모기의 벡터 역량을 분석 하는 방법으로 타 액 분 비를 강제

이 방법은 모기 종이 특정 바이러스에 대한 유능한 매개체인지 여부와 같은 모기 매개 질병 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법의 가장 큰 장점은 쥐와 같은 실험실 동물을 사용하지 않고도 많은 양의 모기를 동시에 분석할 수 있다는 것입니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 연습을 통해서만 습득할 수 있는 소근육 운동 기술이 필요하기 때문에 어려움을 겪을 것입니다.

이 기술의 시각적 시연은 핵심 단계를 배우기 어렵기 때문에 매우 중요합니다. 그들은 모기와 바이러스를 다루는 경험과 소근육 운동 기술이 필요합니다. 시작하려면 바이러스 재고를 희석합니다. 그런 다음 만료된 인간 혈액을 과당, 여과된 소 혈청 및 바이러스 스톡과 혼합합니다.

TCID50을 통한 추가 분석을 위해 140마이크로리터의 혈액 가루 혼합물을 동결합니다. 다음으로, 플라스틱 유리병에 50마이크로리터 크기의 혈액 가루 혼합물 두 방울을 넣고 모기가 2시간 동안 먹이를 먹도록 합니다. 모기를 마취한 후, 완전히 충혈된 모기를 세고 과당에 적신 화장솜이 들어 있는 새 유리병으로 옮깁니다.

그런 다음 모기를 섭씨 27도, 습도 80%로 14일 또는 21일 동안 유지한다. 과당이 포화된 화장솜에 72시간마다 1.5ml의 과당을 보충하십시오. 먼저, 성장배지를 보충한 96웰 플레이트에 웰당 20, 000개의 Vero 세포를 파딩합니다.

타액 분비 장치를 준비하려면 사각 유리판을 30도 각도로 벤치에 놓습니다. 그런 다음 유리판 상단에 양면 테이프를 붙입니다. 다음으로 모델링 점토를 직경 0.5cm가 될 때까지 굴려 양면 테이프에서 1cm 떨어진 접시에 수평으로 부착합니다.

필요한 수의 10마이크로리터 필터 팁에서 팁을 잘라내고 각 팁을 10마이크로리터의 PBS로 채웁니다. 그런 다음 모델링 점토에 팁을 놓고 부드러운 압력으로 고정합니다. 다음으로, 모기의 다리와 날개를 제거하여 모기를 움직이지 못하게 합니다.

필터 팁 위의 테이프에 모기를 고정하십시오. 각 모기의 주둥이를 필터 팁에 부드럽게 놓습니다. 30분 후 필터 팁을 제거하고 점토와 테이프를 버립니다.

수집된 타액을 10마이크로리터의 PBS가 들어 있는 반응 튜브로 옮깁니다. 타액과 PBS를 부드럽게 혼합하고 혼합물을 96웰 플레이트의 웰로 옮깁니다. 접시를 섭씨 37도에서 5%의 이산화탄소로 7일 동안 배양합니다.

광학 현미경을 사용하여 세포에 세포요법 효과가 있는지 확인합니다. 웰이 세포요법 효과에 대해 양성이 되면 피펫을 사용하여 140마이크로리터의 상층액을 수확합니다. 그런 다음 상등액을 반응관으로 옮깁니다.

다음으로, 140마이크로리터의 상등액과 560마이크로리터의 AVL 완충액을 혼합하고 실온에서 10분 동안 배양합니다. 마지막으로 560마이크로리터의 에탄올을 넣고 샘플을 뒤집어 혼합합니다. 이 프로토콜을 사용하여 여러 모기 종을 대상으로 다양한 기후 조건에서 지카 바이러스 감염 및 전파를 테스트했습니다.

섭씨 27도의 배양 조건에서 모든 흰줄숲모기 종은 지카 바이러스 양성 타액을 나타냈다. 반대로, Culex 분류군의 타액 샘플에는 바이러스의 증거가 포함되어 있지 않았습니다. 이 기술을 숙달하면 제대로 수행하면 한 시간에 50마리의 모기에 대해 수행할 수 있습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 강제 타액 분비 실험을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 감염된 모기와 함께 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으므로 실험을 수행하는 동안 항상 BSA-3 조건에서 모기를 다루기 위한 특별한 안전 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.