대 한 기능 그룹이 했다 PAEs 중 손쉬운 선호도 비교를 제공 하기 때문에 적용 되었다. 마지막으로 우리 전기 aptasensor의 제작을 시연 하 고 bis(2-ethylhexyl) 프 탈 레이트의 磁 및 선택적 검출을 위해 사용. 이 프로토콜 다른 소수 작은 분자의 aptamer 발견에 대 한 통찰력을 제공합니다.

우리는 설계 및 아미노 그룹 공업화 틸 프 탈 레이트 (DBP-NH2) 앵커 대상 (그림 1 층)으로 합성. 우리는 다음 PAEs 클래식 대상 immobilization 기반 방법 (그림 2)에 따라는 DBP NH2 앵커 대상으로 사용 하 여 DNA aptamer 선택을 수행 합니다. 각 라운드에서 파일럿 PCR PCR (그림 3)의 주기 수를 최적화 하는 변성된 페이지를 사용 하 여 수행 되었다. 변성된 페이지, 기본 페이지 대신이 우리와 다른 동료 들을 발견 했다 높은 사이클 숫자에서 네이티브 젤에 의심 되 고 분자량 부산물 실제로 가교 복합물에 의해 형성 하기 때문에 좋습니다. 적당 한 크기의 시퀀스입니다. 따라서, 변성된 페이지의 밴드 강도 진정으로 올바른 제품의 금...

생체 외에서 선택 및 그룹 관련 phthalic 산 에스테 르-바인딩 DNA aptamers의 특성화에 대 한 프로토콜 제공 됩니다. 전기 aptasensor에서 선택 된 aptamer의 응용 프로그램이 포함 되어 있습니다.

Phthalic 산 에스테 르-바인딩 DNA Aptamer 선택, 특성, 및 전기 화학 Aptasensor 응용 프로그램

Phthalic acid esters (PAEs) areone of the major groups of persistent organic pollutants. The group-specific detection of PAEs is highly desired due to the ...

이 절차의 전반적인 목표는 소수성이 높은 소분자에 대한 그룹별 DNA 압타머를 선택하고 선택한 압타머를 사용하여 민감한 전기화학적 바이오센서를 개발하는 것입니다. 이 방법은 표적이 소수성이 높은 분자일 때 그룹 특이적 압타머를 선택하고 특성화하는 방법에 대한 압타머 선택 필드의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법의 가장 유용한 부분은 제목 감지를 위한 전기화학적 바이오센서의 개발입니다.이러한 바이오센서는 당사의 압타머 친화도 측정에도 작동해야 합니다. 반응을 시작하려면 정제된 압타머 PCR 산물에 100마이크로리터의 RNase-Free 물을 첨가합니다. 침전물이 용해될 때까지 혼합물을 소용돌이치십시오.람다 엑소뉴클레아제 반응은 염 농도에 민감하며 에탄올 침전이지만 다른 이소프로판올에 의해 증식해야 하는 생성물입니다. 5개의 마이크로 원심분리기 튜브, 5마이크로리터의 압타머 용액, 11마이크로리터의 Rnase 자유수 및 2마이크로리터의 10x 반응 완충액 각각에 넣습니다. 2마이크로리터의 Rnase 자유수와 Rnase 자유수에 2, 5, 8, 10단위의 람다 엑소뉴클레아제 용액을 각각 하나의 튜브에 추가합니다.부드러운 피펫팅으로 잘 섞습니다. 튜브를 섭씨 37도에서 35분 동안, 섭씨 80도에서 15분 동안 배양합니다. 그런 다음 튜브를 섭씨 4도에서 잡고 12%의 기본 페이지 젤을 준비합니다.각 튜브에 1마이크로리터의 로딩 염료와 4마이크로리터의 Rnase 자유수를 추가합니다. 기본 페이지 젤의 혼합물을 150볼트에서 45분 동안 실행합니다. 단일 가닥 DNA를 완전히 생성하는 데 필요한 최소 양의 람다 엑소뉴클레아제를 식별합니다.단일 가닥 DNA를 생성하기 위해 대규모 반응을 수행합니다. 테스트할 각 결합 대상에 대해 10마이크로리터의 평균 기능화된 DBP 코딩 마그네틱 비드를 500마이크로리터의 DBP-1 마이크로몰 용액 1개와 함께 회전하는 동안 실온에서 1시간 동안 배양합니다. 그런 다음 상등액을 버리십시오.PAE 결합 완충액 200마이크로리터 부분으로 비드를 4회 세척하고 10마이크로리터의 PAE 결합 완충액에 비드를 재현탁합니다. PAE 결합 완충액에서 10마이크로몰 결합 표적 테스트 분산액을 얻습니다. PAE 결합 완충액에서 소수성 표적을 분산시키는 데 적합합니다.이를 보장하기 위해, 라이브러리의 보강이 있으며, 친화도 테스트에서 선택되었습니다. 10마이크로리터의 DBP-1 코

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화학

SELEX의 프로토콜 설정에서 임의의 라이브러리 영역을 측면 고정 프라이머 시퀀스를 요구 바운드 리간드의 재생을 필요로 각각의 선택 여러 라운드를 구성. 이러한 고정 프라이머 시퀀스는 선택 프로세스 (잘못된 반응과 제외)을 방해할 수 있습니다. 여기 입문서없는 프로토콜을 제시한다.

랜덤 DNA 라이브러리를 사용하여 뇌관 - 무료 Aptamer 선택

"E - DNA"센서는 reagentless, 혈액 및 기타 복잡한 매트릭스에서 직접 도전 경우에도 실적이 전기 biosensors은 핵산, 단백질과 작은 분자 analytes 다양한 범위의 감지 적응되었습니다. 여기에는 센서의 제조 및 사용에 대한 일반적인 절차를 제시한다.

핵산, 단백질과 작은 분자의 Reagentless 감지를위한 전기 -의 DNA Biosensors의 제작

Google은 최근은 간단 세균 검출을위한 형광 분석 "을 믹스 앤 읽기"를 설정하는 데 적용할 수있는 형광 DNAzyme 프로브를 생성하기위한 새로운 접근 방식을보고했습니다. 이러한 특별한 유전자 프로브는이를 형광 신호 생성에 세균 검출을 번역 특정 세균에 의해 생산되는 원유 세포외 혼합물 (CEM)의 앞에서 발색단 - 수정의 DNA-RNA 키메라 기판의 절단을 catalyze. 이 보고서에서 우리는 "RFD-EC1"표시된 특정 DNAzyme 프로브는 모델 박테리아의 탐지를 위해 고용되는 핵심 실험 절차를...

형광 DNAzymes을 사용하여 박테리아의 탐지

조정 가능한 엄격성 마그네틱 비드 선택 방법을 기반으로 저분자 타겟에 대한 구조 스위칭 압타머를 선택하기 위한 프로토콜이 제공됩니다. 구조 스위칭 특성으로 선택된 Aptamers는 설명된 금 나노입자 분석과 같이 표적의 존재를 알리기 위해 구조적 변화가 필요한 분석에 유용합니다.

색채 금 나노 입자 분석에 적용 구조 전환 앱 타머를 선택하는 방법

MicroScale Thermophoresis(MST)는 압타머-표적 상호 작용을 특성화하는 민감한 기술입니다. 이 원고는 압타머-소분자 상호작용을 특성화하기 위한 MST 프로토콜을 설명합니다.

마이크로 열 영동을 사용하여 ATP에 앱 타머의 결합 부위를 매핑

브리 parahaemolyticus 감지 polylactic 산 안정, 금 나노 입자 수정, 모티브로 탄소 전극으로 구성 된 전기 화학 DNA 바이오 센서의 개발에 대 한 프로토콜 제공 됩니다.

Foodborne 병원 체를 검출 하는 전기 화학 DNA 바이오 센서의 개발

변경된 뉴클레아제 활성은 바이오마커로서의 잠재력을 기점으로 다른 인간 조건과 연관되어 있다. 이 논문에 제시된 모듈식 및 구현 방법론은 뉴클레아제 활성을 질병의 바이오마커로 활용하기 위한 특정 핵산 프로브를 선택할 수 있게 한다.

핵산 프로브를 이용한 뉴클레아제 활성의 운동 스크리닝

본 프로토콜은 샘플 준비, 실행 표준 및 샘플을 포함하여 DNA 압타머와 테트라사이클린 간의 결합의 연관성 및 해리 역학을 분석하고 결과 데이터를 해석하기 위한 등온 적정 열량측정법(ITC)의 사용을 설명합니다.

등온 적정 열량계를 사용하여 DNA 압타머와 테트라사이클린의 열역학적 및 동역학적 연관성 결정

항암 앱타머 개발에 필요한 단계는 표적에 대한 결합을 테스트하는 것입니다. 우리는 이 결합을 연구하기 위한 유세포 분석 기반 분석을 시연하며, 특정 단백질에 대해 음성 대조군 압타머와 양성 또는 음성 암세포를 포함하는 것의 중요성을 강조합니다.

항암 압타머의 선택성 및 특이성을 평가하기 위한 유세포분석 기반 세포 표면 단백질 결합 분석

현재 프로토콜은 표적을 검출하기 위해 빠른 3단계 압타머 기반 지수 증폭 분석의 사용을 보여줍니다. 샘플 준비, 신호 증폭 및 색상 현상은 카페인보다 테오필린의 존재를 인식하기 위해 이 시스템을 구현하기 위해 다룹니다.

3단계 G-Quadruplex 등온 지수 증폭 반응에 의해 촉진되는 Aptamer 기반 표적 검출

이 프로토콜은 형광 라이트업 압타머 DAP-10-42를 신호 리포터로 사용하는 분할 혼성화 프로브의 설계와 핵산 검출 및 단일 뉴클레오티드 치환이 있는 표적 간의 구별을 위한 응용 프로그램을 간략하게 설명합니다.

염기서열 특이적 핵산 분석을 위한 신호 리포터로 DNA 형광 라이트업 압타머를 활용하는 분할 혼성화 프로브

학습하세요 소수성 소분자에 결합하는 그룹 특이적 DNA aptamer를 선택하고 특성화하는 방법을. 전기화학적 aptasensor 개발에 활용하여 환경 오염 물질을 민감하게 검출할 수 있습니다.

Phthalic 산 에스테 르-바인딩 DNA Aptamer 선택, 특성, 및 전기 화학 Aptasensor 응용 프로그램

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