더블 챔버 Plethysmography 여 의식 생쥐에 호흡기 기능의 평가

이 기술은 호흡기 연구, 안전성 약리학 및 약물 개발을 포함한 다양한 분야에서 핵심 질문을 해결하는 데 도움이 될 것입니다. 이 기술의 주요 장점은 기준선과 도전 중 모두에서 의식이 있는 동물의 호흡 기능을 평가하기 위해 신뢰할 수 있는 판독값을 제공한다는 것입니다. 이 기술은 실험 프로토콜이 동물의 정상적인 생리적 상태에서 거의 벗어나지 않을 것을 요구할 때 특히 유용합니다.

동물이 구속되어 있지만 그렇지 않으면 정상적으로 호흡하여 기도 폐쇄 외에도 호흡 패턴을 평가할 수 있습니다. 실험 당일에 실험 세션을 시작하고 적절한 구성 파일을 로드합니다. 실험과 동물의 정보를 입력합니다.

완료되면 창 하단의 실행 버튼을 클릭합니다. 시스템 보정을 진행합니다. 각 부위와 입력 신호를 개별적으로 보정합니다.

튜빙 조각을 통해 헤드 챔버에 연결된 바이어스 유량 발생기를 켜고 유량을 조정합니다. 캡으로 헤드 챔버의 상단 개구부를 닫습니다. 흉실의 후면 패널을 분리합니다.

그런 다음 머리와 체실 사이의 고무 구멍 내부에 보정 도구를 단단히 삽입하여 밀폐 밀봉을 만듭니다. 흉곽 챔버의 후면 패널을 닫았다가 다시 부착합니다. 소프트웨어 도구 모음 메뉴에서 Tuning으로 이동한 다음 Calibrate로 이동합니다.

Input one(입력 하나)으로 이동하고 calibrate(보정)를 선택하여 흉추 유동 신호에 대한 보정 대화 상자를 시작합니다. 보정 대화 상자 창에 나열된 매개변수에 적절한 설정이 표시되는지 확인합니다. 적용된 물리적 스트레스 낮은 값은 0이어야 합니다.

적용된 물리적 스트레스 값이 높은 값은 초당 마이너스 20밀리리터여야 하며 샘플은 적분으로 설정되어야 합니다. 완료되면 샘플 창에서 낮음을 클릭합니다. 생성된 신호가 디스플레이 창에서 일정한지 확인한 다음 닫기를 클릭합니다.

튜브 조각의 플라스틱 커넥터를 사용하여 흉강실의 측면 포트를 통해 20ml 주사기를 연결합니다. 샘플 창에서 높음을 선택하고 가능한 한 일정한 유속으로 2초 동안 20ml의 공기를 챔버에 즉시 주입합니다. 생성된 신호가 디스플레이 창 내부에 완전히 나타나는지 확인합니다.

화살표 아이콘을 사용하여 신호가 0선을 중심으로 중심에 있고 대칭인지 확인합니다. 그런 다음 닫기를 클릭하십시오. 샘플 창에서 Remove AC offset(AC 오프셋 제거)을 클릭하여 0에서 오프셋을 제거합니다.

흉부 챔버와 유사한 방식으로 헤드 챔버를 2번 입력을 선택하여 보정합니다. 이번에는 높은 값을 마이너스 20 대신 초당 플러스 20밀리리터로 설정합니다. 기숙사에서 멀리 떨어진 조용한 곳에서 일하십시오.

실험을 시작하기 전에 동물을 구속기와 절차에 적응시킵니다. 침습적이지 않고 마취가 필요하지 않기 때문에 동물이 편안하고 잘 적응하며 침착한 조건에서 작업하면 챔버 사이의 모발 누출 경향을 제한하고 데이터 품질을 극대화할 수 있습니다. 동물의 무게를 잰다.

동물에게 적합한 구속구를 선택하십시오. 뒤쪽 개구부에서 진행하여 구속장치 안에 동물을 삽입합니다. 장치를 수직으로 잡으면 도움이 될 수 있습니다.

동물이 제자리에 놓이면 백 플런저를 삽입하고 과도한 힘을 가하지 않고 부드럽게 제자리에 고정합니다. 동물이 정상적으로 호흡하는지 육안으로 확인하십시오. 필요한 경우 잠금 장치를 이동하여 위치를 조정하십시오.

동물의 콧방울이 콧방울 바깥쪽으로 튀어나와 주둥이가 구속기의 내벽에 닿아 있는지 확인합니다. 흉실의 후면 패널을 분리합니다. 흉실의 고무 구멍을 통해 동물을 포함하는 구속제를 삽입하고 챔버를 닫습니다.

헤드 챔버를 부착하고, 바이어스 흐름을 제공하고, 동물이 최소 5분 동안 휴식을 취할 수 있도록 합니다. 동물이 진정되면 첫 번째 단계를 선택하여 명령 프로토콜을 시작한 다음 실행을 클릭합니다. 컴퓨터 화면에서 동물의 호흡 신호가 규칙적이고 부드러운지 확인하십시오.

소프트웨어는 호흡 단위로 계산된 매개변수를 자동으로 표시합니다. 동물의 매개변수가 안정적인지 확인합니다. 기준 조건에서 최대 10분 동안 호흡 패턴을 기록합니다.

에어로졸에 의한 테스트 물질 투여와 관련된 프로토콜의 경우, 먼저 필요에 따라 분무기를 시간과 듀티 사이클에 맞게 조정합니다. 차량 챌린지를 수행하고 응답을 기록합니다. 필요한 경우 분무기의 농도를 변경하고 단계를 확대하여 동물을 시험 물질의 농도 증가에 노출시킵니다.

각 관리 후 응답을 기록합니다. 이 예에서는 메타콜린 밀리리터당 15밀리그램을 테스트합니다. 특정 기도 저항의 최대 증가는 그 직후 기록되고 그 후 천천히 기준선 값으로 돌아가는 것으로 보입니다.

실험 세션이 끝나면 동물을 방과 우리로 되돌려 놓습니다. 세션 사이에 혈량계 챔버를 청소하고 분무기를 물로 헹굽니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 데이터 분석을 진행합니다.

다음은 BALB/c 마우스 두 그룹에서 3일 연속으로 기준선에서 호흡 기능을 반복적으로 평가한 결과입니다. 대조군 1명과 폐 알레르기성 염증이 있는 대조군. 이중 챔버 혈량측정법(double chamber plethysmography)에 의해 제공되는 매개변수의 선택에 대해 안정적이고 비교 가능한 값을 얻었다.

이 값들은 호흡수, 제목 부피, 분당 환기, 흡기 멈춤, 제목 중간 호기량에서의 흐름 및 특정 기도 저항에 대해 표시되었습니다. 호흡 기능의 변화와 흡입된 메타콜린의 용량 증가에 대한 반응도 대조군 및 알레르기성 C57BL/6 마우스의 반응 정도를 평가하기 위해 연속적으로 수행되었습니다. 그 결과, 2일째와 3일째에 알레르기 마우스에서 과장된 반응 정도와 함께 메타콜린의 용량을 증가시킴에 따라 특정 기도 저항이 점진적으로 증가할 것으로 예상됨을 보여줍니다.

다음 날, 뉴턴 저항은 강제 진동 기법으로 측정되었습니다. 이 매개변수의 변화는 주로 큰 전도 기도의 저항 변화를 반영합니다. 기준선에서 그리고 메타콜린에 대한 반응으로 측정된 뉴턴 저항은 동일한 동물에서 전날 측정된 특정 기도 저항과 잘 상관관계가 있었습니다.

이 기법은 한 번에 수많은 동물을 평가하고, 급성 반응의 동역학을 포착하고, 며칠 동안 지속된 실험 중에 반복적으로 호흡 기능을 측정하는 데 편리합니다. 이 절차에 따라 기도 저항과 같은 호흡 역학의 직접 측정으로 평가를 보완하기 위해 강제 연관 기법과 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다. 이중 챔버 혈량측정법은 특히 실험 프로토콜에서 동물이 의식을 가져야 할 때 호흡 패턴과 기도 폐쇄의 지리학을 평가하는 흥미로운 접근 방식을 제공합니다.