Name: GFP Lentivirus 불리고 Organoids 환자 파생 결 장 종양에서 경작에 의해 생성 된 Micrometastases의 고감도 검출 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-14T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: 배우세요 환자 유래 대장암 오가노이드에 GFP 렌티바이러스를 도입하여 마우스 체내 미세전이를 고감도로 검출하는 방법입니다. 이 기술은 종양 생물학 연구에 활용됩니다.

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이 일 준 텐도 대학 영 탐정 수상 (2013, 2014, 2015) 요, 공동 프로젝트 수상 (2013 및 2014) K. M.에 의해 지원 되었다 고 교육, 문화, 스포츠, 과학에서 과학 연구에 대 한 원조를 부여 하 고 기술, 일본 (Y. K.을 16 K 15625 및 16 K 15598 밀리에). 우리는 특히 유용한 토론 및 기술 지원에 대 한 부의 Coloproctological 수술 및 분자 병 리의 모든 구성원에 게 감사입니다. 우리 또한 orthotopic 이식 마우스 및 박사에 대 한 수술 절차에 관대 한 기술 지도 대 한 박사 히로유키 곤노 (하 마마 츠 대학 학교 의학) 및 박사 히데키 기타지마 (국제 대학 보건 및 복지)을 감사합니다. 에 대 한 기술적인 조언 수행 종양 organoid 문화 요시타카 마 (치 바 암 센터)

<ol><li>Siegel, R., Desantis, C., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+cancer+statistics%2C+2014%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Colorectal cancer statistics, 2014.</a> CA Cancer J Clin. 64 (2), 104-117 (2014).</li>
<li>Hidalgo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenograft+models%3A+an+emerging+platform+for+translational+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research.</a> Cancer Discov. 4 (9), 998-1013 (2014).</li>
<li>Aparicio, S., Hidalgo, M., Kung, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examining+the+utility+of+patient-derived+xenograft+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Examining the utility of patient-derived xenograft mouse models.</a> Nat Rev Cancer. 15 (5), 311-316 (2015).</li>
<li>Puig, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+personalized+preclinical+model+to+evaluate+the+metastatic+potential+of+patient-derived+colon+cancer+initiating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A personalized preclinical model to evaluate the metastatic potential of patient-derived colon cancer initiating cells.</a> Clin Cancer Res. 19 (24), 6787-6801 (2013).</li>
<li>van de Wetering, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+derivation+of+a+living+organoid+biobank+of+colorectal+cancer+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Prospective derivation of a living organoid biobank of colorectal cancer patients.</a> Cell. 161 (4), 933-945 (2015).</li>
<li>Fujii, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Colorectal+tumor+organoid+library+demonstrates+progressive+loss+of+niche+factor+requirements+during+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">A Colorectal tumor organoid library demonstrates progressive loss of niche factor requirements during tumorigenesis.</a> Cell Stem Cell. 18 (6), 827-838 (2016).</li>
<li>Fumagalli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissection+of+colorectal+cancer+progression+by+orthotopic+transplantation+of+engineered+cancer+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Genetic dissection of colorectal cancer progression by orthotopic transplantation of engineered cancer organoids.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (12), E2357-E2364 (2017).</li>
<li>O'Rourke, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+engineered+organoids+enables+rapid+generation+of+metastatic+mouse+models+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Transplantation of engineered organoids enables rapid generation of metastatic mouse models of colorectal cancer.</a> Nat Biotechnol. 35 (6), 577-582 (2017).</li>
<li>Roper, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+genome+editing+and+organoid+transplantation+models+of+colorectal+cancer+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">In vivo genome editing and organoid transplantation models of colorectal cancer and metastasis.</a> Nat Biotechnol. 35 (6), 569-576 (2017).</li>
<li>Kuo, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+colonization+competence+governs+colon+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Liver colonization competence governs colon cancer metastasis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 92 (26), 12085-12089 (1995).</li>
<li>Onuma, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+reconstitution+of+tumorigenesis+in+primary+intestinal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Genetic reconstitution of tumorigenesis in primary intestinal cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (27), 11127-11132 (2013).</li>
<li>Onder, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+E-cadherin+promotes+metastasis+via+multiple+downstream+transcriptional+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Loss of E-cadherin promotes metastasis via multiple downstream transcriptional pathways.</a> Cancer Res. 68 (10), 3645-3654 (2008).</li>
<li>Cespedes, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+microinjection+of+human+colon+cancer+cells+in+nude+mice+induces+tumor+foci+in+all+clinically+relevant+metastatic+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Orthotopic microinjection of human colon cancer cells in nude mice induces tumor foci in all clinically relevant metastatic sites.</a> Am J Pathol. 170 (3), 1077-1085 (2007).</li>
<li>Fujii, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+EBV-related+lymphoproliferative+lesions+arising+in+donor+lymphocytes+of+transplanted+human+tumor+tissues+in+the+NOG+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Anim%22%5BJournal%5D)">Characterization of EBV-related lymphoproliferative lesions arising in donor lymphocytes of transplanted human tumor tissues in the NOG mouse.</a> Exp Anim. 63 (3), 289-296 (2014).</li>
</ol>

저자는 공개 관심의 잠재적인 충돌 있다.

CRC PDX 모델 기본 종양의 성장 연구에 널리 고용은, 비록이 모델 인지 종양 전이 조사에 적용 또한 되지 아직 되었습니다 완전히 해명 했습니다. 자연 스러운 전이 간, 다양 한 보고 콜론 PDX 모델4,10의 폐에서 거의 감지 했다. 높은 감도 가진 micrometastases를 감지, 우리는 GFP lentiviral 입자 PDX 파생 CRC organoids 그들의 orthotopic 받는 쥐로 정 맥 주사 이전에 시험에 대 한 프로토콜을 개발 했다. 주의 우리 수 있었다이 방법은 CRC organoid 파생 된 micrometastases의 매우 민감한 탐지 수 보여 먼 장기에 자발적으로 그리고 실험적으로, 둘 다 형성.
프로토콜 내에서 중요 한 단계는 부드럽게 passaging 시리즈 동안 CRC organoids를 pipetting으로 인공 세포 외 매트릭스에 ...

대 장 암 (CRC)은 암 사망 세계1의 두 번째 주요 원인. 고급 단계 질병을 가진 환자의 일반적인 치료에 부족 한 응답 CRCs를 근본적으로 치료 하는 시도의 무효를 나타냅니다. 더 효과적인 치료 접근을 개발 하기 위해 Crc의 특성을 모방 하는 암의 다양 한 전 임상 마우스 모델 설립 되었습니다. 다양 한 CRC 셀 라인 생성 종양 xenografts 그들의 편 및 조작의 용이성 때문에 널리 사용 되어 왔습니다. 그러나, 암 세포 선의 장기 문화는 다양 한 독특한 세포 인구 꽤 특정 문화 조건 하에서 증식을 함으로써 신뢰할 수 없는 결과 및 전 임상 약에서 중요 한 제한의 결과로 종종 발생 개발입니다.
되지 않고 교양 생체 외에서, 종양 환자 파생 xenografts (PDXs) 또한 인간의 CRC 조직 수술 환자2,,34에서 해 부의 동물 모델에 이식 하 여 생성 된. PDXs는 업과 주요 histopathological 기능으로 널리 인식 되 고 유전 변경 원래에서 파생 된 환자의 종양에 존재. 또한, 종양 환자에서 파생 된 organoids 구성 종양 세포 클러스터 밀접 하 게 원래 종양5,6의 생물 학적 속성을 유사 3D 조건 문화에 의해 설립 되었다. 이러한 종양 organoids 또한 설계5맞춤된 치료를 함으로써 높은 처리량 마약 검사에 적용 했다. 그러나, 현저 하 게 다른 유형의 CRC 인구 간주 됩니다 종양 내의 질량. 특정 CRC 인구 수 선택적으로 증식 한 PDX와 종양 organoids의 구절의 vivo에서 그리고 생체 외에서 시리즈 중 각각 확장 합니다. 이 또한 수 있습니다 전체 진 식 프로필과 피/유전 상태를 변경 하려면 영향을 받는 CRCs의 그로 인하여 부모의 CRC에 최소한의 닮 았에서 결과.
환자에서 파생 된 CRC organoids와 noncancerous 인간 결 장 종양 돌연변이의 조합 또한 종양 침입과 전이 에 의해 궁 행 하는 인간의 종양 세포의 특징을 조사 하기 위해 고용 되었습니다 하버 설계에서 추출 6,7,,89. 그러나, immunodeficient 쥐로 orthotopic 이식 환자에서 파생 된 CRC에서에서 발생 하는 자연 스러운 전이의 발생률이 매우 낮은 했다 포함 하는 침략 전이 캐스케이드의 다단계 과정을 공부 하기 어려운 지역 내 습, intravasation, 혈 류, 넘쳐 흐름 및 먼 장기4,10의 식민지에서 전송. Micrometastasis로 ≤2 m m의 종양 세포 증 착에 의해 표현, CRC organoids 환자에서 파생 된에 의해 형성 된, 실험 마우스 모델에 영향을 받는 먼 장기에서 섹션의 histopathological 분석에 간과. 자연 스러운 micrometastases의 시각화 최소한의 비보에 효율적으로 받는 쥐로 그들의 주입 전에 종양 organoid 세포에 형광 마커를 도입의 어려움으로 인해 되었습니다. 이 연구에서 우리가 개발을 효율적으로 PDX 파생 CRC organoid 셀 받는 쥐로 주입에 앞서 3D 문화에 GFP lentivirus transduce 매우 민감한 탐지를 허용 하는 프로토콜의 스테레오-형광 현미경 검사 법, 고용 그들의 양식 micrometastases에 다른 장기 식민지

<table><tbody><tr><td>NOD/Shi-scid IL2R&gamma; null (NOG) 마우스</td><td>The Central Institute for Experimental Animals, Kanagawa, Japan</td><td></td><td>번식 6주 된 수컷 마우스를 무균 및 특정 병원체가 없는 조건에서</td></tr><tr><td>상처 클립 2&times; 10mm</td><td>Natsume 제조, 사용 전 일본</td> <td>#C-21-S</td><td>오토 클레이브</td></tr><tr><td>해밀턴 주사기 바늘 크기 : 22 게이지</td><td>도쿄 과학, 일본</td><td></td><td>70 % 알코올 및 멸균 PBS로 소독합니다.</td></tr><tr><td>6웰 플레이트</td><td>BMBio</td><td>#92006</td><td></td></tr><tr><td>12웰 플레이트</td><td>BMBio</td><td>#92412</td><td></td></tr><tr><td>15ml 원뿔형 튜브</td><td>스미토노 베이클라이트</td><td>MS-57150</td><td></td></tr><tr><td>50ml 원뿔형 튜브</td><td>스미토모 베이클라이트</td><td>MS-57500</td><td></td></tr><tr><td>마이크로튜브</td><td>Eppendorf</td><td>#0030120086</td><td>사용 전 오토클레이브</td></tr><tr><td>혈구계</td><td>Erma</td><td>#03-202-1</td><td></td></tr><tr><td>40&뮤; m cell strainer</td><td>Corning</td><td>#352340</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel 기저막 매트릭스</td><td>Corning</td><td>#354234</td><td>-20°C. 에서 aliqupts 저장 사용할 때까지 얼음 위에 놓으십시오</td></tr><tr><td>Collagenase type 1</td><td>Sigma</td><td>#C1030</td><td>150 mg/ml collagenase type1 in 1&times; PBS입니다. -20°C에서 aliqupts를 보관하십시오. 최대 1년 동안 C</td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Innovate Cell Technologies</td><td>#5V2623A</td><td>4°C에 보관하십시오.</td></tr><tr><td>GlutaMAX&trade를 가진 DMEM/F-12;</td><td>Gibco</td><td>#10565018</td><td>4°C에 저장. 37°C에 따뜻함; C 사용 전</td></tr><tr><td>Cell banker 1plus</td><td>ZENOAQ</td><td>#628</td><td>4&deg;C에서 보관. 1개월 이내</td></tr><tr><td>사용 Penicillin</td><td>Gibco</td><td>#15140122</td><td>4&deg;C에서 보관. 1개월 이내</td></tr><tr><td>사용 스트렙토마이신</td><td>Gibco</td><td>#15140122</td><td>4&deg;C에서 보관. 1개월 이내 사용</td></tr><tr><td>hEGF</td><td>PEPROTECH</td><td>#AF-100-15</td><td>-20°C에서 보관. 사용</td></tr><tr><td>과 동시에 중간에 매체 추가Y27632, ROCK 억제제</td><td>Wako</td><td>#253-00591</td> -20°C에 저장. GlutaMAX&trade와 함께 배양 배지 Gibco DMEM/F-12<td>를 사용하는 것과 같은 날 에 매체에 추가</td></tr><tr><td></td><td></td>; 5% FBS, 100 U/ml 페니실린 및 100 &마이크로로 보충된 보충제;<td></td><td> g/ml 스트렙토마이신. 4&deg;C에 보관하십시오. 1개월 이내에 사용하십시오.</td></tr><tr><td>CRC 오가노이드 배양 배지 with 1% or 5% FCS</td><td></td><td></td><td>DMEM/F-12 with GlutaMAX&trade; 보충 (Gibco #10565018) 1% 또는 5% FCS, 100 U/ml 페니실린, 100 &micro; g/ml 스트렙토마이신, 2 ng/ml hEGF 및 10 &마이크로; M Y27632, ROCK 억제제. 4&deg;C에 보관하십시오. 1개월 이내에 사용하십시오.</td></tr><tr><td>FuGENE 6 형질주입 리젠트</td><td>Roche</td><td>11814 443001</td><td></td></tr><tr><td>Minisart 0.45 &micro; m 필터</td><td>Sartorius stedim</td><td>17598-K</td><td></td></tr><tr><td>5ml 폴리프로필렌 원심분리기 튜브</td><td>Beckman Coulter</td><td>326819</td><td></td></tr><tr><td>PRRL-GFP 벡터</td><td>Robert A. Weinberg</td><td></td><td></td>박사의</tr><tr><td>선물 pCMV-VSV-G</td><td>Robert A. Weinberg</td><td></td><td></td>박사의 선물</tr><tr><td>pCMV-dR8.2 dvpr</td><td>Robert A. Weinberg</td><td></td><td></td>박사의 선물</tr><tr><td>SW55Ti 스윙 버킷 로터</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td></td></tr><tr><td>a Zeiss Axioplan 2 실체 형광 현미경</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

gfp lentivirus 불리고 organoids 환자 파생 결 장 종양에서 경작에 의해 생성 된 micrometastases의 고감도 검출

High-sensitivity Detection of Micrometastases Generated by GFP Lentivirus-transduced Organoids Cultured from a Patient-derived Colon Tumor

인간의 대 장 암 (CRC) 치료에 현재 진보에도 불구 하 고 몇 가지 근본적인 치료는 CRC의 늦은 단계에 대 한 효과적입니다. 전 임상 모델으로 오래 된 인간의 암 세포 선 및 종양 모델 개발 되었습니다 많은 유전자 변형 마우스를 사용 하 여 종양이 종이 식 마우스 모델이 임상 문제를 극복 한다 그들은 부분적으로 인간의 carcinomas의 기능을 모방 하지만 종종 내 습 및 전이 포함 하 여 인간 악성의 주요 측면 정리를 하지. 따라서, 더 나은 인간 CRC에 악성 진행을 대표 하는 대체 모델은 오랫동안 기다려온 되었습니다.
우리는 여기 작은 CRC 조각 수술 환자에서 해 부의 피하 주입에 의해 종양 환자 파생 xenografts (PDXs)의 생성을 보여줍니다. 콜론 PDXs 개발 하 고 histopathologically 환자에 CRC를 닮은. 그러나, 몇 가지 자연 micrometastases는 PDX 모델에 영향을 받는 먼 기관의 기존 횡단면에서 감지. 먼 장기에 전이성 보급의 탐지를 촉진 하기 위하여 우리는 문화에서 콜론 PDXs에서 종양 organoid 세포를 추출 하 고 GFP lentivirus 매우 immunodeficient 끄 덕/시-scid IL2Rγ에 주입 하기 전에 그들을 감염null (노 그) 쥐. Orthotopically 주입 PDX 파생 CRC organoid 세포 지속적으로 양식 기본 종양 긍정적인 GFP에 대 한 받는 사람 쥐에서. 또한, 자발적으로 식민지 GFP 표현 특히 형광 현미경 검사 법에 의해 이러한 쥐의 폐에서 감지 micrometastatic 개발. 또한, CRC organoids의 intrasplenic 주입 자주 간 식민지를 생성합니다. 함께 찍은, 이러한 결과 다단계 프로세스 동안 시각적으로 감지 되도록 PDX 파생 CRC organoid 셀 GFP 표시 되 나 침공 전이 캐스케이드 나타냅니다. 설명된 프로토콜 GFP lentiviral 입자에 의해 불리고 해당 CRC organoid 셀의 3D 문화와 인간의 CRC의 PDXs의 설립을 포함 한다.

주 대 장 선 암으로 알맞게 차별화 된 진단 TNM 분류, 단계 IIIa, 수술 후 화학요법 뒤와 76 년 오래 된 여성에서 수술로 절제 된 했다. 기본 CRC 셀 immunohistochemically carcinoembryonic 항 원, 기-67, 팬 cytokeratin 및 E-cadherin 긍정적인 스테인드. 절제 종양의 조각도 피하 콜론 PDX 모델 생성 노 그 쥐에 이식 했다. CRC organoid 셀이이 마우스에 피하 개발 했다 결 장 PDX에서 조직 문화에 대 한 다음 추출 되었다. CRC organoids 지속적으로 인공 세포 외 기질에 구절의 시리즈 중 다세포 클러스터를 형성 할 수 있었다. 우리가 높은 감도와 CRC organoid 셀의 비보에 탐지를 허용 하는 마우스 모델을 개발 하려고으로 종양 organoids 조직학 및 유전자 환자5,<sup class="xref...

있도록 매우 민감한 탐지 목표 인간의 대 장 암 (CRC) 세포 조직 정착, 우리 여기 PDX 파생 CRC organoid 셀에 녹색 형광 단백질 (GFP) lentiviral 입자의 효율적인 변환에 대 한 프로토콜을 표시 스테레오-형광 현미경 관찰 받는 쥐로 그들의 주입에의 사전

GFP Lentivirus 불리고 Organoids 환자 파생 결 장 종양에서 경작에 의해 생성 된 Micrometastases의 고감도 검출

Despite current advances in human colorectal cancer (CRC) treatment, few radical therapies are effective for the late stages of CRC. To overcome this ...

이 방법은 대장암 환자에서 발견되는 미세전이에 대한 종양 생물학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 마우스에서 GFP 표지, 환자 유래 대장암 오가노이드에 의해 유도된 미세 전이를 통해 매우 민감하게 검출할 수 있다는 것입니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 생쥐의 먼 장기에서 대장 종양 또는 오가노이드 유래 미세 전이를 감지하기 어려울 수 있기 때문에 어려움을 겪을 것입니다.Yu Okazawa와 함께 시술을 시연하는 사람은 Kosuke Mizukoshi와 Yu Koyama로, 둘 다 우리 그룹의 박사 과정 학생이자 외과 의사입니다. 인간 결장직장암 세포 오가노이드를 생성하려면 먼저 웰당 150마이크로리터의 인공 세포외 기질을 얼음 위의 12웰 플레이트에 추가합니다. 모든 웰이 코팅되면 섭씨 37도의 5% CO2 인큐베이터에서 30-60분 동안 플레이트를 배양하여 겔을 응고시킵니다.다음으로, 5%태아 송아지 혈청(FCS)이 보충된 신선한 대장암 오가노이드 배양 배지에 환자 유래 종양 이종이식 세포 펠릿을 재현탁시켜 10-5 세포 농도의 3배를 달성하고 각 인공 세포외 기질에 1ml의 세포를 시딩합니다. 그런 다음 세포를 세포 배양 인큐베이터로 되돌립니다. 다음날 아침, 원심분리를 위해 부유 세포를 포함한 배양 상등액을 1.5ml 마이크로 원심분리 튜브에 조심스럽게 옮기고 펠릿을 얼음 위의 신선한 인공 세포외 기질 70마이크로리터에 재현탁합니다.결장직장암 세포의 생존력을 높이려면 인공 세포외 기질이 포함된 부유 종양 세포를 인공 세포외 기질로 코팅된 웰에 다시 오버레이하고 세포 배양 인큐베이터에서 30분 동안 종양 세포 배양을 배양합니다. 새로운 세포외 기질 겔이 응고되면 1%FCS가 보충된 1ml의 신선한 대장암 오가노이드 세포 배양 배지를 배양액에 공급하고 세포를 세포 배양 인큐베이터로 되돌립니다. 7일에서 10일 동안 배양한 후 멸균 세포 스크레이퍼로 오가노이드를 기계적으로 분리하고 오가노이드를 1.5ml 마이크로 원심분리 튜브로 옮겨 원심분리합니다.그런 다음 펠릿을 500마이크로리터의 PBS에 다시 부유시키고 또 다른 원심분리를 위해 부드럽게 두드립니다. 결장직장암 오가노이드를 해리하려면 500마이크로리터의 단백질 분해 및 콜라겐 분해 효소 용액을 튜브에 넣고 부드럽게 두드려 섞습니다. 실온에서 10분 후 1% FBS가 보충된 배지 500마이크로리터를

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Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

본 연구에서보고 된 소설 프로토콜 결합에 의한 마우스의 단일 셀 해상도로 폐 metastases의 선택적 검출 할 수...

복합에 의한 마우스의 싱글 셀 해상도에서 폐 Metastases의 향상된 시각화<em&gt;에서 시츄</em폐 조직 및 X-걸의 착색의&gt; 재관류<em&gt; lacZ</em&gt; 태그 종양 세포

이 동영상은 인공 세포외 기질 코팅판에서 증식하여 쥐 모델 유래 대장암 세포에서 3D 오가노이드를 생성하는 자세한 프로토콜에 대해 설명합니다. 이러한 CRC 오가노이드는 인간 종양 세포의 1차 성장 및 전이를 연구하기 위한 모델로 사용할 수 있습니다.

CRC 오가노이드 배양: 대장암 세포에서 3D 오가노이드를 얻는 방법

이 동영상은 형광 이미징을 가능하게 하기 위해 GFP 렌티바이러스 입자에 의해 형질전환된 CRC 오가노이드를 생성하는 기술에 대해 설명합니다. 이러한 GFP 표지 오가노이드는 동물 모델에 배치될 때 종양 침입 및 전이를 연구하는 데 도움이 됩니다.

CRC 오가노이드 세포 라벨링: GFP 렌티바이러스 형질도입 대장암 오가노이드 세포를 생성하는 방법

이 비디오는 대장암 환자 유래 이종이식편(PDX)의 자연 전이 마우스 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 설명합니다. 이러한 이종이식 모델은 인간 암종의 특징을 부분적으로 모방하고 침입 및 전이를 포함한 인간 악성 종양의 중요한 측면을 이해합니다.

자발적 전이 마우스 모델: 정소적으로 주입된 대장암 세포의 전이 가능성을 연구하는 플랫폼

이 동영상은 GFP 렌티바이러스로 표지된 PDX 유래 CRC 오가노이드에 의해 면역 결핍 마우스의 비장으로 전이를 생성하는 프로토콜에 대해 설명합니다. 다른 장기에 서식하는 암 미세전이는 GFP 발현을 평가하기 위해 형광 현미경을 사용하여 검출할 수 있습니다.

실험적 전이 마우스 모델 확립: 미세전이를 검출하기 위해 PDX 모델에 CRC 오가노이드 세포를 발현하는 GFP 이식

이 비디오 프로토콜에서는 1차 장 상피의 오가노이드에서 렌티바이러스 형질전환과 정량적 RT-PCR, RNA-마이크로어레이 및 면역조직화학에 의한 이러한 배양의 처리 및 다운스트림 분석에 대해 단계별로 설명합니다.

렌티 바이러스 형질 도입 및 장내 Organoids의 다운 스트림 분석을위한 프로토콜

우리는 녹색 형광 단백질과 루시 페라 제 기자를 발현하는 렌티 바이러스 입자 환자 유래의 이종 이식 (PDXs)의 안정적인 표시하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 주 사이트 PDXs의 성장을 추적뿐만 아니라, 생체 내 이미징 시스템에서 사용 자발 실험 전이 검출을 허용한다.

종양의 성장과 전이 연구 추적 가능한 기자와 유방암 환자 유래의 이종 이식의 라벨링

우리는 전립선 종양 해부에 초점을 맞춘 마우스 전립선 암 모델의 부검 및 해부를위한 방법을 보여줍니다. 마우스 전립선 종양 오르가노이드의 생성을 위한 단계별 프로토콜도 제시된다.

전립선암의 유전자 조작 마우스 모델에서 종양 오르가노이드의 생성

이 작업은 녹색 형광 단백질 및 생물 발광 신호의 검출뿐만 아니라 정량적 분자 검출 기술의 통합에 의해 종양 하중을 정확하게 평가하기 위한 고급 프로토콜을 미리 설정합니다.

정형외 유방암 모델을 사용하여 삼중 음성 유방암 을 연구

기술된 접근법은 실험적인 꼬리 정맥 전이 실험과 생체 내 살아있는 동물 화상 진찰을 결합하여 폐에 있는 전이 수 그리고 크기의 정량화 이외에 유방암 전이 대형 및 성장의 실시간 감시를 허용합니다.

꼬리 정맥 전이 검사의 결합된 사용 및 생체 내 실시간 생체 내 이미징을 결합하여 폐암 전이성 식민지화 및 폐의 부담을 정량화

환자 유래 종양 오가노이드는 기초 및 중개 연구를 위한 정교한 모델 시스템입니다. 이 방법 기사에서는 다양한 오가노이드 표현형의 동시 역학 평가를 위한 다중 형광 라이브 셀 이미징의 사용에 대해 자세히 설명합니다.

암의 환자 유래 오가노이드 모델에서 약물 반응을 위한 다중 라이브 셀 이미징

배우세요 환자 유래 대장암 오가노이드에 GFP 렌티바이러스를 도입하여 마우스 체내 미세전이를 고감도로 검출하는 방법입니다. 이 기술은 종양 생물학 연구에 활용됩니다.

GFP Lentivirus 불리고 Organoids 환자 파생 결 장 종양에서 경작에 의해 생성 된 Micrometastases의 고감도 검출

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