Name: 매트릭스 보조 레이저 탈 착/이온화 질량 분석에서 탄수화물 이온 신호를 강화 하는 효율적인 샘플 준비 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: 배우세요 MALDI 질량 분석에서 탄수화물 이온 신호를 강화하는 최적화된 샘플 준비 방법을. 메탄올 재결정화 단계를 통해 결정 구조를 개선하여 신호 강도를 효과적으로 높이는 이 기법은 탄수화물 분석 연구에 필수적입니다.

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저자 아무 승인 있다.

1. 샘플 접시 늘어진
<ol><li>
샘플 접시의 청소
	<ol>
<li>청소 하는 동안 샘플 플레이트의 오염을 피하기 위하여 니트 릴 장갑을 착용 한다.</li>
		<li>손 세척 세제 솔루션 (1.0 mg/mL)의 100.0 mL과 샘플 접시.</li>
		<li>손-세척-이온 증 류 물 (DDW) 샘플 접시.</li>
		<li>씻어 MeOH의 30.0 mL과 샘플 접시 표면.</li>
		<li>샘플 접시는 완전히 물에 잠기 다 때까지 600 mL 비이 커에 채우기 DDW와 샘플 접시를 넣어.</li>
		<li>비 커는 초음파에 넣어 ( 테이블의 자료를 참조) 목욕 하 고 15 분 (200 W, 40 kHz)의 샘플 접시를 sonicate.</li>
		<li>샘플 접시를 꺼내와 물 방울 가압된 질소를 사용 하 여 날 려 버릴.</li>
		<li>0.2 µ L MeOH의 MeOH 다른 장소에 확산 여부를 확인 하려면 샘플 접시에 입금. 참고: 만약 다른 명소 MeOH 병합, 반복 단계 1.1.3-1.1.5; 그렇지 않은 경우에 다음 단계를 수행 하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
챔버 온도 건조의 규제
	<ol>
<li>안정적인 조건에서 건조 챔버를 사용 하 여 앞에서 설명한11,,1213방울, 건조. 특히, Ou, Y. M의 2.1-2.5 단계에서 설명 하는 자세한 절차를 사용 하 여. 외. 201612. 간단히:<ol>
<li>낮은 상대 습도 환경을 유지 하기 위하여 일정 한 유량에서 실내 온도 질소에 의해 건조 챔버를 제거.</li>
			<li>샘플 접시 온도 상수 정기적으로 (25 ° C) 또는 빠른 건조 조건 (50 ° C), 건조 챔버에서 온도 제어 구리 블록에 의해 규제를 유지.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
매트릭스 및 분석 솔루션의 준비
	<ol>
<li>
매트릭스 솔루션의 준비
		<ol>
<li>DHB 50% 이기 (ACN)에서 해산: 50% DDW 0.1 M 솔루션을 준비 하.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
탄수화물 analytes의 준비
		<ol>
<li>SLeA 10-4 M 솔루션을 준비 하는 DDW에서 디졸브.</li>
			<li>DDW 10-4 M 솔루션을 준비 하에서 수소를 분해.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 샘플 증 착 및 Recrystallization
참고: 작고 일반 양의 샘플을 분석 하기 위한 최적화 된 절차는 여기에 설명 되어 있습니다. 샘플 판 온도 솔루션을 입금 하기 전에 원하는 온도에서 안정 된 확인 하십시오. 샘플 recrystallization 동안 다른 샘플 명소를 충당 하기 위해 큰 영역 확산, 새로운 샘플 준비 또는 반복 단계 1.1.
<ol><li>
샘플의 소량 (0.1 µ L)의 분석에 대 한 참고: 다음 단계 샘플 및 시간 소비 최소화에 대 한 개발 되었습니다. 그것은 제한 된 금액 또는 정량화 분석에 대 한 빠른 IMS 실제 샘플의 정량 분석에 적합 합니다.<ol>
<li>0.25 µ L DHB 솔루션 및 0.25 µ L SLeA 의 또는 microcentrifuge 관에서 수소 솔루션의 공기로</li>
		<li>소용돌이 소용돌이 믹서를 사용 하 여 3 혼합된 솔루션 s.</li>
		<li>스핀 2 미니 원심 분리기에서 혼합된 솔루션 다운 s (2000 x g).</li>
		<li>Premixed 솔루션의 0.1 µ L에 밖으로 그리고 즉시 샘플 접시에 그것을 예금 하는 피 펫을 사용 합니다. 참고: 샘플의 작은 금액을 입금 하지 마십시오 유지 premixed 솔루션 10에 대 한 피 펫의 끝 s.</li>
		<li>밖으로 건조에 샘플에 대 한 기다립니다. 전형적인 건조 시간은 표 1에 나열 됩니다.</li>
		<li>한 피 펫을 사용 하 여 0.2 µ L MeOH의 말린된 샘플 자리에 바로 입금. 샘플 얻을 것 이다 즉시 밖으로 건조 하 고 젖은. 참고: 증 착 절차는 3에 완료 확인 MeOH의 중요 한 증발 손실을 방지 하기 위해 s.</li>
		<li>현미경을 사용 하 여 샘플을 검사 합니다. 크리스탈 형태학으로 예상된 (원하는 결과의 예를 그림 1 참조) 없는 경우, 새로운 샘플을 준비 하는 단계 2.1.1-2.1.6를 반복 합니다.</li>
		<li>니트 릴 장갑 착용 하 고 신중 하 게 건조 실에서 샘플 접시를 꺼내.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
샘플의 일정 금액 (1 µ L)의 분석에 대 한 참고: 다음 단계는 일반적으로 이용한 MALDI 샘플 금액 탄수화물 샘플의 동질성을 극대화 하기 위한 개발 된다. 과정은 루틴 및 정량 분석에 적합 합니다. Recrystallization 프로세스 샘플 및 행렬 큰 지역에 균등 하 게 재분배.<ol>
<li>DHB 솔루션 및 2.5 µ SLeA L 또는 microcentrifuge 관에서 수소 솔루션의 2.5 µ L 공기로</li>
		<li>소용돌이 소용돌이 믹서 5 premixed 솔루션 s.</li>
		<li>스핀 2 미니 원심 분리기에서 혼합된 솔루션 다운 s (2000 x g).</li>
		<li>Premixed 솔루션의 1.0 µ L를 끌어낼 즉시 샘플 접시에 그것을 예금 하는 피 펫을 사용 합니다. 참고: 하지 않습니다 나머지 사용 샘플 입금 후 다시 솔루션을 혼합.</li>
		<li>밖으로 건조에 샘플에 대 한 기다립니다. 전형적인 건조 시간은 표 1에 나열 됩니다.</li>
		<li>1.5 µ L MeOH의 말린된 샘플 자리에 바로 입금 하는 피 펫을 사용 합니다. 샘플 얻을 것 이다 즉시 밖으로 건조 하 고 젖은. 참고: 높은 샘플 접시 온도 (50 ° C)의 경우, 5에서 recrystallization 단계를 수행 피 펫 팁에서 MeOH의 증발을 최소화 하기 위해 s.</li>
		<li>현미경을 사용 하 여 샘플을 검사 합니다. 크리스탈 형태학으로 예상된 (원하는 결과의 예를 그림 1 참조) 없는 경우, 새로운 샘플을 준비 하는 단계 2.2.1-2.2.6를 반복 합니다.</li>
		<li>니트 릴 장갑 착용 하 고 신중 하 게 건조 실에서 샘플 접시를 꺼내.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 질량 분석 데이터 수집 및 분석
참고: 분석은 상업적인 시간의 비행 질량 분 서 계 (자료 테이블) 갖춘 MALDI 이온 소스를 사용 하 여 수행 됩니다. 악기는 특정 제어 소프트웨어 (자료 테이블) 미리 최적화 된 추출 지연 및 레이저 에너지에 운영 됩니다. 스펙트럼은 m/z의 대량 범위 선형 모드에서 기록 됩니다 = 0-1500. 잠재적인 샘플 격판덮개는 ± 25 케빈과 모든 스펙트럼 평균 10 레이저 샷. 사용자는 악기 최적화와 호환 하는 소프트웨어를 사용 하 여 샘플 분석을 실시 하 고 악기 제조 업체의 지침에 따라 해야 합니다.
<ol><li>인스트루먼트 컨트롤 소프트웨어를 열고 ( 재료의 표참조).</li>
	<li>질량 분석기에 샘플 접시를 삽입 합니다.</li>
	<li>소프트웨어에서 사전 최적화 된 데이터 수집 방법을 선택 합니다.</li>
	<li>이미징 소프트웨어를 사용 하 여 IMS에 대 한 전체 샘플 지역 등록 ( 재료의 표참조). 참고: IMS를 하 고 그렇지 않다면이 단계를 건너뜁니다.</li>
	<li>제어 소프트웨어의 일괄 처리 모드에서 데이터 수집을 시작 합니다.</li>
	<li>데이터 수집 완료 후 이미징 소프트웨어를 사용 하 여 이온 이미지 플롯.</li>
	<li>질량 스펙트럼 분석 소프트웨어를 사용 하 여 분석 ( 재료의 표참조)는 데이터는 이온 이미지 없이 기록 하는 경우.</li>
</ol>

<ol><li>Holme, D. J., Peck, H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHolme%2C+DJ+%22Analytical+Biochemistry%22">Analytical Biochemistry</a>. , 3rd edn, Addison Wesley Longman Limited. (1998).</li>
<li>Costello, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time%2C+life+...+and+mass+spectrometry+-+New+techniques+to+address+biological+questions%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Time, life ... and mass spectrometry - New techniques to address biological questions.</a> Biophysical Chemistry. 68 (1-3), 173-188 (1997).</li>
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<li>Nishikaze, T., Amano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+thin+layer+method+for+enhanced+ion+yield+of+oligosaccharides+in+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Reverse thin layer method for enhanced ion yield of oligosaccharides in matrix-assisted laser desorption/ionization.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 23 (23), 3787-3794 (2009).</li>
<li>Williams, T. I., Saggese, D. A., Wilcox, R. J., Martin, J. D., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+matrix+crystal+structure+on+ion+abundance+of+carbohydrates+by+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+Fourier+transform+ion+cyclotron+resonance+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Effect of matrix crystal structure on ion abundance of carbohydrates by matrix-assisted laser desorption/ionization Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 21 (5), 807-811 (2007).</li>
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<li>Lai, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+Spatial+Heterogeneity+of+MALDI+Samples+with+Marangoni+Flows+During+Sample+Preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+for+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Reducing Spatial Heterogeneity of MALDI Samples with Marangoni Flows During Sample Preparation.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 27 (8), 1314-1321 (2016).</li>
<li>Ou, Y. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+Homogeneous+MALDI+Samples+for+Quantitative+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of Homogeneous MALDI Samples for Quantitative Applications.</a> Journal of Visualized Experiments. (116), e54409(2016).</li>
<li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+carbohydrate+ion+yield+by+controlling+crystalline+structures+in+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Analytica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Enhancing carbohydrate ion yield by controlling crystalline structures in matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry.</a> Analytica Chimica Acta. , 49-55 (2017).</li>
<li>Allwood, D. A., Perera, I. K., Perkins, J., Dyer, P. E., Oldershaw, G. A. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0169433296005302">Preparation of 'near' homogeneous samples for the analysis of matrix-assisted laser desorption/ionisation processes.</a> Applied Surface Science. 103 (3), 231-244 (1996).</li>
<li>Sadeghi, M., Vertes, A. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0169433297006363">Crystallite size dependence of volatilization in matrix-assisted laser desorption ionization.</a> Applied Surface Science. 127 (Supplement C), 226-234 (1998).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

샘플이 MALDI 양 DD에서 중요 한 문제는 가장 일반적으로 사용 되는 샘플 준비 방법, 결과 결정은 매우 이질적인 것 이다. 이러한 샘플 가난한 쏜 총에 및 샘플 샘플 신호 재현성을 보여줍니다. 따라서, 데이터 수집 하는 동안 "달콤한 명소" 샘플 영역에 대 한 검색 MALDI 실험에서 일반적인 절차 이다. 이러한 다른 유형의 샘플 루틴 분석에 정량화를 위한 적합 하지 않습니다.
현재 연구에서 MALDI 샘플 형태학은 recrystallization에 의해 최적화 됩니다. 탄수화물 신호 강도 및 recrystallization 데이터 안정성 개선 탄수화물과 행렬 사이의 향상 된 합동에 기인 된다. 대부분 탄수화물과 행렬의 친수성 특성 때문에 MeOH MALDI 결정과 탄수화물 분해 효율적으로 수 있습니다. 관찰 증 착 및 MeOH의 빠른 증발 작은 조각 모양의 결정 구조에 대형 바늘 모양의 DHB 크리스탈 개혁 보여줍니다. 이 프로세스는 또한 샘플 분리를 최소화 하 고 표면 ...

탄수화물 분석 한 중요 하 고 어려운 주제 이다입니다. 탄수화물과 그들의 유도체 재생 중요 한 역할 살고 있는 생물1,2,3. 이러한 분자 구조를 복잡 하 고 분해 하는 경향이 있다. 그들의 많은 명확 하 게 분리와 검출 때문 특징 될 수 없습니다. 매트릭스 보조 레이저 탈 착 또는 이온화 (MALDI) 질량 분석 (MS)의 다양 한 감도 및 이해할 수 있는 결과4, 생체 분석에 적용 된 있지만 계속 탄수화물 MALDI MS를 사용 하 여 분석 이러한 분자5의 낮은 이온화 효율 인해 주요 도전 하. 화학 derivatization 탄수화물6,7, 이온화 효율을 개선 하는 일반적인 방법 이지만 이러한 절차는 시간 및 샘플 사용. 게다가, derivatized 탄수화물의 이온화 효율의 단백질 보다 여전히 낮습니다. 따라서, 복잡 한 절차 없이 MALDI MS에서 탄수화물 신호를 개선 하는 방법의 개발이 필요 하다.
정량 분석에 MALDI MS의 응용 프로그램은 또 다른 도전 주제. MALDI MS의 주요 문제는 그것의 감도 및 데이터 재현성 실험적인 매개 변수 및 예제 준비 프로토콜에 비판적으로 의존. 대부분의 경우, MALDI MS에 의해 정량 분석 이기종 샘플 형태학 및 분석 배포 안정적입니다. 잘 알려진 예를 들어 2, 5-dihydroxybenzoic 산 (DHB) MALDI 매트릭스와 함께 준비 하는 샘플입니다. DHB는 주위 환경에서 천천히 결정은, 하는 때에 때문에 결과 샘플은 불규칙 한 형태학을 보여 매트릭스 결정으로 분석 법인의 범위 예측 가능한, 하지 않습니다. 큰 바늘 모양 및 결정이 이러한 샘플에 의하여 일반적으로 이루어져 있다. DHB는 휘발성 용 매 또는 온수 샘플 접시를 사용 하 여, 준비 하는 때 빠른 건조 과정 결과 더 균질 정밀한 결정 더 나은 양적 결과8,,910. 이 기술은 MALDI 샘플의 "recrystallization"로 알려져 있다. 개선 빠른 결정 화 과정에서 잘 매트릭스 결정으로 analytes의 더 나은 설립에 기인 된다. 우리 또한 그 탄수화물 신호 및 향상 된 양적 결과11,12의 감소 샘플 준비 환경 조정 시연 했다. 이 작품에서 발견 샘플 형태학 탄수화물 신호 품질을 결정 하는 중요 한 요소는 건의 한다. 매일 분석을 위한 일반적인 전략을 개발, 향상 된 탄수화물 감도 제공 하는 효율적인 샘플 개혁 방법이 필요 합니다.
우리는 체계적으로 최근 보고서13MALDI MS에서 샘플 형태학 및 탄수화물 감도 간의 상관 관계를 시험 했다. 결과 몇 가지 중요 한 탄수화물을 사용 하 여 얻은 고 행렬 표시 recrystallizing에 의해 최고의 신호 향상 실현은 MALDI 샘플 건조. 기존의 말린된 방울 (DD) 메서드를 사용 하 여 준비 하는 샘플의 형태는 메탄올 (MeOH)와 빠른 recrystallization에 의해 개혁 이다. 자세한 샘플 준비 프로토콜은 여기에 설명 했다. 샘플 접시 늘어진, 샘플 증 착 및 recrystallization, 및 질량 분석 분석을 포함 하 여 세 가지 주요 단계는 프로토콜에 의하여 이루어져 있다. 이용한 탄수화물 sialyl-루이스 (SLeA) 및 maltoheptaose (수소)를 포함합니다. DHB는 모델 매트릭스로 사용 됩니다. 결과 탄수화물 신호 강도 및 공간 유통 개선 현저 하 게 recrystallization 후 보여. 이러한 메서드는 샘플을 2,4,6-trihydroxyacetophenone (탑)와 α-cyano-4-hydroxycinnamic 산을 포함 하 여 다른 인기 행렬에 적용할 수 있습니다. 이 방법은 탄수화물 분석을 위한 실험실 루틴에 쉽게 통합 될 수 있는 일반적인 접근 방식으로 제공 합니다.

<table><tbody><tr><td>시약</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>세제 분말</td><td>, Alconox</td><td>242985</td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td><td>머크</td><td>, 106009</td><td></td></tr><tr><td>아세토니트릴</td><td>머크</td><td>100003,</td><td></td></tr><tr><td>2,5-디하이드록시벤조산(DHB)</td><td>알파, Aesar</td><td>A11459</td><td></td></tr>, <tr><td>시알릴-루이스 A(SLeA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1782</td><td></td></tr><tr><td>Maltoheptaose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7753</td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁</td><td>Mettler Toledo</td><td>17005091</td><td></td></tr><tr><td>미세 원심분리기 튜브</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q 정수 시스템</td><td>Millipore</td><td>ZMQS6VFT1</td><td></td></tr><tr><td>파우더 프리 니트릴 장갑</td><td>Microflex</td><td>SU-690</td><td></td></tr><tr><td>600 mL 비커</td><td>Duran</td><td>2110648</td><td></td></tr><tr><td>초음파 세척기</td><td>Delta</td><td>DC300H</td><td></td></tr><tr><td>습도계</td><td>Wisewind</td><td>5330</td><td></td></tr><tr><td>질소 가스 유량계</td><td>Dwyer</td><td>RMA-6-SSV</td><td></td></tr><tr><td>K 형 열전대</td><td>Digitron</td><td>311-1670</td><td></td></tr><tr><td>소용돌이 믹서</td><td>과학 산업</td><td>&nbsp; SI-0236</td><td></td></tr><tr><td>미니 원심분리기</td><td>Select BioProducts</td><td>Force Mini&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>피펫</td><td>Rainin</td><td>피펫 라이트 XLS</td><td></td></tr><tr><td>실체현미경</td><td>Olympus</td><td>SZX16</td><td></td></tr><tr><td>온도 제어 가능 건조 챔버</td><td>이 실험실</td><td></td><td></td></tr>: <tr><td>Ultraflex II TOF/TOF 질량분석기</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MTP 384 타겟 플레이트, 광택 스틸, BC</td><td>Bruker Daltonics</td><td>8280781</td><td></td></tr><tr><td>Flexcontrol 버전 3.4</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td>제어 소프트웨어</td></tr><tr><td>Fleximaging 버전 2.1</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td>이미징 소프트웨어</td></tr><tr><td>Flexanalysis 버전 3.4</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td>분석 소프트웨어</td></tr></tbody></table>

매트릭스 보조 레이저 탈 착/이온화 질량 분석에서 탄수화물 이온 신호를 강화 하는 효율적인 샘플 준비 방법

An Efficient Sample Preparation Method to Enhance Carbohydrate Ion Signals in Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry

샘플 준비는 탄수화물의 질량 분석 (MS) 분석에 중요 한 과정 이다. 매트릭스 보조 레이저 탈 착 또는 이온화 (MALDI) MS 선택 탄수화물 분석에서의 방법 이지만, 가난한 이온 신호 및 데이터 재현성 탄수화물 샘플의 심각한 문제가 계속. 탄수화물의 정량 분석을 위해 뛰어난 데이터 품질을 제공 하는 효과적인 분석 프로토콜은 필요 합니다. 이 비디오 신호 강도 향상 하 여 MALDI MS에서 탄수화물의 데이터 변화를 최소화 샘플 준비 프로토콜을 보여 줍니다. 건조와 샘플 방울의 결정 화, 후 크리스탈 형태학 대량 spectrometric 분석 전에 메탄올에 의해 개혁 이다. 탄수화물 신호에 향상은 MALDI 이미징 질량 분석 (IMS)으로 시험 된다. 실험 결과 크리스탈 개혁 결정 구조를 조정 하 고 재분배 탄수화물 analytes 보여 줍니다. 기존의 MALDI-MS, 메탄올 보여줍니다 훨씬 더 나은 신호 강도, 이온 이미지 배포 및 데이터 안정성과 개혁 탄수화물 크리스탈 형태학의 말린된 방울 준비 방법 비교 때문에 여기에서 설명 하는 프로토콜 샘플 구성에 변화를 포함 하지 않는, 그들은 일반적으로 다양 한 탄수화물과 행렬에 적용 됩니다.

SLeA 의 대표적인 SEM 이미지 DHB DD를 사용 하 여 준비와 혼합 하 고 recrystallization 메서드는 그림 1에 나와 있습니다. 전형적인 DHB 형태학 DD 메서드가 준비 테두리 샘플 관광 명소의 중심에 미세 결정 구조에서 큰 바늘 모양의 결정 이다. 이러한 바늘 모양 결정의 일반적인 길이 ~ 100 µ m. MeOH에 의해 recrystallization, 후 샘플 더 큰 지역 정밀한 조각 모양의 결정으로 균일 하 게 덮여 있다. "찌 질" 결정의 길이 대략 20-50 µ m. Recrystallized 견본 기존의 DD 샘플에 의해 생성 한 그들 보다 더 큰 효과적인 표면 영역을 제공.
IMS 결과 조각 모양의 결정 일반적으로 더 높은 탄수화물 신호 강도와 더 균질 ...

샘플 준비 과정 동안 개혁 결정 구조에 의해 MALDI 질량 분석에서 탄수화물 이온 신호를 향상을 위한 프로토콜은 설명 했다.

Sample preparation is a critical process in mass spectrometry (MS) analysis of carbohydrates. Although matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) ...

건조 공정 중 간단한 형태를 개혁하여 매트릭스 보조 레이저 탈착 이온화 질량 분석법의 기존 방법을 개선하기 위해 간단한 시료 전처리 절차가 개발되었습니다. 이 기법의 장점은 이 최적화된 방법으로 제조된 탄수화물 샘플의 신호 강도를 효과적으로 향상시킬 수 있다는 것입니다. 일반적으로 이 방법을 처음 사용하는 개인은 메탄올 감압 단계가 매우 중요하고 한 번에 수행해야 하기 때문에 어려움을 겪을 것입니다.조금이라도 망설이면 데이터 품질이 저하됩니다. 시작하려면 니트릴 장갑을 착용한 상태에서 100ml의 세제 용액을 사용하여 샘플 플레이트를 손으로 씻습니다. 증류수 탈이온수 또는 DD를 사용하여 접시를 손으로 씻으십시오.그런 다음 30ml의 메탄올로 표면을 헹굽니다. 샘플 플레이트를 600ml 비커에 삽입하고 플레이트가 완전히 잠길 때까지 DD 물로 채웁니다. 그런 다음 비커를 초음파 수조에 넣고 플레이트를 15 분 동안 초음파 처리합니다.비커에서 샘플 플레이트를 제거하고 가압 질소를 사용하여 물방울을 불어냅니다. 그런 다음 샘플 플레이트에 0.2마이크로리터의 메탄올을 주입하여 다른 지점으로 퍼지는지 확인합니다. 그렇다면 방금 시연 된대로 세척, 초음파 처리 및 질소 처리를 반복하십시오.텍스트 프로토콜에 따라 건조실을 준비한 후 마이크로 원심분리기 튜브에 0.25마이크로리터의 2, 5-디하이드록시벤조산 용액과 0.25마이크로리터의 시알릴-루이스 A 또는 말토헵타오스 용액을 프리믹스합니다. 그런 다음 3초 동안 튜브를 소용돌이칩니다. 미니 원심분리기의 혼합 용액을 2000배 G로 2초 동안 회전시킵니다.그런 다음 즉시 사전 혼합된 용액 0.1마이크로리터를 샘플 플레이트에 피펫으로 넣습니다. 샘플이 건조되면 증발을 방지하기 위해 빠르게 작업하면서 0.2마이크로리터의 메탄올을 샘플 지점에 직접 피펫팅합니다. 샘플이 다시 용해된 다음 즉시 건조됩니다.메탄올 증착 단계는 데이터 품질과 재현성을 결정하는 가장 어려운 단계입니다. 최상의 성능을 보장하기 위해 사용자는 메탄올의 심각한 증발 손실을 방지하기 위해 3-5초 내에 증착을 완료하는 것이 좋습니다. 니트릴 장갑을 착용하고 건조실에서 샘플 플레이트를 조심스럽게 제거합니다.그런 다음 현미경으로 샘플을 검사합니다. 결정 형태가 예상과 다르면 시료 혼합과 스포팅을 샘플 플레이트에 반복하십시오. 재결정 후 시료 결정이 최적의 형태를 갖도록 하려면 항상 현미경을 사용하여 검사하십시오.

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이 비디오는 매트릭스를 이용한 레이저 탈착 이온화 질량 분석법 (든 - MS)에 의해 펩티드와 단백질 분석을위한 울트라 얇은 매트릭스 / analyte 레이어의 준비를 보여줍니다.

든 샘플 준비 : 울트라 씬 레이어 방법

정확한 질량 측정이 단백질의 조사 기간 동안 중요한 단계를 나타냅니다. 매트릭스 보조 레이저 탈착 / 이온화 (MALDI) 질량 분석 (MS)은 이러한 결정을 위해 사용될 수 있고, 그것의 주요 장점은 염, 세제 및 오염물에 대한 내성이다. 여기에서 우리는 MALDI-MS 100 kDa의보다 큰 단백질의 분석을위한 접근 방법을 보여줍니다.

비행의 레이저 탈착 / 이온화 시간 본래대로 단백질의 (MALDI-TOF) 질량 분광 분석 매트릭스를 이용한 큰 100 kDa의

디 트라 놀 (DT; 1,8 - 디 히드 록시 -9,10 - 온라인 dihydroanthracen -9 - 일) 이전에 작은 분자의 티슈 이미징 MALDI 매트릭스로서보고되었다;에서 내인성 지질의 MALDI 이미징 DT의 사용을위한 프로토콜 초고 해상도 극 - FTICR 악기에 긍정적 인 이온 MALDI-MS에 의한 조직 섹션의 표면은 여기에 제공됩니다.

푸리에에 매트릭스 보조 레이저 탈착 / 이온화 이미징 매트릭스 디 트라 놀은 이온 사이클로트론 공명 질량 분석기를 변환

샘플 건조 공정 중에 기판의 온도를 조절하여 MALDI 질량 분석기에서 이온 이질성 신호 공간을 감소시키는 프로토콜이 설명된다.

양적 응용 프로그램에 대한 균일 MALDI 시료의 제조

이 프로토콜의 포 르 말린 고정 조직을 이미징 질량 분석에 대 한 운명 승화 기반 준비에 대 한 재현 가능 하 고 신뢰할 수 있는 방법을 설명 합니다.

펩타이드 기반 매트릭스 샘플을 고정 하는 포 르 말린의 최적의 준비 지원 레이저 탈 착/이온화 질량 분석 이미징 워크플로

샘플 준비, 스펙트럼 획득 및 데이터 분석의 최적화를 포함 하 여 합성 고분자의 질량 분석 (MS MALDI TOF) 특성을 설명 하는 비행의 매트릭스 보조 레이저 탈 착 이온화 시간에 대 한 프로토콜.

매트릭스를 통해 합성 고분자의 특성화 지원 레이저 탈 착 이온화 시간의 비행 (TOF MALDI) 질량 분석

이온 이동성 분광법 (IMS)은 생체 분자의 특성화를위한 질량 분광법에 대한 흥미로운 보완물이며, 특히 이성체에 민감하기 때문입니다. 이 프로토콜은 분자의 분리 및 그 단편의 이동성 프로파일의 생성을 허용하는 탠덤 IMS (IMS/IMS) 실험을 설명합니다.

탠덤 이온 이동성 실험을 위한 순환 이온 이동성 분광계 사용

매트릭스 보조 레이저 탈착/이온화 이미징 질량 분석법을 통해 한천 기반 박테리아 거대 콜로니 분석을 위한 새로운 샘플 준비 방법이 시연됩니다.

감염 중 한천 및 조직에서 자란 박테리아 집락의 이미징 질량 분석 분석을 통한 미생물 협력 조사

이 프로토콜은 MALDI-IMS 분석을 위해 수분 함량이 낮은 경질 종자 샘플 절편 준비에 대한 자세한 지침을 설명하고, 분석물의 원래 분포 및 풍부도를 유지하고, 고품질 신호 및 공간 분해능을 제공하는 것을 목표로 했습니다.

Preparation of Hard Palm Seeds for Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization-Imaging Mass Spectrometry Analysis

이 프로토콜은 매트릭스 보조 레이저 탈착/이온화 비행 시간 질량 분석법을 사용하여 다양한 분산 및 말단 그룹을 가진 합성 폴리머를 특성화하기 위해 샘플 준비, 데이터 수집 및 데이터 분석에 대한 자세한 지침과 예를 제공합니다.

분산도 및 말단기가 다양한 합성 고분자의 특성화를 위한 MALDI-ToF MS 분석법

배우세요 MALDI 질량 분석에서 탄수화물 이온 신호를 강화하는 최적화된 샘플 준비 방법을. 메탄올 재결정화 단계를 통해 결정 구조를 개선하여 신호 강도를 효과적으로 높이는 이 기법은 탄수화물 분석 연구에 필수적입니다.

매트릭스 보조 레이저 탈 착/이온화 질량 분석에서 탄수화물 이온 신호를 강화 하는 효율적인 샘플 준비 방법

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