매트릭스 보조 레이저 탈 착/이온화 질량 분석에서 탄수화물 이온 신호를 강화 하는 효율적인 샘플 준비 방법

샘플 준비 과정 동안 개혁 결정 구조에 의해 MALDI 질량 분석에서 탄수화물 이온 신호를 향상을 위한 프로토콜은 설명 했다.

건조 공정 중 간단한 형태를 개혁하여 매트릭스 보조 레이저 탈착 이온화 질량 분석법의 기존 방법을 개선하기 위해 간단한 시료 전처리 절차가 개발되었습니다. 이 기법의 장점은 이 최적화된 방법으로 제조된 탄수화물 샘플의 신호 강도를 효과적으로 향상시킬 수 있다는 것입니다. 일반적으로 이 방법을 처음 사용하는 개인은 메탄올 감압 단계가 매우 중요하고 한 번에 수행해야 하기 때문에 어려움을 겪을 것입니다.

조금이라도 망설이면 데이터 품질이 저하됩니다. 시작하려면 니트릴 장갑을 착용한 상태에서 100ml의 세제 용액을 사용하여 샘플 플레이트를 손으로 씻습니다. 증류수 탈이온수 또는 DD를 사용하여 접시를 손으로 씻으십시오.

그런 다음 30ml의 메탄올로 표면을 헹굽니다. 샘플 플레이트를 600ml 비커에 삽입하고 플레이트가 완전히 잠길 때까지 DD 물로 채웁니다. 그런 다음 비커를 초음파 수조에 넣고 플레이트를 15 분 동안 초음파 처리합니다.

비커에서 샘플 플레이트를 제거하고 가압 질소를 사용하여 물방울을 불어냅니다. 그런 다음 샘플 플레이트에 0.2마이크로리터의 메탄올을 주입하여 다른 지점으로 퍼지는지 확인합니다. 그렇다면 방금 시연 된대로 세척, 초음파 처리 및 질소 처리를 반복하십시오.

텍스트 프로토콜에 따라 건조실을 준비한 후 마이크로 원심분리기 튜브에 0.25마이크로리터의 2, 5-디하이드록시벤조산 용액과 0.25마이크로리터의 시알릴-루이스 A 또는 말토헵타오스 용액을 프리믹스합니다. 그런 다음 3초 동안 튜브를 소용돌이칩니다. 미니 원심분리기의 혼합 용액을 2000배 G로 2초 동안 회전시킵니다.

그런 다음 즉시 사전 혼합된 용액 0.1마이크로리터를 샘플 플레이트에 피펫으로 넣습니다. 샘플이 건조되면 증발을 방지하기 위해 빠르게 작업하면서 0.2마이크로리터의 메탄올을 샘플 지점에 직접 피펫팅합니다. 샘플이 다시 용해된 다음 즉시 건조됩니다.

메탄올 증착 단계는 데이터 품질과 재현성을 결정하는 가장 어려운 단계입니다. 최상의 성능을 보장하기 위해 사용자는 메탄올의 심각한 증발 손실을 방지하기 위해 3-5초 내에 증착을 완료하는 것이 좋습니다. 니트릴 장갑을 착용하고 건조실에서 샘플 플레이트를 조심스럽게 제거합니다.

그런 다음 현미경으로 샘플을 검사합니다. 결정 형태가 예상과 다르면 시료 혼합과 스포팅을 샘플 플레이트에 반복하십시오. 재결정 후 시료 결정이 최적의 형태를 갖도록 하려면 항상 현미경을 사용하여 검사하십시오.

육안으로 결정 형태의 품질을 정확하게 판단하는 것은 어렵습니다. 1마이크로리터 샘플을 분석하려면 마이크로 원심분리기 튜브에 2.5마이크로리터의 2, 5-디하이드록시벤조산 용액과 2.5마이크로리터의 시알릴-루이스 A 또는 말토헵타오스 용액을 프리믹스합니다. 미리 혼합된 용액을 5초 동안 소용돌이칩니다.

혼합 용액을 2000배 G에서 2초 동안 스핀다운한 다음 즉시 사전 혼합된 용액 1마이크로리터를 샘플 플레이트에 피펫으로 주입합니다. 샘플이 건조된 후 1.5마이크로리터의 메탄올을 건조된 샘플 지점에 직접 피펫팅합니다. 샘플이 다시 용해되어 즉시 건조됩니다.

조심스럽게 s를 제거하십시오.amp건조실에서 le. 현미경으로 샘플을 검사합니다. 결정 형태가 예상과 다르면 방금 설명한 대로 용액 준비를 반복합니다.

질량 분석을 수행하려면 질량 분석기 제어 소프트웨어를 열고 샘플 플레이트를 기계에 삽입하십시오. 소프트웨어에서 사전 최적화된 데이터 수집 방법을 선택한 다음 이미징 소프트웨어를 사용하여 이미징 질량 분석을 위해 전체 샘플 영역을 등록합니다. 제어 소프트웨어의 배치 모드에서 데이터 수집을 시작합니다.

데이터 수집이 완료되면 이미징 소프트웨어를 사용하여 이온 이미지를 플롯하고 텍스트 프로토콜에 따라 데이터를 분석합니다. 건조 액적 및 재결정화 방법을 사용하여 제조된 2,5-Dihydroxybenzoic acid와 혼합된 Sialyl-Lewis A의 대표적인 SEM 이미지가 여기에 나와 있습니다. 전형적인 2, 5-디하이드록시벤조산 형태는 가장자리에 있는 큰 바늘 모양의 결정과 샘플 반점 중앙의 미세한 결정 구조입니다.

메탄올에 의한 재결정 후, 샘플은 미세한 플레이크와 같은 결정으로 고르게 덮인 더 넓은 영역을 갖습니다. 이 그림은 메탄올 재결정화가 있거나 없는 Sialyl-Lewis A 및 말토헵타오스의 이미징 질량 분석 결과를 보여줍니다. 재결정 후 Sialyl-Lewis A 및 maltohepaose 신호의 분포는 샘플 스폿의 명시야 이미지와 잘 일치합니다.

재결정화된 탄수화물 샘플의 신호 강도는 또한 기존의 건조 액적 샘플에 비해 향상되었습니다. 이 그래프는 재결정화된 샘플의 소디에이트 또는 양이온 모드와 탈양성자 또는 음이온 모드 탄수화물의 신호 강도를 건조된 액적 샘플의 신호 강도와 비교합니다. 평균적으로, Sialyl-Lewis A 및 maltoheptaose 샘플의 재결정화는 3.9 및 3.3의 요인만큼 소디에이티드 신호를 증가시켰습니다.

탈양성자화된 Sialyl-Lewis A 이온 신호는 재결정 후 4.7배 강화되었습니다. 마스터링한 후에는 이 기술을 사용하여 적절하게 수행되면 10분 안에 샘플을 준비할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 메탄올 방울을 샘플 지점에 즉각적이고 정확하게 증착하는 것이 중요합니다.

이 동영상을 시청한 후에는 일상적인 분석을 위한 최상의 이온 신호를 얻기 위해 다중 시료의 결정 형태를 효과적으로 제어하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.