Name: 생명 공학 응용 프로그램에 대 한 고급 재료의 항균 특성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: 배우세요 고급 재료의 항균 특성 평가 방법을 아가 디스크 확산 시험과 ISO 22196:2007 표준 절차를 사용하여. 이 프로토콜은 생명 공학 응용 프로그램을 위한 재료 특성을 체계적으로 분석하는 데 도움을 줍니다.

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저자 2017-231-001UCV를 통해이 작품에 대 한 재정 지원에 대 한 대학 Católica 드 발렌시아 산 비센테 Mártir를 인정 하 고 싶습니다 고 2018-231-001UCV 부여 합니다.

1. 샘플 준비
<ol><li>원통형 펀치 10mm 직경 10 mm 직경 디스크에 소재 샘플을 잘라. 참고: 취 성 재료 1 시간에 대 한 적합 한 살 균 용 매에 부드럽게 고 디스크를 잘라 될 수 있습니다. 예를 들어 아연 alginate 같은 친수성 재료가이 프로토콜에 따라 테스트 하 고 압력가 마로 소독 물에 습 하 게 했다 샘플 위반을 피하기 위하여 그들을 절단 하기 전에. 그러나, poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) 같은 다른 소수 성 물질 절단 제대로 하려면 이전 붓기의 어떤 종류를 필요 하지 않습니다.</li>
	<li>진공 오븐에서 60 ° C에서 샘플 소재 디스크 건조 (&lt; 10-2 Torr) 24 h에 대 한. 참고: 일부 재료는 높은 건조 온도 할 수 있습니다. 그러나, 그것은 중요 자료를 저하 열 수 온도 도달 하지 않습니다.</li>
	<li>디지털 캘리퍼스와 소재 필름 두께 측정 합니다. 참고:이 프로토콜은 다른 물질의 항균 활동을 비교할 때 상수와 비슷한 두께와 소재 영화의 활용을 권장 합니다.</li>
	<li>10 분에 대 한 에탄올 70%와 각 면 당 1 시간에 후속 자외선 (UV) 방사선에 침수에 의해 각 견본을 소독. 참고: UV 방사선 수행할 수 있습니다 12.0 W 램프 UV C 방사선의 각 표본 층 류 두건 내부 살 균 페 트리 접시에 배치. 주의: 연구원 노출 하면 안 스스로 UV 방사선 때문에 돌연변이.</li>
	<li>1.1, 1.2, 1.3, 1.4 단계를 수행 합니다. 와 제어 소재 디스크. 참고: 폴 리 에틸렌 테 레프 탈 산 (애완 동물) 또는 대체 비 항균 물질 제어 디스크 확산 및 접촉 방법으로 사용 될 수 있습니다. 또한, 나노 복합 재료 또는 치료 재료 특성화 때 제어 자료로 기본 재료를 사용 해야 합니다.</li>
</ol>2. 권장된 미생물
참고: 우리는 다양 한 미생물에 대 한 시험된 물질의 항균 능력을 공부 하는 3 다른 미생물의 사용을 권장.
<ol><li>3 미생물의 순수 문화를 사용 하 여: 그람 양성 박테리아 포도 상 구 균, 대장균, 그람 음성 박테리아와 효 모 Candida albicans. 참고: 다른 미생물 종도 테스트할 수 있습니다이 프로토콜 부 화 조건이 필요한 경우 수정 하 여. 주의: 필요한 biosafety 측정이이 프로토콜에는 미생물의 종류에 따라 다음 합니다.</li>
	<li>미리 살 균 또는 압력가 소재와 작업과를 사용 하 여 분 젠 버너 미생물 조작 또는 생물 안전 캐비닛의 전체 과정 (필요한 경우) 무 균 조건을 보장 합니다. 참고: 권장된 고압 조건 작업 소재 및 생물 학적 잔류물 20 분 동안 문화 매체와 121 ° C 15 분 동안 121 ° C는.</li>
</ol>3. 한 디스크 확산 시험 (확산 방법)
참고: 항균 성 화합물의 액체 확산, 신소재의 주요 항균 메커니즘을 수도 보급 방법 이러한 물질의 항균 능력에 대 한 매우 유용한 정보를 제공할 수 있습니다. 한 천 격판덮개의 센터에 있는 소재 디스크 미생물의 성장 억제 발생 후 24 h 문화의 투명 한 링 영역 (후광)을 형성할 수 있다 ( 그림 1참조).
<ol><li>
확산 테스트 절차
	<ol>
<li>준비 및 고압 tryptic 간장 agar (TSA) 제조업체의 지침에 따라.</li>
		<li>분 젠 버너 또는 층 흐름 후드를 사용 하 여 무 균 조건 하에서 무 균 페 트리 디쉬에 TSA를 부 어. 참고: TSA 격판덮개는 4-6 m m 두께 여야 합니다.</li>
		<li>Aerobically 37 ° c.에 인큐베이터에 TSA와 페 트리 접시에서 18-24 h에 대 한 테스트를 다른 미생물 문화</li>
		<li>준비와 압력솥 tryptic 간장 국물 (TSB) 제조업체의 지침에 따라.</li>
		<li>분 젠 버너 또는 층 흐름 후드를 사용 하 여 무 균 조건 하에서 미리 살 균된 혈 청 학적인 피 펫 50 mL 미리 멸 균된 원심 분리기 튜브에는 TSB를 붓는 다.</li>
		<li>Resuspend 멸 균 면봉과 소용돌이 사용 하 여 메 마른 분리기 관에 포함 된 TSB의 단계 3.1.3에서 25 mL에서 몇 식민지 균일 한 혼합을 달성 하기 위해 1 분에 대 한 그들.</li>
		<li>흡 광도 조정 (540에서 nm)의 mL 당 단위 (CFU)를 형성 하는 식민지의 적당 일 분 광 광도 계와 문화: 약 1.5 x 108 CFU/mL 박테리아 및 1 x 106 5 x 106 CFU/mL 효 모에 대 한. 참고: 문화와 베트 볼륨에서 흡 광도 측정 하는 분 광 광도 계 활용의 종류에 따라 선택 되어야 합니다.</li>
		<li>소용돌이 미생물 분산을 개선 하 고 짧게 살 균 면 잠수함을 5 초 동안 미생물 국물이 미생물 현 탁 액에 면봉. 문화를 포함 하는 관 벽에 눌러 면봉에서 액체의 과잉을 제거 합니다.</li>
		<li>균등 하 게 미생물으로 그들의 전체 표면을 커버 하는 접종 후 5 분 동안 말리 3 비행기에서 TSA 격판덮개의 표면에 멸 균 면봉으로 미생물 국물 정지 행진. 참고: 모든 습기를 제거 하려면 TSA 격판덮개 배치 되어야 합니다 열기는 접종 하기 전에 10-15 분 동안 37 ° C에서 거꾸로 위치에.</li>
		<li>96% 에탄올과 비 커에서 그들을 immersing 및 다음 분 젠 버너 또는 알코올 버너와 함께 그들을 불타는 핀셋 한 켤레를 소독.</li>
		<li>테스트 하 고 멸 균 핀셋의 쌍을 사용 하 여 TSA 격판덮개의 센터에서 디스크 제어 샘플 디스크를 놓습니다.</li>
		<li>Aerobically 24 h에 대 한 37 ° C에서 거꾸로 위치에 TSA 격판덮개를 품 어. 참고: 모든 오염 위험을 피하려면, 그것 것이 좋습니다 거꾸로 위치에 TSA 격판덮개를 품 어. 그러나, 샘플 디스크 TSA 격판덮개에서 분리를 하는 경우 수행 하지 않습니다이 단계를 거꾸로 위치에. 이 경우에, 층 류 두건에 접시를 건조 하는 것이 좋습니다. 이 항균 성 테스트를 적어도 quadriplicate에 재현성을 보장 하기 위해 다른 일에 수행 되어야 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
미생물 현 탁 액 농도 및 순도 확인 참고: 다음 단계는 미생물 농도 단계 3.1.7에서에서 분 광 광도 계 결정 올바른지 확인 하 고 미생물 환경 오염 없이 있었다는 것을 확인 하기 위해 필요 합니다. 미생물 환경 오염 문화 24 h 후 미생물 식민지의 다양 한 종류의 모양으로 쉽게 검색할 수 있습니다. 또한, 소수 직렬 희석에는 조작 하는 동안 TSB 매체의 미생물 오염 없이 부정적인 TSB 컨트롤 플레이트 보장 되어야 합니다.<ol>
<li>무 균 조건에 적합 한 압력가 팁는 micropipette를 사용 하 여 살 균 microcentrifuge 튜브 (3.1.4 단계에서 준비) 살 균 TSB 분배. 그들 중 하나는 부정적인 TSB 제어로 활용 될 것입니다.</li>
		<li>TSB를 포함 하는 메 마른 microcentrifuge 튜브에 3.1.9 단계에서 활용 하는 미생물 국물 중단 소수 직렬 희석을 수행 합니다.</li>
		<li>미리 멸 균된 Drigalski 주걱 또는 다른 악기를 사용 하 여 TSA 격판덮개에 각 희석의 100 µ L를 확산. 또한 부정적인 TSB 제어 접시로 TSA 격판덮개에 (단계 3.2.1에서에서 준비) 미생물 없이 100 μ TSB 매체의 확산.</li>
		<li>Aerobically aerobically 24 h에 대 한 37 ° C에서 TSA 격판덮개를 품 어.</li>
		<li>CFU/mL 유사 단계 3.1.7에서에서 결정 되는지 확인 하는 식민지의 수를 계산 합니다.</li>
		<li>식민지의 한 유형 가진 TSA 격판덮개에 미생물 환경 오염 없이 확인 합니다.</li>
		<li>아니 식민지를 보여주는 TSB 부정적인 제어 접시에 미생물 오염 없이 확인</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 소재 표면 (접촉 방법)에 항균 성 활동의 측정
 참고: 표면 접촉, 일부 고급 재료의 주요 항균 메커니즘을 있을 때 접촉 방법 이러한 물질의 항균 능력에 대 한 매우 유용한 정보를 제공할 수 있습니다. 이 방법에서는, 미생물 소재 표면에 직접 배치 하 고 그들의 성장 억제 시간이 일정 금액 후 결정 될 수 있다.
<ol><li>
초기 절차
	<ol>
<li>준비 및 고압 TSB 제조업체의 지침에 따라.</li>
		<li>분 젠 버너 또는 층 흐름 후드를 사용 하 여 무 균 조건 하에서 미리 살 균된 혈 청 학적인 피 펫 50 mL 미리 멸 균된 원심 분리기 튜브에는 TSB를 붓는 다.</li>
		<li>문화 aerobically 테스트할 다른 미생물 37 ° c.에서 궤도 셰이 커 (140 rpm)에서 TSB와 튜브에서 하룻밤</li>
		<li>대략 10의 농도를 50 mL 미리 멸 균된 원심 분리기 튜브에 TSB의 20 mL에서 하룻밤 문화를 희석6 CFU/mL (540에서 분 광 광도 계 결정 nm). 참고: 문화와 베트 볼륨에서 흡 광도 측정 하는 분 광 광도 계 활용의 종류에 따라 선택 되어야 합니다.</li>
		<li>TSB를 포함 하는 메 마른 microcentrifuge 튜브에 소수 직렬 희석이 문화를 수행 합니다. 100 µ L TSA 격판덮개에 문화의 확산과 aerobically 24 h에 대 한 37 ° C에서 품 어.</li>
		<li>약 1 x 106 CFU/mL의 초기 세포 농도 위해 식민지의 수를 계산</li>
		<li>장소 4 24 시간 및 각 유형의 미생물 계산 후에 24 h 분리 무 균 48-잘 접시의 우물에 대 한 시험된 자료의 4 샘플 디스크 후 미생물 계산에 대 한 디스크를 제어 합니다.</li>
		<li>각 디스크 표면에 미생물 현 탁 액의 150 µ L 플라스틱</li>
	</ol>
</li>
	<li>
미생물 제어 및 시험된 자료 (24 시간) 후 세
	<ol>
<li>4.1.6 단계 후 aerobically 24 h에 대 한 37 ° C에서 48-잘 접시에 남아 있는 4 샘플 디스크를 품 어. 참고:이 24 시간 보육 시간 짧은 또는 긴 시간에서 성장 억제를 공부 하기 위해 수정할 수 있습니다.</li>
		<li>외피의 24 시간 후 4 샘플 디스크의 표면에 살 균 PBS의 850 µ L 플라스틱와 미생물 현 탁 액의 150 µ L와 함께 섞는다.</li>
		<li>48-잘 접시에서 PBS/미생물 현 탁 액 혼합물 및 각 디스크를 수집 하 고 10 mL 중 소독된 튜브에 그들을 전송.</li>
		<li>소용돌이 PBS/미생물 현 탁 액 혼합 하 고 1 분 동안 각 디스크 sonicate 그것 50 Hz에서 5 분와 아무 가능한 미생물 유지 되도록 1 분 동안 다시 그것은 소재 표면에 고착 하는 소용돌이.</li>
		<li>TSB를 포함 하는 메 마른 microcentrifuge 튜브에서 sonicated 각 문화의 소수 직렬 희석을 수행 하 고 100 µ L TSA 격판덮개에 문화의 확산 aerobically 24 h에 대 한 37 ° C에서 품 어.</li>
		<li>각 샘플 및 제어 디스크 표면에 가능한 미생물의 수는 식민지의 수를 계산 합니다. 표현 가능한 셀 (CFU/mL)에서이 수 한다.</li>
		<li>샘플 및 제어 디스크에 대 한 최종 미생물 문화의 사진을 가져가 라.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. 항균 결과 분석
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57710/57710fig1.jpg"> 그림 1: "헤일로" 항균의 정규화 된 너비에 대 한 측정. 이 패널에는 억제 영역 (d오늘)의 직경 디스크 직경 (d) 보여 줍니다. <a href="/files/ftp_upload/57710/57710fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<ol><li>
확산 방법 결과 분석
	<ol>
<li>금지 영역 (d오늘)의 지름과 디스크 직경 (d)를 측정 ( 그림 1참조) 디지털 캘리퍼스. 참고: 금지 영역 또는 항균 "헤일로" 항균 소재 디스크에 의해 생성 하는 미생물 성장 억제의 결과로 형성 된다 ( 그림 1참조). 미생물 제대로 성장해 왔습니다 접시의 나머지 부분에 비해 샘플에 가까운 투명 한 링 영역 관찰 수 (불투명 영역).</li>
		<li>방정식 (1)을 적용 하 여 항균 각 디스크의 "후광" (nw헤일로)의 정규화 된 너비를 결정 합니다. (1)<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/57710/57710eq1.jpg">
</li>
		<li>평균 및 표준 편차 각 샘플의 항균 성 "헤일로" 4 결정 nw헤일로 값의 정규화 된 너비를 결정 합니다.</li>
		<li>소재 디스크와 최종 미생물 문화의 사진을 가져가 라. 참고: 금지 영역 (d오늘)의 지름과 디스크 직경 (d)도 측정할 수 있습니다 적합 한 이미지 프로세싱 소프트웨어를 사용 하 여 단계 5.1.4에서에서 찍은 사진에서.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
접촉 방법 결과 분석
	<ol>
<li>방정식 (2)에 따라 복구 가능한 미생물의 수를 결정 합니다. (2)<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/57710/57710eq2.jpg"> 참고: 여기에서, N 은 cm2 테스트 견본; 당 당 복구 가능한 미생물의 수 C 는 격판덮개 조사; D 는 희석 요인; Cm2 샘플 디스크 직경 결정에서 테스트 대상의 표면 영역입니다 .</li>
		<li>방정식 (3)을 적용 하 여 세포 성장 저해를 반영 하기 위해 생존 (LV)의 손실을 결정 합니다. (3)<img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/57710/57710eq3v3.jpg"> 참고: 여기, C는 가능한 미생물 (N)의 평균 수 CFU/mL•cm2, 제어 표본에서 발견 한 후 24 h; S는 CFU/mL•cm2, 24 h 후 테스트 표본에서 발견 가능한 미생물 (N)의 수입니다.</li>
		<li>평균 및 생존 능력의 손실 각 샘플의 4 결정 LV(%) 값의 표준 편차를 확인 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Sydnor, E. R. M., Perl, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hospital+epidemiology+and+infection+control+in+acute-care+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Hospital epidemiology and infection control in acute-care settings.</a> Clin Microbiol Rev. 24 (1), 141-173 (2011).</li>
<li>Chessa, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcus+aureus+and+Staphylococcus+epidermidis+Virulence+Strains+as+Causative+Agents+of+Persistent+Infections+in+Breast+Implants%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis Virulence Strains as Causative Agents of Persistent Infections in Breast Implants.</a> PLoS One. 11 (1), e0146668(2016).</li>
<li>Pandey, H., Parashar, V., Parashar, R., Prakash, R., Ramteke, P. W., Pandey, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+drug+release+characteristics+and+enhanced+antibacterial+effect+of+graphene+nanosheets+containing+gentamicin+sulfate%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Controlled drug release characteristics and enhanced antibacterial effect of graphene nanosheets containing gentamicin sulfate.</a> Nanoscale. 3 (10), 4104(2011).</li>
<li>Jia, Z., Shen, D., Xu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+antibacterial+activities+of+quaternary+ammonium+salt+of+chitosan%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydr+Res%22%5BJournal%5D)">Synthesis and antibacterial activities of quaternary ammonium salt of chitosan.</a> Carbohydr Res. 333 (1), 1-6 (2001).</li>
<li>Liu, Y., Wang, X., Yang, F., Yang, X. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1387181108000425">Excellent antimicrobial properties of mesoporous anatase TiO2 and Ag/TiO2 composite films.</a> Microporous Mesoporous Mater. 114 (1-3), 431-439 (2008).</li>
<li>Wang, L., Chen, J., Shi, L., Shi, Z., Ren, L., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+promotion+of+antimicrobial+activity+on+silicon+substrates+using+a+%26%2334%3Bclick%26%2334%3B+immobilized+short+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Commun+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">The promotion of antimicrobial activity on silicon substrates using a &#34;click&#34; immobilized short peptide.</a> Chem Commun (Camb). 50 (8), Cambridge, England. 975-977 (2014).</li>
<li>Kümmerer, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15215223">Resistance in the environment.</a> J Antimicrob Chemother. 54 (2), 311-320 (2004).</li>
<li>Ng, V. W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+hydrogels%3A+A+new+weapon+in+the+arsenal+against+multidrug-resistant+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial hydrogels: A new weapon in the arsenal against multidrug-resistant infections.</a> Adv Drug Deliv Rev. 78, 46-62 (2014).</li>
<li>Hegstad, K., Langsrud, S., Lunestad, B. T., Scheie, A. A., Sunde, M., Yazdankhah, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+Wide+Use+of+Quaternary+Ammonium+Compounds+Enhance+the+Selection+and+Spread+of+Antimicrobial+Resistance+and+Thus+Threaten+Our+Health%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Drug+Resist%22%5BJournal%5D)">Does the Wide Use of Quaternary Ammonium Compounds Enhance the Selection and Spread of Antimicrobial Resistance and Thus Threaten Our Health?</a> Microb Drug Resist. 16 (2), 91-104 (2010).</li>
<li>Rana, D., Matsuura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+modifications+for+antifouling+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Rev%22%5BJournal%5D)">Surface modifications for antifouling membranes.</a> Chem Rev. 110 (4), 2448-2471 (2010).</li>
<li>Lok, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+analysis+of+the+mode+of+antibacterial+action+of+silver+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Proteomic analysis of the mode of antibacterial action of silver nanoparticles.</a> J Proteome Res. 5 (4), 916-924 (2006).</li>
<li>Chen, X., Schluesener, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanosilver%3A+A+nanoproduct+in+medical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Lett%22%5BJournal%5D)">Nanosilver: A nanoproduct in medical application.</a> Toxicol Lett. 176 (1), 1-12 (2008).</li>
<li>Ahamed, M., AlSalhi, M. S., Siddiqui, M. K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silver+nanoparticle+applications+and+human+health%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chim+Acta%22%5BJournal%5D)">Silver nanoparticle applications and human health.</a> Clin Chim Acta. 411 (23-24), 1841-1848 (2010).</li>
<li>Yeaman, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+Antimicrobial+Peptide+Action+and+Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of Antimicrobial Peptide Action and Resistance.</a> Pharmacol Rev. 55 (1), 27-55 (2003).</li>
<li>McLean, D. T. F., Lundy, F. T., Timson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IQ-motif+peptides+as+novel+anti-microbial+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">IQ-motif peptides as novel anti-microbial agents.</a> Biochimie. 95 (4), 875-880 (2013).</li>
<li>Brogden, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+peptides%3A+Pore+formers+or+metabolic+inhibitors+in+bacteria%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial peptides: Pore formers or metabolic inhibitors in bacteria?</a> Nat Rev Microbiol. 3 (3), 238-250 (2005).</li>
<li>Ghosh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecular+antibacterial+peptoid+mimics%3A+The+simpler+the+better%21%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Chem%22%5BJournal%5D)">Small molecular antibacterial peptoid mimics: The simpler the better!</a> J Med Chem. 57 (4), 1428-1436 (2014).</li>
<li>Chongsiriwatana, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptoids+that+mimic+the+structure%2C+function%2C+and+mechanism+of+helical+antimicrobial+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Peptoids that mimic the structure, function, and mechanism of helical antimicrobial peptides.</a> Proc Natl Acad Sci. 105 (8), 2794-2799 (2008).</li>
<li>Chen, Y., Mant, C. T., Farmer, S. W., Hancock, R. E. W., Vasil, M. L., Hodges, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rational+design+of+alpha-helical+antimicrobial+peptides+with+enhanced+activities+and+specificity%2Ftherapeutic+index%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Rational design of alpha-helical antimicrobial peptides with enhanced activities and specificity/therapeutic index.</a> J Biol Chem. 280 (13), 12316-12329 (2005).</li>
<li>Porter, E. A., Wang, X., Lee, H. S., Weisblum, B., Gellman, S. H. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/articles/35007145">Non-haemolytic beta-aminoacid oligomers.</a> Nature. 404 (6778), 565(2000).</li>
<li>Gao, Q., Li, P., Zhao, H., Chen, Y., Jiang, L., Ma, P. X. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2017/py/c7py01495c">Methacrylate-ended Polypeptides and Polypeptoids for Antimicrobial and Antifouling Coatings.</a> Polym Chem. 8 (41), 6386-6397 (2017).</li>
<li>Serrano-Aroca, Á, Gómez-Ribelles, J. L., Monleón-Pradas, M., Vidaurre-Garayo, A., Suay-Antón, J. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0014305707004211">Characterisation of macroporous poly(methyl methacrylate) coated with plasma-polymerised poly(2-hydroxyethyl acrylate).</a> Eur Polym J. 43 (10), 4552-4564 (2007).</li>
<li>Serrano-Aroca, Á, Monleón-Pradas, M., Gómez-Ribelles, J. L. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0032386107001590">Plasma-induced polymerisation of hydrophilic coatings onto macroporous hydrophobic scaffolds.</a> Polymer (Guildf). 48 (7), 2071-2078 (2007).</li>
<li>Serrano-Aroca, Á, Monleón-Pradas, M., Gómez-Ribelles, J. L., Rault, J. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0014305715003043">Thermal analysis of water in reinforced plasma-polymerised poly(2-hydroxyethyl acrylate) hydrogels.</a> Eur Polym J. 72, 523-534 (2015).</li>
<li>Monleón-Pradas, M., Gómez-Ribelles, J. L., Serrano-Aroca, Á, Gallego-Ferrer, G., SuayAntón, J., Pissis, P. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s003960000426">Interaction between water and polymer chains in poly(hydroxyethyl acrylate) hydrogels.</a> Colloid Polym Sci. 279 (4), 323-330 (2001).</li>
<li>Serrano-Aroca, Á, Monleón-Pradas, M., Gómez-Ribelles, J. L. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s00396-007-1755-0">Effect of crosslinking on porous poly(methyl methacrylate) produced by phase separation.</a> Colloid Polym Sci. 286 (2), 209-216 (2008).</li>
<li>Monleón-Pradas, M., Gómez-Ribelles, J. L., Serrano-Aroca, Á, Gallego Ferrer, G., Suay Antón, J., Pissis, P. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0032386100007424">Porous poly (2-hydroxyethyl acrylate) hydrogels.</a> Polymer (Guildf). 42 (10), 4667-4674 (2001).</li>
<li>Serrano-Aroca, Á, Monleón-Pradas, M., Gómez-Ribelles, J. L. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s00396-006-1614-4">Macroporous poly(methyl methacrylate) produced by phase separation during polymerisation in solution.</a> Colloid Polym Sci. 285 (7), 753-760 (2007).</li>
<li>Serrano-Aroca, Á, Llorens-Gámez, M. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0032386117307504">Dynamic mechanical analysis and water vapour sorption of highly porous poly(methyl methacrylate).</a> Polymer (Guildf). 125, 58-65 (2017).</li>
<li>Serrano-Aroca, Á, Campillo-Fernández, A. J., Gómez-Ribelles, J. L., Monleón-Pradas, M., Gallego-Ferrer, G., Pissis, P. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0032386104010158">Porous poly(2-hydroxyethyl acrylate) hydrogels prepared by radical polymerisation with methanol as diluent.</a> Polymer (Guildf). 45 (26), 8949-8955 (2004).</li>
<li>Rodríguez-Hernández, J. C., Serrano-Aroca, Á, Gómez-Ribelles, J. L., Monleón-Pradas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+nanocomposite+scaffolds+with+ordered+cylindrical+orthogonal+pores%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res+-+Part+B%3A+Appl+Biomater%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional nanocomposite scaffolds with ordered cylindrical orthogonal pores.</a> J Biomed Mater Res - Part B: Appl Biomater. 84 (2), 541-549 (2008).</li>
<li>Brígido-Diego, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acrylic+scaffolds+with+interconnected+spherical+pores+and+controlled+hydrophilicity+for+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mater+Sci+Mater+Med%22%5BJournal%5D)">Acrylic scaffolds with interconnected spherical pores and controlled hydrophilicity for tissue engineering.</a> J Mater Sci Mater Med. 40 (18), 4881-4887 (2005).</li>
<li>Serrano-Aroca, Á, Ruiz-Pividal, J. F., Llorens-Gámez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+water+diffusion+and+compression+performance+of+crosslinked+alginate+with+a+minuscule+amount+of+graphene+oxide%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Enhancement of water diffusion and compression performance of crosslinked alginate with a minuscule amount of graphene oxide.</a> Sci Rep. 7, 11684(2017).</li>
<li>Serrano-Aroca, Á, Deb, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+irregular+graphene+oxide+tubes+using+green+chemistry+and+their+potential+use+as+reinforcement+materials+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Synthesis of irregular graphene oxide tubes using green chemistry and their potential use as reinforcement materials for biomedical applications.</a> PLoS One. 12 (9), e0185235(2017).</li>
<li>Sánchez-Correa, F., Vidaurre-Agut, C., Serrano-Aroca, A., Campillo-Fernández, A. J. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/app.46158">Poly(2-hydroxyethyl acrylate) hydrogels reinforced with graphene oxide: Remarkable improvement of water diffusion and mechanical properties.</a> J Appl Polym Sci. , (2018).</li>
<li>Serrano-Aroc, Á, Iskandar, L., Deb, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Green+synthetic+routes+to+alginate-graphene+oxide+composite+hydrogels+with+enhanced+physical+properties+for+bioengineering+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Polym+J%22%5BJournal%5D)">Green synthetic routes to alginate-graphene oxide composite hydrogels with enhanced physical properties for bioengineering applications.</a> Eur Polym J. 103, 198-206 (2018).</li>
<li>Llorens-Gámez, M., Serrano-Aroca, Á <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-Cost+Advanced+Hydrogels+of+Calcium+Alginate%2FCarbon+Nanofibers+with+Enhanced+Water+Diffusion+and+Compression+Properties%5BTitle%5D)+AND+%22Polymers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Low-Cost Advanced Hydrogels of Calcium Alginate/Carbon Nanofibers with Enhanced Water Diffusion and Compression Properties.</a> Polymers (Basel). 10 (4), 405(2018).</li>
<li>Bauer, A. W., Kirby, W. M. M., Sherris, J. C., Turck, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+susceptibility+testing+by+a+standardized+single+disk+method%5BTitle%5D)+AND+%22A+J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method.</a> A J Clin Pathol. 45, 493-496 (1966).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22ISO+Specification+22196%3A+measurement+of+antibacterial+activity+on+plastics+surfaces%22">ISO Specification 22196: measurement of antibacterial activity on plastics surfaces</a>. , 584(2007).</li>
<li>Taubes, G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18635788">The bacteria fight back.</a> Science. 321 (5887), 356-361 (2008).</li>
<li>Boucher, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((10+x+%2720+progress--development+of+new+drugs+active+against+Gram-negative+bacilli%3A+an+update+from+the+infectious+diseases+society+of+America%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">10 x '20 progress--development of new drugs active against Gram-negative bacilli: an update from the infectious diseases society of America.</a> Clinical Infectious Diseases. 56 (12), 1685-1694 (2013).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

새로운 고급 재료의 항균 활동 2 보완 절차 2 기존 방법에 따라 구성 된이 따라 하기 쉬운 프로토콜에 의해 분석 될 수 있다: 한 디스크 확산 테스트38 및 항균 활성 측정 ISO 22196:2007 정상39에 따라 소재 표면.
이 연구 분야에서 많은 문학에서 보고 된 항균 테스트 되 높은 분석 결과 따라 다릅니다. 따라서, 그것은 매우 상세한 중요 하 고 일관 된 실험실에서 장소에 프로토콜. 이 기사는 그 방향으로 단계 이다. 또한, 그것은이 분야에서 경험이 부족 하 고 정확한 깊이, 단계별 절차에 따라 요구 하는 많은 연구자에 대 한 매우 유용한 수 있습니다.
이 프로토콜은 10-m m 직경의 디스크 모양으로 잘라 재료의 많은 유형에 사용할 수 있습니다. 취 성 재료 절단 과정을 쉽게 렌더링 하 1 시간을 위한 적당 한 용 매에서 불 수 있다. 따라서, alginates 같은 친수성 물질 압력가 증류수에 하이드레이션 수 있습니다. 에탄올, 케 톤, 등 dichloromethane, 다른 용 매는 그들을 절단 하기 전에 1 시간에 대 한 소수 성 자료를 사용할 수 있습니다. 그러나, poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) 같은 일부 물질 부 될 필요가 없습니다 하 고 그들은 직접 잘라 수 있습니다. 그 후, 샘플 소재 디스크 진공 오븐에서 건조 하 고 오염 위험을 피하기 위해 에탄올과 자외선에 1 시간에 대 한 각 표본 소독 매우 중요 하다.
이 프로토콜 권장 TSA TSB 문화 미디어와 광범위 한 미생물에 도달 3 미생물의 순수 문화를 사용 하 여: 그람 양성 박테리아 포도 상 구 균, 대장균, 그람 음성 세균 그리고 효 모 Candida albicans. 그러나, 대안 문화 미디어와 다른 외피 조건 필요로 다른 미생물도 사용 될 수이 프로토콜. 때때로, 단 1 미생물 새로운 소재의 항균 성 활동의 초기 아이디어를가지고 테스트 됩니다.
보여주는 권장된 3에 대 한 강한 항균 성 활동 다른 미생물의 종류 또한 메 티 실린 내성 포도 상 구 균 epidermidis (MRSE) 같은 항생제 내성 병원 균에 대 한 테스트 해야 하는 재료는 이 프로토콜 성공적으로 이용 되어 있다. 많은 우려를 원인이 되는 다른 중요 한 약물 내성 미생물은 그람 양성 methicillin-내성 황색 포도상구균 (MRSA)과 vancomycin 내성 Enterococci (VRE), 그람 음성 녹 농 균40,41.
Biofilm 억제와 다른 유형의 바이러스, 기생충 등 미생물에 대 한 재료의 항균 활성이이 프로토콜을 테스트할 수 없습니다. 그러나,이 프로토콜 제공 합니다 매우 유용한 출발점을의 새로운 항균 성 연구에 대 한 고급 소재.
항균 agar 디스크 확산 테스트에서 중요 한 단계는 샘플 디스크 일부 자료 접어 최대한 빨리 그들은 한 천 매체 연락 때문에 접시의 중앙에 배치 될 때 발생 합니다. 이 경우에, 신중 하 게 샘플을 펼쳐 핀셋의 멸 균 쌍을 사용 하는 것이 좋습니다. 다른 한편으로, 접촉 방법, 컨트롤을 세척 하는 것이 중요에 샘플 디스크 아주 잘 PBS에 pipetting 4 번 다음 활기찬 vortexing 쥡니다 아무 가능한 미생물을 위해 그들에 의해 남아 자료를 준수 표면입니다.
이 비디오 프로토콜 bioprocess 공학, 조직 공학, 제어 약물 전달, 포장 재료, 폐수 처리, 농업, 바이오와 함께 사용 하는 등 많은 공학 응용 프로그램에서 활용할 수 있는 매우 바람직한 항균 능력입니다.
이 프로토콜으로 얻은 결과 질적 (이미지) 및 정량 (항균 "헤일로" 및 생존 능력의 손실의 정규화 폭)의 재현성 (평균 ± 표준 편차)의 좋은 분석. 일방통행 ANOVA, 터키의 임시 게시물 분석, 그들은, 통계적으로, 크게 공부 하기 위하여 뒤에 의해 보급 및 접촉 방법 결과 분석으로 얻은이 평균값을 분석 해야 비교할 때 다른 재료, 다른 (p < 0.01).

임 플 란 트 실패는 종종 항균 예방 및 무 균 작업 조건에도 불구 하 고 발생 하는 미생물 감염의 결과 이다. 이 문제는 매우 높은 의료 비용을 일으키는 이며 환자1가운데 비참 한. 황색 포도상구균 같은 박테리아는 현재 카 및 다른 의료 임 플 란 트와 관련 된 병원내 감염에 매우 위험한 병원 체 것 여겨진다 고 의료 기기2의 주요 오염 물질은 중요 합니다. 따라서, 소설 항균 전략의 개발 매일 및 의료 사용에 대 한 긴급 하 게 필요 합니다.
항균 성 대리인 등 항생제3, 비밀이 암모늄 화합물4, 금속 이온/산화물5, 항균 성 펩 티 드 (암페어)6. 항생제는 점차적으로 때문에 세균 저항7, 항생제 남용8때문에 비효율적 되고있다. 비밀이 암모늄 화합물 미생물 저항9때문에 단기 사용을 위한 매우 효율적인만 있습니다. 금속 이온/산화물 매우 효과적인 항균 대리인으로 이용 되었습니다 오래 고 붕대, 물 필터, 페인트, 등10,,1112를 포함 하 여 많은 일반적인 상용 제품에 사용 됩니다. 그러나, 그것은 이러한 유형의 화합물13포유류 세포 어떤 종류에 독성 수 입증 되었습니다.
앰프는 우수한 항균 및 immunomodulatory 속성14,15, 표시 그리고 박테리아16그들에 대 한 저항을 개발 하기 위해 매우 어려운 찾을 것 같다. 그러나, 순수 앰프를 생산 하는 과정은 비싼; 따라서, 대규모 생산은 실용적 이다. 따라서, 앰프 생산에 문제가 되었습니다 카운터 전략 개발 (예:작은 분자 항균 peptoid 모방17, peptoids18, α 펩 티 드19 , β 펩 티 드20). 메타 크 릴 산-엔드 polypeptides 및 polypeptoids 항균 및 antifouling 코팅21합성 되었습니다.
순수에서 첨단된 소재 등 새로운 항균 제의 개발 또는 하이브리드 형태, 방지 하 고 multidrug 저항 감염을 치료 수는 점점 더 필요 합니다. 광범위 한 조직과 bioprocess 공학 등 다양 한 생명 공학 분야에 대 한 새로운 고급 재료 개발 되었습니다 향상 된 화학 및 물리적 특성을 가진 마지막 십 년간에서 여러 가지 방법을 통해: 플라즈마 중 합에 접목 소수 성 기질22,,2324, 가교 밀도25,26의 조정, 솔루션27,,2829 중 합 , 30, porogen 해산31,32, 나노 소재 그래 핀 산화물 (이동)33,,3435,36 등의 여과 탄소 nanofibers (CNFs)37
이러한 새로운 물질의 항균 능력의 연구 기 하 급수적으로 그들의 잠재적인 생명 공학 적용을 증가할 수 있었다 그리고, 그러므로, 되고있다 필수. 우리는 이러한 새로운 고급 재료의 항균 활동을 계량 하는 따라 하기 쉬운 프로토콜을 제시. 여기, 샘플 준비 후 두 가지 보완 방법 뒤에: 첫 번째는 agar 디스크 확산 테스트38 (확산 방법)에 따라 이며 두 번째는에 항균 성 활동을 측정 하기 위해 ISO 22196:2007 정상39 소재 표면은 (접촉 방법)입니다.

<table><tbody><tr><td>원통형 펀치&nbsp;</td><td></td><td></td><td>직경 10mm</td></tr>의 <tr><td>페트리 접시</td><td>soria genlab</td><td>P101</td><td>직경 90mm, 멸균</td></tr><tr><td>트립틱 소이 한천(TSA)</td><td>Liofilchem</td><td>610052</td><td>탈수 매체 500g(분말)</td></tr><tr><td>트립틱 콩 육수(TSB)</td><td>Liofilchem</td><td>610053</td><td>건조 배지 500g(분말)</td></tr><tr><td>멸균 면봉</td><td>EUTOTUBO</td><td>300200</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기 튜브</td><td>VIDRA FOC, SA</td><td>429900</td><td>50 mL, 멸균</td></tr><tr><td>에탄올</td><td>VWR</td><td>83813360</td><td>절대 에탄올</td></tr><tr><td>멸균 48웰 플레이트</td><td>COSTAR</td><td>3548</td><td>뚜껑이 있는 평평한 바닥, 조직 배양 처리, 비발열성, 폴리스티렌</td></tr><tr><td>한 쌍의 핀셋</td><td>BRAUN</td><td>24612036</td><td>Toothless</td></tr><tr><td>Sterile phosphate buffered saline (PBS).</td><td>VWR</td><td>E404-100TAPBS</td><td></td></tr><tr><td>진공 오븐, 커넥티드 진공 펌프가 있는 진공 오븐</td><td>JP Selecta, SA</td><td>5900620</td><td></td></tr><tr><td>층류 후드</td><td>TELSTAR Technologies, SL</td><td>TELSTAR AH-100</td><td>12.0 W 램프 UV-C 방사선</td></tr><tr><td>클래스 II 생물 안전 캐비닛</td><td>LABOGENE</td><td>MARS 1200</td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td>ASTEC CO, LTD</td><td>SCA-165DR</td><td></td></tr><tr><td>볼텍스 믹서</td><td>Biosan</td><td>V-1 Plus</td><td></td></tr><tr><td>분광 광도계</td><td>Macherey-Nagel, 독일</td><td>나노 컬러 UV/VIS II</td><td></td></tr><tr><td>분젠 버너</td><td>JP Selecta, SA</td><td>7001539</td><td></td></tr><tr><td>알코올 버너</td><td>VIDRA FOC, SA</td><td>1658/20</td><td>멸균이 필요한 경우 클래스 II 생물 안전 캐비닛</td></tr> 내부 살균 오<tr><td>비탈 쉐이커</td><td>장갑 스테딤</td><td>8864845</td><td></td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>SELECTA</td><td>3000617</td><td>50/60 Hz</td></tr><tr><td>디지털 캘리퍼스</td><td>ACHA</td><td>17-260</td><td>0-150 mm</td></tr><tr><td>혈청학 피펫</td><td>Fisherbrand</td><td>13-678-11</td><td>25 mL, 멸균</td></tr><tr><td>혈청 피펫</td><td>VWR</td><td>612-4950</td><td>5 mL, 멸균</td></tr><tr><td>혈청 피펫</td><td>VWR</td><td>612-5541</td><td>10 mL, 멸균</td></tr><tr><td>마이크로피펫</td><td>GILSON</td><td>FA10005P</td><td>Pipetman L P200L, 플라스틱 20-200 &마이크로; L</td></tr><tr><td>마이크로피펫</td><td>GILSON</td><td>F123602</td><td>Pipetman P1000, 200-1000 &micro; L</td></tr><tr><td>마이크로피펫&nbsp;</td><td>GILSON</td><td>FA10016</td><td>Pipetman L P12X300L, 20-300 &마이크로; L</td></tr><tr><td>마이크로 피펫 팁</td><td>LABBOX</td><td>TIBP-200-960</td><td>2-200 &micro; L</td></tr><tr><td>마이크로 피펫 팁</td><td>LABBOX</td><td>TIBP-1K0-480</td><td>100-1000 &micro; L</td></tr><tr><td>사전 멸균 튜브&nbsp;</td><td>인슐랩</td><td>301402</td><td>10 mL&nbsp;</td></tr><tr><td>사진 카메라</td><td>Canon EOS 5D</td><td></td><td>고해상도의 모든 카메라도 사용할 수 있습니다</td></tr><tr><td>Gram 양성 박테리아 황색포도상구균</td><td></td><td>&nbsp; 균주 V329</td><td>Cucarella et al. J Bacteriol 183 (9),&nbsp; 2888&ndash; 2896 (2001)</td></tr><tr><td>그람 음성 박테리아 Escherichia coli</td><td>Colecci&oacute; n Espa&ntilde; ola de Cultivos Tipo CECT</td><td>CECT 101</td><td></td></tr><tr><td>효모 Candida albicans</td><td>Colecci&oacute; n Espa&ntilde; ola de Cultivos Tipo CECT CECT</td><td>1394</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기 튜브&nbsp;</td><td>DASLAB</td><td>175508</td><td>1,5 mL</td></tr><tr><td>오토클레이브</td><td>JP Selecta, SA</td><td>4002136</td><td></td></tr><tr><td>분광 광도계-큐벳</td><td>UVAT Bio CB</td><td>F-0902-02</td><td>4,5 mL</td></tr><tr><td>Drigalski 주걱</td><td>LABBOX</td><td>SPRP-L05-1K0</td><td>멸균, 일회용&nbsp;</td></tr><tr><td>유리 볼(직경 2mm)</td><td>Hecht Karl</td><td>1401/2</td><td>오토클레이브, Drigalski 주걱</td></tr><tr><td>오토클레이브 백</td>에 대한 대체 장치 <td>DELTALAB</td><td>200318</td><td>미생물 잔류물 또는 오염된 물질을 살균하기 위해</td></tr><tr><td>전자 피펫 주입 장치</td><td>JetPip</td><td>JET BIOFIL</td><td></td></tr><tr><td>ISO 나사산이 있는 실험실용 병, 눈금이 매겨진, 붕규산 3.3</td><td>LABBOX</td><td>SBG3-100-010</td><td>100 mL, 오토클레이빙 배양 배지용</td></tr><tr><td>ISO 나사산이 있는 실험실 병, 눈금이 매겨진 붕규산 3.3</td><td>LABBOX</td><td>SBG3-250-010</td><td>250 mL, 오토클레이브 배양 배지용</td></tr><tr><td>ISO 나사산이 있는 실험실 병, 눈금이 매겨진 붕규산 3.3</td><td>LABBOX</td><td>SBG3-500-010</td><td>500 mL, 오토클레이브 배양 배지용</td></tr><tr><td>ISO 나사산이 있는 실험실 병, 눈금이 매겨진 붕규산 3.3</td><td>LABBOX</td><td>SBG3-1K0-010</td><td>1000 mL, 고압멸균 배양 매체</td></tr><tr><td>라텍스 장갑</td><td>DENIA</td><td>2278000000</td><td></td></tr><tr><td>멸균용 표시 테이프</td><td>LABBOX</td><td>STAP-A55-001</td><td>멸균 공정에 노출되면 함침지가 착색되는 자체 접착 테이프.</td></tr><tr><td>범용 시험관 랙</td><td>LABBOX</td><td>MTSP-001-001</td><td>원심분리기 튜브를 고정하기 위해</td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기 튜브 랙</td><td>VWR</td><td>211-0210</td><td>마이크로 원심분리기 튜브를 고정하기</td></tr><tr><td>위해 멸균 루프</td><td>ACEFE S.A.</td><td>100140055</td><td>10 &마이크로; 미생물 배양 용량의 L&nbsp;</td></tr><tr><td>재질 : M1</td><td>Universidad Cat&oacute; 리카 데 발렌시아 산 비센테 M&aacute; rtir (UCV)</td><td></td> <td>재료 유형 1&nbsp;</td></tr><tr><td>재질 : M2</td><td>Universidad Cat&oacute; 리카 데 발렌시아 산 비센테 M&aacute; rtir (UCV)</td><td></td><td>재료 유형 2&nbsp;</td></tr><tr><td>재질 : M3</td><td>Universidad Cat&oacute; 리카 데 발렌시아 산 비센테 M&aacute; rtir (UCV)</td><td></td> <td>재료 유형 3</td></tr><tr><td>재료 M4</td><td>Universidad Cat&oacute; 리카 데 발렌시아 산 비센테 M&aacute; rtir (UCV)</td><td></td><td>재료 유형 4&nbsp;</td></tr><tr><td>재질 C</td><td>Universidad Cat&oacute; 리카 데 발렌시아 산 비센테 M&aacute; rtir (UCV)</td><td></td><td>제어 물질</td></tr></tbody></table>

생명 공학 응용 프로그램에 대 한 고급 재료의 항균 특성

Antimicrobial Characterization of Advanced Materials for Bioengineering Applications

향상 된 특성을 가진 첨단된 신소재의 개발 다양 한 생명 공학 응용 프로그램에서에서 점점 더 중요 해지고 있다. 따라서, 많은 새로운 생체 모방 제어 약물 전달 및 조직 공학 등 생물 의학 응용 프로그램에 필요한 특정 환경에 설계 되는 합니다. 셀 이나 효소의 동원 정지에 대 한 향상 된 특성을 가진 재료의 개발 bioprocess 공학에서 현재 연구 주제 이기도합니다. 그러나, 이러한 응용 프로그램에 있는 물자의 가장 바람직한 속성 중 어떤 바람직하지 않은 감염을 피하기 위해 항균 능력입니다. 이 위해, 우리 제시 소재 표면 (연락처에 항균 성 활동을 측정 하기 위해 ISO 22196:2007 규범 (ii) (i) 한 디스크 확산 시험 (확산 방법)에 따라 재료의 항균 특성에 대 한 따라 하기 쉬운 프로토콜 방법)입니다. 이 프로토콜은 그람 양성 및 그람 음성 박테리아와 효 모 미생물의 광범위 한 커버를 사용 하 여 수행 되어야 합니다. 예를 들어, 황색 포도상구균, 대장균, 칸디 다 albicans에 대 한이 프로토콜을 따르고 다른 화학 성격으로 4 재료 테스트 합니다. 이 테스트의 결과 첫 번째 소재와 다른 3 재료에 대 한 그람 양성 및 그람 음성 세균에 대해 항균 활동 증가 대 한 비 항균 활동을 전시 한다. 그러나, 4 재료의 아무도 Candida albicans의 성장을 억제 수 있습니다.

이 프로토콜은 고용 했다, 예를 들어, 3에 대 한 다른 화학 성격을 가진 4 물자의 항균 능력을 테스트 권장 미생물: 황색 포도상구균, 대장균, 칸디 다 albicans . 컨트롤 디스크 (C, 이미지 표시 되지 않음)에서 발생 한 디스크 확산 테스트 (확산 방법)의 결과 첫 번째 자료 (M1)에 대 한 비 항균 활동 전시 및 그람 양성 및 그람 음성에 대 한 항균 활동 증가 박테리아는 다른 3 재료 M2, M3 및 m 4는 ( 그림 2참조).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57710/57710fig2.jpg"> 그림 2: 항균 확산 방법 결과. 이 패널 외피의 24 시간 후 4 소재 (M1, M2, M3 및 m 4) 디스크 (두께 1 m m x 10 m m 직경) S. 균 및 대장균 에 대 한 항균 성 확산 메서드를 보여 줍니다. <a href="/files/ftp_upload/57710/57710fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
그림 3 항균 "헤일로" (nw헤일로) 자료에 대 한 다른 예제에서는 M1, M2, M3, m 4 그람 양성 및 그람 음성 세균에 대 한 방정식 (1) 계산의 다른 표준화 된 폭을 보여준다. 그러나, 4 재료의 아무도 효 모 Candida albicans (이미지 표시 되지 않음)의 성장을 억제 수 있었다.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57710/57710fig3v2.jpg"> 그림 3: 결과 항균 확산 "헤일로". 이 패널 외피의 24 h 후 각 소재 (M1, M2, M3 및 m 4) 디스크 (두께 1 m m x 10 m m 직경) S. 균 및 대장균 에 대 한 정규화 된 "헤일로" (nw헤일로)을 보여줍니다. 차이 통계적으로 유의 한 (p &lt; 0.01). 그러나, 샘플 M1 항균 활동이 전시. <a href="/files/ftp_upload/57710/57710fig3v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
접촉 방법의 결과 또한 첫 번째 자료 (M1)에 대 한 비 항균 활동 전시 컨트롤 디스크 (C)와 Grampositive와 다른 3 자료 (참조에 대 한 그람 음성 세균에 대 한 증가 항균 활동에서 발생 그림 4)입니다.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57710/57710fig4v3.jpg"> 그림 4: 항균 메서드 결과 문의. 이 패널은 S. 구 균 및 대장균 (10-4의 희석 요인)에 대 한 보육의 24 시간 후 4 소재 (M1, M2, M3 및 m 4) 표면 항균 활동 분석 결과의 ISO 22196:2007에 따라 각각 90 m m 접시를 보여줍니다. C 는 외피의 24 h 후 제어 디스크에서 복구 가능한 박테리아 이다. <a href="/files/ftp_upload/57710/57710fig4v3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
이 프로토콜에 표시 된 대로 손실 가능성 (%)의 방정식 (2)와 (3)에 의해 결정 되었다 ( 그림 5참조).
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57710/57710fig5v2.jpg"> 그림 5: 접촉 방법에 의해 생존의 손실. 이 패널 소재 표면에 M1, M2, M3, 및 S. 구 균 및 대장균 에 대 한 m 4에 대 한 가능성 (%)의 감소를 보여줍니다. 샘플 M1 항균 활동이 전시. <a href="/files/ftp_upload/57710/57710fig5v2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
그러나, 4 재료의 접촉 방법에 의해 효 모 칸디 다 albicans 의 성장을 중 (이미지 표시 되지 않음)을 억제 수 있었다. 따라서, 이러한 4 신소재 3 긍정적인 항균 결과 그람 양성 및 그람 음성 세균에 대 한 그리고 따라서 매우 높은 항균 활동이 요구 많은 공학 응용 프로그램에 대 한 도움이 될 수 있습니다. 그러나, 4 재료의 아무도 효 모 성장을 억제 수 있었다.

우리는 고급 재료의 항균 특성에 대 한 프로토콜을 제시. 여기, 소재 표면에 항균 성 활동 서로 보완 하는 두 가지 방법에 의해 측정 된다: 하나는 agar 디스크 확산 테스트 기반 이며 다른 표준 절차 ISO 22196:2007 규격에 따라.

The development of new advanced materials with enhanced properties is becoming more and more important in a wide range of bioengineering applications. ...

이 방법은 항균 특성과 같은 재료 공학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있으며, 이는 많은 생명 공학 응용 분야에 매우 바람직합니다. 이 기술은 정확한 결과를 위해 심층적인 단계별 절차가 필요한 경험이 부족한 연구자를 돕기 위해 실험실 전반에 걸쳐 일관된 프로토콜로 활용될 수 있습니다. 우리는 항균 프로토콜을 찾기 시작했을 때 이 방법에 대한 아이디어를 처음 떠올렸고, 문헌에 이에 대한 자세한 프로토콜이 없다는 것을 깨달았습니다.이 연구에서는 화학적 성질이 다른 4가지 고급 재료와 대조 물질이 항균 활성에 대해 테스트됩니다. 각 재료를 10mm 직경의 디스크로 절단하여 준비합니다. 다음으로, 각 표본을 70% 에탄올에 10분 동안 담근 다음 측면당 1시간 동안 자외선을 조사하여 멸균합니다.세 가지 다른 미생물을 사용하여 첨단 재료의 항균 활성을 테스트합니다. 그람 양성 박테리아, 황색포도상구균, 그람 음성 박테리아, 대장균 및 효모, 칸디다 알비칸스. 멸균 면봉을 사용하여 멸균 원심분리기 튜브에 들어 있는 25mL의 트립틱 소이 육수(TSB)에 각 미생물의 몇 군락을 재현탁합니다.균일한 혼합을 달성하기 위해 1분 동안 소용돌이. 분광 광도계로 각 미생물 배양에 대해 540nm에서 흡광도를 측정합니다. 각 미생물의 농도를 적절한 수의 집락 형성 단위 또는 밀리리터당 CFU로 조정합니다.미생물 현탁액을 5초 동안 소용돌이켜 미생물 분산을 개선하고 이 미생물 현탁액에 멸균 면봉을 잠시 담그십시오. 배양물이 들어 있는 튜브 벽에 면봉을 눌러 면봉에서 과도한 액체를 제거합니다. 멸균 면봉으로 각 미생물 육수 현탁액을 트립틱 콩 한천 또는 TSA 플레이트의 표면에 세 개의 평면으로 균일하게 줄무늬를 만들어 전체 표면을 미생물로 덮습니다.접종 후 5분 동안 접시를 말리십시오. 미생물 현탁액 현탁액은 나중에 미생물 현탁액 농도와 순도를 확인하기 위해 사용할 수 있도록 벤치 상단에 그대로 둡니다. 핀셋을 96% 에탄올이 든 비커에 담근 다음 알코올 버너로 불을 붙여 살균합니다.멸균 핀셋을 사용하여 테스트할 샘플 디스크를 TSA 플레이트 중앙에 놓습니다. TSA 플레이트를 섭씨 37도에서 24시간 동안 거꾸로 배양합니다. 확산 테스트 결과를 분석하려면 디지털 캘리퍼를 사용하거나 사진을 찍고 적절한 이미지 처리 소프트웨어를 사용하여 억제 영역의 직경과 샘플 디스크 직경을 측정합니다.이 절차는 이전에 측정된 미생물 농도가 정확한지 확인하고 미생물 환경 오염이 없는지 확인하는 데 필요합니다. 적절한 오토클레이브 팁과 무균 조건이 있는 마이크로피펫을 사용하여 멸균 TSB를 멸균 마이크로 원심분리 튜브에 분주합니다. 음성 대조군으로 활용될 샘플을 포함합니다.TSA 플레이트에 줄무늬를 만들기 위해 이전에 사용된 미생물 배지 현탁액으로 6개의 소수점 연속 희석을 수행합니다. 사전 멸균된 Drigalski 주걱을 사용하여 선택한 각 희석액 100l를 TSA 플레이트에 펴 바릅니다. TSA 플레이트에 미생물이 없는 TSB 배지 100l를 음성 대조군으로 펴 바릅니다.TSA 플레이트를 섭씨 37도에서 24시간 동안 배양합니다. 다음 날에는 콜로니의 수를 세어 밀리리터당 CFU가 이전에 결정된 것과 유사한지 확인합니다. 네거티브 컨트롤 플레이트를 확인하여 미생물 환경 오염이 없는지 확인하십시오.TSB에서 테스트할 다양한 미생물을 섭씨 37도의 궤도 셰이커에서 하룻밤 동안 배양하여 이 절차를 시작합니다. 다음 날, 각 야간 배양의 OD540을 측정한 다음 50mL 사전 멸균 원심분리기 튜브에 20mL의 TSB에 각 배양액을 약 10 - 6 CFU의 농도로 희석합니다. 각 유형의 재료로 구성된 디스크 4개와 제어 디스크 4개를 멸균 48웰 플레이트의 별도 웰에 놓습니다.각 디스크 표면에 미생물 현탁액 150l를 피펫으로 분사합니다. 플레이트를 섭씨 37도의 인큐베이터에서 24시간 동안 배양합니다. 48웰 플레이트를 24시간 동안 배양한 후, 850l의 멸균 PBS를 4개의 샘플 디스크와 4개의 대조 디스크 각각의 표면에 피펫팅하고 미생물 현탁액과 혼합합니다.48웰 플레이트에서 각 PBS 미생물 현탁액 혼합물과 각 디스크를 수집하여 15mL 사전 멸균 튜브로 옮깁니다. 1 분 동안 PBS 미생물 현탁액 혼합물과 디스크를 소용돌이. 50Hz에서 5분 동안 초음파 처리한 다음 다시 1분 동안 소용돌이하여 생존 가능한 미생물이 재료 표면에 부착되지 않도록 합니다.초음파 처리된 배양물과 TSB를 포함하는 멸균 마이크로 원심분리기 튜브의 10진수 연속 희석을 수행합니다. TSA 플레이트에 각 희석액 100l를 바르고 섭씨 37도에서 24시간 동안 플레이트를 호기성으로 배양합니다. 24시간 후 군체의 수를 세고 이 숫자를 밀리리터당 CFU로 표시합니다.그런 다음 접촉 방법 결과는 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 분석됩니다. 한천 디스크 확산 테스트의 결과는 첫 번째 재료에 대해 비 항균 활성을 보여주고 다른 세 가지 재료에 대해 S.aureus 및 E.coli에 대한 항균 활성이 증가하는 것을 보여줍니다. 이 그래프는 배양 24시간 후 S.aureus 및 E.coli에 대한 각 재료 디스크의 정규화된 후광을 보여줍니다.접촉 방법의 결과는 또한 첫 번째 재료에 대한 비 항균 활성을 나타내고 다른 세 가지 재료에 대해 그람 양성 및 그람 음성 박테리아에 대한 항균 활성이 증가함을 나타냅니다. C는 배양 24시간 후 제어 디스크에서 회수된 생존 가능한 박테리아입니다. 이 그래프는 재료 표면에서 S.aureus 및 E.coli에 대한 4가지 재료의 생존력 손실률을 보여줍니다.샘플 M1은 항균 활성을 나타내지 않았습니다. 여기에 나타나있지는 않지만, 4가지 물질 중 어느 것도 다른 방법으로 효모인 칸디다 알비칸스(Candida albicans)의 성장을 억제할 수 없습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 이 두 가지 상호 보완적인 방법으로 항균 활성을 결정하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

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