Name: 아 급성 대뇌 Microhemorrhages 쥐에서 Lipopolysaccharide 주입에 의해 유도 된 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: 배우세요 LPS 주입을 이용하여 Sprague-Dawley 쥐에서 뇌 미세출혈을 유도하고 검출하는 방법을. 이 기술은 염증성 뇌 손상 메커니즘 연구와 다양한 신경질환 연구에 활용됩니다.

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우리는 교사 Jian Feng 레이 MRI 동안 가이드에 대 한 수도 의과대학에서 동료 감사합니다. 우리는 또한 선사 쩡 신경과 부, 기술 지원 제공에 대 한 창 두 번째 사람들의 병원에서에서 감사 합니다.

여기에 설명 된 모든 메서드는 동물 관리 및 사용 위원회 (ACUC) PLA 육군 종합 병원에 의해 승인 되었습니다.
1입니다. 자료
<ol><li>LPS 주입의 준비<ol>
<li>LPS 분말 1 mg/mL의 최종 농도에 S. typhimurium 에서 파생 된의 25 mg을 증류수 25 mL를 추가 합니다. 저장소 4 ° c.에 무 균 튜브에 주입 주의: LPS 독성이 있다.</li>
		<li>EB 주입 작업 농도에서 계속 정상적인 0.9% 소금물에 2 %EB 솔루션을 준비 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2입니다. 동물
<ol><li>10 주 세 남성 Sprague-Dawley (SD) 쥐에 LPS를 관리 (평균 무게: 280 ± 20 g) 복 주사. 주의: 쥐가 다른 조직에서 구입 하는 경우 다음 적응 단계 해서는 안됩니다 7 일 미만.</li>
</ol>3. LPS 주사
<ol><li>1 mg/kg의 복용량에 각 쥐에 intraperitoneally LPS를 주입 하 고 그들의 홈 케이지를 쥐를 반환 합니다. 참고: 마 취는 필요 하지 않습니다.</li>
	<li>6 시간 후에, LPS는 쥐로 주입의 동일한 복용량 주입.</li>
	<li>16 시간 후 쥐에 LPS의 동일한 복용량을 주사. 주의: 사망률 5%에서에서 발생할 수 있습니다 1 mg/kg의 복용량에 LPS와 SD 쥐를 주입. 사망 율 더 젊은 이상 쥐 또는 임신 여성 쥐에 증가할 수 있었다.</li>
	<li>LPS 주입 후 그들의 감 금 소에 쥐를 반환 하 고 음식과 음료에 대 한 광고 libitum 액세스 제공. 참고: 쥐 별개 조직의 염증 반응, 전시 하 고 따라서 그것은 감 금 소는 실험을 통해 깨끗 한 유지 필수적입니다. 쥐 해야 될 자주 (2 x 일) 모니터링 무게, 일반적인 모양 및 태도 대 한 첫 번째 LPS 주입 후. 쥐 돌출된 자세, 이동 하는 방식은, 상당한 체중 감소를 전시 하기 위하여 시작 하는 경우 (> 20%), 7 일 전에 EB 연구 끝점 안락사 포 르 피 린 착 이어서 편안 하.</li>
</ol>4. 샘플 컬렉션
<ol><li>EB 주입<ol>
<li>첫 번째 주사 후 7 일 anesthetize intraperitoneally 승인된 IACUC 프로토콜에 의해 쥐.</li>
		<li>쥐 각 막 반사 응답을 표시 하지 않습니다 때까지 1-2 분을 기다립니다. 5-8 밀리미터를 수행-각 쥐;에 깊은 심장 펑크 찌른 포인트 3, 4 늑 공간에 흉 골의 왼쪽된 여백 5 m m 이어야 한다.</li>
		<li>혈액 복구, 관찰 될 때까지 기다려야 하 고 주입 EB 0.2 mL/100 g 체중의 복용량에서 왼쪽된 심장 심 실. 주의: 심장 펑크와 EB 주입 수 신중 하 게 수행 한다. EB 흉 강 또는 왼쪽된 심장 심 실 대신 심장에 주입 될 수 있습니다.<ol>
<li>빈 관으로 다시 빨 아 하 고 실패율을 줄일 수 있도록 주입 전에 EB 튜브에이 볼륨을 바꿉니다 (예., 오류에 의해 흉 곽에 주입).</li>
		</ol>
</li>
		<li>10 분 동안 부정사 위치에 쥐를 유지. 참고: 샘플 면역 형광 이미징에서 EB 누설 감지를 사용 하지 않으면, 다음이 단계를 생략할 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>총 관찰<ol>
<li>심장 perfusions 대뇌 맥 관 구조와 두뇌를 차가운 1 M 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)를 사용 하 여 수행 합니다.<ol>
<li>메스를 사용 하 여 횡 경 막의 전체 길이 걸쳐 복 부 절 개를 확인 합니다.</li>
			<li>그냥 갈비를 통해 컷 왼쪽 흉 곽 중간.</li>
			<li>흉 강에 열어. 클램프를 사용 하 여 마음을 노출 하 고 혈액과 다른 체액의 배수 장치를 촉진 하기 위하여.</li>
			<li>직접 삽입이 연장에 약 5 mm. 좌 심 실의 돌출에 바늘 항목의 지점 근처 클램핑 하 여 그 위치에 바늘 보안 꾸준히 집게 (심장 해야 여전히 수 박동)와 마음 잡고. 주의: 하지 지나치게 확장지 않습니다 바늘, 실내 벽을 관통 하 고 타협 솔루션의 순환 수로.</li>
			<li>약 20 mL/min 살포 펌프를 사용 하 여에서 느리고 꾸준한 속도로 흐름 얼음 처럼 차가운 PBS 솔루션 (200-300 mL) 수 있도록 밸브를 해제. 동물 총 관측 대신 고정 필요, 얼음 처럼 차가운 0.9% 생리 식 염 수의 동일한 복용량을 사용 합니다.</li>
			<li>날카로운가 위를 사용 하 여, 아 트리 움, 솔루션 지속적으로 흐름 보장에 절 개를 확인 합니다. 만약 유체 흐름을 자유롭게 하지 않습니다 또는 동물의 코 또는 입에서 오고 있다, 바늘 위치를 변경할.</li>
		</ol>
</li>
		<li>총 관찰에 의해 CMHs에 대 한 화면입니다. 참고: 샘플 총 관찰에 의해 CMHs의 숫자를 계산에 사용 하지 않으면, 다음이 단계를 생략할 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>고정<ol>
<li>심장 perfusions 얼음 0.9% 생리 식 염 수 (200-300 mL) 대뇌 맥 관 구조를 취소 하 고 두뇌를 사용 하 여 수행 합니다.</li>
		<li>심장 perfusions 고정을 위한 얼음 4 %paraformaldehyde 사용 하 여 수행 합니다.</li>
		<li>목을 벨 쥐, 뇌를 분리 하 고 적어도 6 h에 대 한 20% 자당 해결책에 뇌를 담 궈.</li>
		<li>30% 자당 및 다른 6 h. 에 대 한 수정으로 솔루션을 변경
</li>
	</ol>
</li>
	<li>cryostat를 사용 하 여 10 m m 두께 뇌 조직 섹션을 준비 합니다.</li>
</ol>5. 그 얼룩
참고:이 절차는 그 얼룩 키트를 사용 하 여 수행 됩니다.
<ol><li>씻고 증류수에 슬라이드.</li>
	<li>수돗물에 5 분 동안 실행 되며 솔루션 8 분 세척 얼룩.</li>
	<li>1 분 동안 수돗물을 실행에 30 미 세척에 대 한 1% 산 알코올에 구분 합니다.</li>
	<li>0.2% 암모니아 물 (청소법)에 얼룩 또는 포화 리튬 탄산염 30 솔루션 1 분 씻어 수돗물에 5 분 동안 실행 s.</li>
	<li>린스에 95% 알코올 (10 딥).</li>
	<li>Counterstain 30 오신 솔루션 s 1 분.</li>
	<li>95% 알코올, 5 분에 대 한 절대 알코올의 2 개의 변화를 통해 탈수.</li>
	<li>30 대 한 자일 렌에 분명 s.</li>
	<li>Liu의 방법9를 사용 하 여 탑재 합니다.</li>
	<li>대물 형광 현미경을 사용 하 여 분석 합니다. 참고: 붉은 혈액 세포는 CMHs의 구성 요소, 혈관에서 발표 레드-오렌지 얼룩 그 아래에 나타납니다.</li>
</ol>6. 펄 프러시안 파란 얼룩
참고:이 절차는 Perls 얼룩 키트를 사용 하 여 수행 됩니다.
<ol><li>증류수와 슬라이드를 씻어.</li>
	<li>등분 혼합 ferrocyanide 및 10 분에 대 한 염 산의 반응 솔루션에 얼룩.</li>
	<li>탈수, 취소, 마운트, 그리고 5.7-5.10 단계에 설명 된 대로 슬라이드를 분석.</li>
</ol>7. EB 더블 얼룩
참고:이 절차는 단계 4.1.3 다음과 같습니다.
<ol><li>5 분에 대 한 세 번 PBS와 슬라이드를 씻어.</li>
	<li>4', 실 온에서 15 분 동안 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 솔루션으로 슬라이드를 품 어.</li>
	<li>각, 5 분에 대 한 세 번 PBS 솔루션 슬라이드를 세척 하 고 PBS 글리세롤 솔루션 슬라이드 마운트.</li>
	<li>형광 현미경에서 이미지를 분석 합니다. EB 증 착 빨간 형광;로 표시 핵은 블루 형광으로 표시 됩니다.</li>
</ol>8입니다. MRI-SWI
<ol><li>적극적으로 차폐 된 그라데이션 시스템 (내경 16 cm) 7 T 자석에 MRI를 수행 합니다.</li>
	<li>치료 후, 7 일 1.5-2.0% isoflurane isoflurane 마 취 시스템을 사용 하 여의 안 면 흡입 하 여 쥐를 anesthetize.</li>
	<li>수 의사 연 고 마 취에서 건조를 방지 하기 위해 쥐의 눈에 적용 됩니다.</li>
	<li>경향이 위치에 쥐를 유지 하 고 MRI SWI 스캔을 수행.</li>
	<li>SWI가 중 검사 다음 매개 변수를 사용 하 여 빠른 회전 급강하 에코 시퀀스를 사용 하 여 얻을: 에코 시간 (TE) 8 ms, 반복 시간 (TR) 40 ms, 대칭 이동 각도 = 12 °, 시야 (FOV) 35 m m × 35, 인수 매트릭스 384 × 384, 1 m m 두께 슬라이스를 얻으려고.</li>
	<li>그린 버그 외 에 따라 MRI SWI에 CMHs를 식별 11, 다음 조건을 포함 하는: (1) ≤ 10 mm, 그리고 (2) 원형, 고립 된, 그리고 낮은 신호 강도 반점의 직경.</li>
	<li>실험의 끝에, 과다 복용 (6 L/min의 흐름) 또는 컨테이너 볼륨의 30%에서 이산화탄소 방법을 사용 하 여 쥐를 안락사.</li>
</ol>

<ol><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+inflammation-induced+cerebral+microbleeds%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">A murine model of inflammation-induced cerebral microbleeds.</a> J Neuroinflammation. 13 (1), 218(2016).</li>
<li>Vernooij, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+risk+factors+of+cerebral+microbleeds+the+Rotterdam+Scan+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Prevalence and risk factors of cerebral microbleeds the Rotterdam Scan Study.</a> Neurology. 70 (14), 1208-1214 (2009).</li>
<li>Pettersen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbleed+topography%2C+leukoaraiosis%2C+and+cognition+in+probable+Alzheimer+disease+from+the+Sunnybrook+dementia+study%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Microbleed topography, leukoaraiosis, and cognition in probable Alzheimer disease from the Sunnybrook dementia study.</a> Archives of Neurology. 65 (6), 790-795 (2008).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microbleeds+and+neuropsychiatric+symptoms+in+an+elderly+Asian+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%2C+Neurosurgery%2C+and+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Cerebral microbleeds and neuropsychiatric symptoms in an elderly Asian cohort.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 88 (1), 7-11 (2017).</li>
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<li>Scott, L. L., Downing, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+neonatal+exposure+to+BMAA+in+a+rat+model+produces+neuropathology+consistent+with+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins%22%5BJournal%5D)">A single neonatal exposure to BMAA in a rat model produces neuropathology consistent with neurodegenerative diseases.</a> Toxins. 10 (1), E22(2018).</li>
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<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+H%26E+and+Prussian+blue+staining+in+a+mouse+model+of+cerebral+microbleeds%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+%26+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of H&E and Prussian blue staining in a mouse model of cerebral microbleeds.</a> Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 62 (11), 767-773 (2014).</li>
<li>Zeng, J., Zhào, H., Liu, Z., Zhang, W., Huang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide+induces+subacute+cerebral+microhemorrhages+with+involvement+of+Nitric+Oxide+Synthase+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide induces subacute cerebral microhemorrhages with involvement of Nitric Oxide Synthase in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 27 (7), 1905-1913 (2018).</li>
<li>Greenberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microbleeds%3A+A+guide+to+detection+and+interpretation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerebral microbleeds: A guide to detection and interpretation.</a> Lancet Neurology. 8 (2), 165-174 (2009).</li>
<li>Hoffmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Field+MRI+reveals+a+drastic+increase+of+hypoxia-induced+microhemorrhages+upon+tissue+reoxygenation+in+the+mouse+brain+with+strong+predominance+in+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">High-Field MRI reveals a drastic increase of hypoxia-induced microhemorrhages upon tissue reoxygenation in the mouse brain with strong predominance in the olfactory bulb.</a> Plos One. 11 (2), e0148441(2016).</li>
<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+phosphodiesterase+3A+modulation+on+murine+cerebral+microhemorrhages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Effects of phosphodiesterase 3A modulation on murine cerebral microhemorrhages.</a> Journal of Neuroinflammation. 14 (1), 114(2017).</li>
<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+exacerbates+development+of+cerebral+microbleeds+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Aging exacerbates development of cerebral microbleeds in a mouse model.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 69(2018).</li>
<li>Mello, B. S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+influences+in+behavior+and+brain+inflammatory+and+oxidative+alterations+in+mice+submitted+to+lipopolysaccharide-induced+inflammatory+model+of+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Sex influences in behavior and brain inflammatory and oxidative alterations in mice submitted to lipopolysaccharide-induced inflammatory model of depression.</a> Journal of Neuroimmunol. 320, 133-142 (2018).</li>
<li>Souza, D. F. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+astroglial+markers+in+a+maternal+immune+activation+model+of+schizophrenia+in+Wistar+rats+are+dependent+on+sex%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Changes in astroglial markers in a maternal immune activation model of schizophrenia in Wistar rats are dependent on sex.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (489), (2015).</li>
<li>Dutta, G., Zhang, P., Liu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Lipopolysaccharide+Parkinson%27s+disease+animal+model%3A+mechanistic+studies+and+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Fundamental+%26+Clinical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The Lipopolysaccharide Parkinson's disease animal model: mechanistic studies and drug discovery.</a> Fundamental & Clinical Pharmacology. 22 (5), 453-464 (2008).</li>
<li>El-Sayed, N. S., Bayan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possible+role+of+resveratrol+targeting+estradiol+and+neprilysin+pathways+in+lipopolysaccharide+model+of+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Possible role of resveratrol targeting estradiol and neprilysin pathways in lipopolysaccharide model of Alzheimer disease.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 822 (822), 107-118 (2015).</li>
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<li>Schreiber, S., Bueche, C. Z., Garz, C., Baun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+brain+barrier+breakdown+as+the+starting+point+of+cerebral+small+vessel+disease%3F+-+New+insights+from+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+%26+Translational+Stroke+Medicine%22%5BJournal%5D)">Blood brain barrier breakdown as the starting point of cerebral small vessel disease? - New insights from a rat model.</a> Experimental & Translational Stroke Medicine. 5 (1), 4(2013).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

CMHs에 대 한 조사 연구는 지난 몇 년 동안에서 증가 하고있다. 그러나, CMHs의 메커니즘 불분명, 과학자 들이 특정 조건을 시뮬레이션 하는 동물 모델을 확립 하 라는 남아 있습니다. 예를 들어 호프만 외. 개발 hypoxia 유발 CMHs 마우스 모델 CMHs 저 산소 증 및 뇌혈관 autoregulation12의 중단에 의해 발생 보여줍니다. 로이터 외. 5 보여준 그 대뇌 아 밀 로이드 angiopathy CMHs 피셔 외. 의 병 인에 중요 한 역할 보고 LPS 주입9에 의해 유도 되었다 CMHs 마우스 모델 (CAA) 놀이, APP23 유전자 변형 쥐에 CMHs 모델을 설립 하 CMHs는 염증2,,13<sup clas...

클래식 대뇌 microhemorrhages (CMHs) 뇌1적혈구에서 작은 혈관 주위 예금 hemosiderin 같은 혈액 저하 제품의를 참조 하십시오. 로테르 담 스캔 연구, CMHs 60-69 년 세의 거의 17.8%와 80 년2에 그들에 38.3%에 찾아낼 수 있었다. 노인에서 CMHs의 보급은 상대적으로 높은, 그리고 CMHs의 축적과 인지 및 정신병 장애 사이의 상관 관계 설립된3,4되었습니다. 여러 동물 모델 CMHs의 최근 보고 된, 유형 IV 콜라 stereotaxic 주입5, APP 유전자 변형6, β-N-methylamino-L-알라닌 노출7, 및8, 고혈압 유발 설치류 모델을 포함 한 와 함께 가장 잘 허용된 선택의 하나로 서 조직의 염증에 의해 유도 된 CMHs. 피셔 외. 9 처음 급성 CMHs 마우스 모델을 개발 살 모 넬 라 typhimurium 에서 파생 된 LPS를 사용. 그 후, 같은 그룹 같은 방법을2를 사용 하 여 하위 급성 CMHs 마우스 모델의 개발을 보도 했다.
LPS는 복 주입을 통해 표준화 된 염증 성 자극으로 간주 됩니다. 이전 연구는 많은 양의 microglia 반영 LPS 주입 neuroinflammation 일으킬 수 및 동물에 사이토 활성화 모델2,10확인 했습니다. 또한, neuroinflammation 활성화의 활성화 및 CMHs의 수 사이 긍정적인 상관 관계가 설립된2,10되었습니다. 이러한 이전 연구를 바탕으로, 우리 있었다 하 라는 메시지가 CMHs 쥐 모델 개발 LPS의 복 주사.
검색 기술 CMHs에 대 한 연구 조사에의 증가 귀착되 었 이동 합니다. 가장 널리 인정 hematoxylin와 얼룩, 프러시안 블루9, 착 색 제 2 철 철 감지 (그는) 오신 붉은 혈액 세포의 탐지를 포함 하는 검색 하는 CMHs 에반스의 블루 면역 형광에 의해 증 착 (EB) 이미징, 그리고 7.0 테슬라 자기 공명 영상-민감성 가중치 이미징 (MRI-SWI)10. 현재 연구의 CMHs에 대 한 심사 방법을 개발 하는 것을 목표로.

<table><tbody><tr><td>염증 유도를 위한</td> <td>LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-2630</td></tr><tr><td>EB 누출 감지를 위한</td><td>EB</td><td>Sigma-aldrich</td><td>E2129</td></tr><tr><td>DAPI 염색 용액</td><td>Servicbio</td><td>G1012</td><td>카운트 매체 IF</td></tr><tr><td>Perl' s 프로이센 염색</td><td>Solarbio</td><td>G1424</td><td>프로이센 염색</td></tr><tr><td>용 키트 HE 염색</td><td>Solarbio</td><td>G1120</td><td>키트 HE 염색</td></tr><tr><td>클로랄 수화물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47335U</td><td>마취</td></tr><tr><td>인산염 완충액 식염수 (PBS)</td> 용 <td>Solarbio</td><td>P1022</td><td>실험에서 일반적으로 사용되는 완충 용액의 일종</td></tr><tr><td>0.9 % 식염수</td><td>Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., 중국</td><td></td><td>관류</td></tr><tr><td>용액 파라포름알데히드</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td>고정에 일반적으로 사용되는 용액의 일종</td></tr><tr><td>Solarbio</td><td></td><td>G2461</td><td>고정에 일반적으로 사용되는 용액</td></tr><tr><td>30% 자당 용액</td><td>Solarbio</td><td>G2460</td>은 <td>고정</td></tr><tr>에 일반적으로 사용되는 용액의 일종<td>수의사 연고</td><td>Solcoseryl 눈 젤, Bacel, 쥐</td><td>의 눈 보호를 위한</td> 스위스 <td></td></tr></tbody></table>

아 급성 대뇌 microhemorrhages 쥐에서 lipopolysaccharide 주입에 의해 유도 된

Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats

대뇌 microhemorrhages (CMHs) 노인된 환자에서 일반적 이며 다양 한 정신병 무질서에 상관. CMHs의 병 인은 복잡 한, 그리고 neuroinflammation 동시 발생으로 자주 관찰 됩니다. 여기, 우리가 설명 하위 급성 lipopolysaccharide (LPS) 주입, 조직 CMHs. LPS 주입을 탐지 하기 위한 방법에 의해 유도 된 CMHs 쥐 모델은 상대적으로 경제적, 간단 하 고 비용 효율적인. LPS 주입의 주요 장점 중 하나는 염증을 유발 하는 안정성입니다. CMHs LPS 주입으로 인 한 총 관찰, 되며 (그) 오신 얼룩, Perl의 프러시안 얼룩, 에반스 블루 (EB) 더블 라벨 및 자기 공명 영상-민감성 가중치 이미징 (MRI-SWI) 기술 검출 될 수 있었다. 마지막으로, 그들의 이점 및 단점를 포함 하 여 CMHs 동물 모델 개발의 다른 방법 또한이 보고서에 설명 되어 있습니다.

CMHs는 다양 한 방법을 사용 하 여 검색할 수 있습니다. 가장 잘 받아들여 메서드는 다음과 같습니다: (1) 총 관찰 및 평가의 표면 CMHs ( 그림 1, 위쪽 패널에에서 표시 된); (2) 그는 적혈구 ( 그림 2A에 표시 된, 상단 패널) 또는 프러시안 얼룩 검출 제 2 철 철의 검출에 대 한 얼룩 적혈구 (그림 2A, 하단 패널);의 세포에서 파생 된 (3) EB BBB 누설 (그림 3, 왼쪽 패널);에서 파생 된 EB 증 착의 검출에 대 한 얼룩을 두 배로 (4) MRI-SWI CMHs hypointense 신호 (그림 4, 왼쪽된 패널)의 탐지.
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선물이 유도 하 고 탐지 LPS 주입 수 있습니다 Sprague-Dawley 쥐에 의해 발생 하는 CMHs CMHs의 병 인에 대 한 연구 조사 미래에 활용 하는 프로토콜.

아 급성 대뇌 Microhemorrhages 쥐에서 Lipopolysaccharide 주입에 의해 유도 된

Cerebral microhemorrhages (CMHs) are common in aged patients and are correlated to various neuropsychiatric disorders. The etiology of CMHs is complex, ...

이 방법은 뇌미세출혈 등의 뇌성 미세 출혈 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 LPS 주사가 안정적으로 염증을 유발한다는 것입니다. 또한 LPS 주입은 매우 간단하고 경제적이며 비용 효율적입니다.이 방법은 뇌 출혈 유도에 대한 통찰력을 제공 할 수 있지만 우울증, 정신 분열증, 파킨슨 병, 알츠하이머 병 및 프리온 질병과 같은 다른 뇌 질환에도 적용 될 수 있습니다. 10 주 된 남성 Sprague Dawley 쥐 에 체중의 킬로그램 당 1 밀리 그램의 복용량에 LPS를 관리 하 여 복막 주사에 의해 쥐를 반환 하 고 홈 케이지에 각 쥐를 반환. 6시간 16시간 후에 LPS 주사를 반복합니다.킬로그램 당 1 밀리 그램의 복용량에 LPS와 SD 쥐를 주입 하는 것은 발생할 수 있습니다 유의 하시기 바랍니다 5% 사망률. 사망률은 더 젊거나 오래된 쥐 또는 임신한 여성 쥐에서 더 증가할 수 있었습니다. LPS 주사 후 쥐를 케이지로 돌려보내 음식과 음료에 대한 광고 리비도 액세스를 제공합니다.말기 마취하에 각 쥐에 5~8밀리미터 깊이의 심장 천자를 수행합니다. 천지 점은 세 번째와 네 번째 늑간 공간에서 흉골의 왼쪽 여백에 5 밀리미터여야합니다. 바늘을 제자리에 잡고 빈 튜브를 에반스 블루가 들어있는 튜브로 교체하십시오.혈액 회복이 관찰 될 때까지 기다린 다음 왼쪽 심장 심실에 체중 100 그램 당 0.2 밀리리터의 복용량에서 에반스 블루를 주입하십시오. 면역 형광 영상에 의해 혈액 / 뇌 장벽을 통해 에반스 블루 누출을 평가하는 경우 10 분 동안 쥐를 supine 위치에 보관하십시오. 뇌 혈관과 뇌를 지우기 위해 0.9% 식염수용의 얼음 감기 200~300밀리리터를 사용하여 심장 관류를 수행합니다.고정을 위해 얼음 차가운 4 % 파라 포름 알데히드로 전환합니다. 그런 다음 뇌를 고립 한 후 PBS에서 적어도 6 시간 동안 또는 뇌가 튜브 바닥으로 가라 앉을 때까지 20 % 자당에 담가십시오. 솔루션을 30% 자당으로 변경하고 6시간 동안 수정합니다.마지막으로, 냉동고를 사용하여 10 mm 두께의 뇌 조직 섹션을 준비하십시오. 각각 5분 동안 PBS로 슬라이드를 세 번 세척한 다음, 실온에서 15분 동안 4, 6'diamidino-2-phenylindole 또는 DAPI 용액으로 슬라이드를 배양합니다. 이전과 같이 PBS에서 슬라이드를 세척 한 후 PBS-글리세롤 용액으로 슬라이드를 장착하십시오.형광 현미경에 이미지를 캡처합니다. EB 증착은 적색 형광으로 표시되며, 핵은 청색 형광으로 표시된다. 증류수에 슬라이드를 세척하여 H&E 염색을 시작합니다.그런 다음 헤마톡시린 용액에 8분 간 담가 두는 것입니다. 또는, 펄 프로이센 블루 염색의 경우, 10 분 동안 페로시아니드와 염산의 동등한 부분 혼합물로 반응 용액에 얼룩. 염색 후, 5 분 동안 흐르는 수돗물로 씻어.30초 동안 1%의 산성 알코올을 분화합니다. 1분 동안 흐르는 수돗물로 세척한 후, 0.2% 암모니아 수또는 포화 리튬 탄산용용액을 30초에서 1분 동안 더럽히고 있습니다. 다음으로, 흐르는 수돗물로 5분간 씻으시면 됩니다.에오신 용액을 30초에서 1분 동안 사용하여 역얼룩을 처리합니다. 90%의 알코올, 95%의 알코올, 절대 알코올을 각각 0.5~2분 동안 탈수합니다. 탈수 후 30초 동안 자일렌으로 치우치게 됩니다.장착 후 밝은 필드 형광 현미경을 사용하여 H&E 염색을 분석합니다. CMHs의 성분인 혈관에서 방출되는 적혈구는 H&E 염색 하에 적색 주황색으로 나타납니다. 표면 CMHs는 빨간색 화살표에 의해 표시된 대로 총 관찰에 의해 검출될 수 있습니다.에반스 블루 스테인링은 에반스 블루 분자가 부상당한 혈액-뇌 장벽에서 유출된 눈에 보이는 붉은 형광을 보여줍니다. H&E 염색은 모세혈관 외부에서 발견되는 적혈구를 보여주고, 프로이센 염색은 적혈구의 용해에서 유래한 페리 이온 점을 드러낸다. 이 절차를 시도하는 동안, 대뇌 미세 출혈을 유도하는 LPS의 복용량이 파킨슨 병 이나 정신 분열증 모델에서 사용되는 것보다 더 크다는 것을 기억하는 것이 중요합니다.따라서, 동물의 환경은 사망률을 줄이기 위해 깨끗하게 유지되어야한다. 이 절차에 이어, 전자 현미경 검사법, 자기 공명 화상 진찰 및 면역 형광 화상 진찰과 같은 그밖 방법은 뇌 미세 출혈에 있는 혈액-뇌 장벽의 외부 구조물에 손상을 결정하기 위하여 수행될 수 있었습니다, 생체내 뇌 parenchyma에 있는 뇌성 미세 출혈의 분포, 뿐만 아니라 신경교 세포 활성화.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

Aneurysmal subarachnoid 출혈 (SAH)은 때 동맥 파열 subarachnoid 공간에 발생합니다 출혈이 있습니다. subarachnoid의 출혈이 몇 년 전 예전처럼 될 수 계속 한 후이 행사의 병적 상태와 사망률이 개선 치료 방법으로 인해 감소, vasospasm의 위험에 왔지만. 뇌성 vasospasm의 시작 이벤트를 식별하기 위해 포괄적이고 재현 동물 모델을 확립의 중요성은 배리의 1979 년 실험 vasospasm 모델 쥐의 첫 번째 사용하기 때문에 연구의...

실험 Subarachnoid의 출혈 후 뇌 지연 Vasospasm을 평가하기 위해 낮은 사망 쥐 모델

intracerebral 출혈 (ICH)의 임상 관련 동물 모델은 출혈성 뇌졸중에 대한 지식을 확장하고 새로운 치료 전략을 검토 필요합니다. 본 연구에서는, 우리는 설명과 쥐의 기저 신경절 (코퍼스 striatum)에 autologous 전체 혈액이나 세균 collagenase 하나의 일방적 주사를 구현하는 두 ICH 모델을 평가합니다.

마우스의 모델링 Intracerebral 출혈 : Autologous 혈액이나 세균 Collagenase의 주입

이 비디오는 리포다당류(LPS)를 사용하여 쥐 모델에서 혈액뇌장벽(BBB) 파괴 및 뇌 미세출혈을 유도하는 과정을 보여줍니다. 이는 BBB 투과성 증가와 그에 따른 뇌 조직 손상으로 이어지는 면역 반응의 순서를 강조합니다.

지방다당류를 이용한 쥐 모델에서 대뇌 미세출혈 유도

이 비디오는 쥐 모델에서 뇌 미세출혈(CMH)을 감지하는 분석을 보여줍니다. CMH는 누출된 적혈구(RBC)로 식별되는 혈액-뇌 장벽 파괴로 인한 뇌출혈입니다. 쥐 모델에서 고정된 뇌 조직은 적혈구에 대한 헤마톡실린-에오신(hematoxylin-eosin)으로 동결 보호되고 절편화되고 염색되어 CMH의 현미경 시각화가 가능합니다. 누출된 적혈구는 현미경에서 빨간색-주황색으로 나타납니다.

쥐 모델에서 뇌 미세출혈 감지

뇌내출혈의 전임상 모델은 임상 질환의 특정 측면을 모방하는 데 사용됩니다. 따라서 부상의 메커니즘과 잠재적인 치료 전략을 탐구할 수 있습니다. 이 프로토콜에서는 뇌내 출혈의 두 가지 모델, 자가 혈액의 선조체내(기저핵) 주사 또는 콜라겐분해효소에 대해 설명합니다.

뇌출혈의 쥐과 모델로자가 혈액이나 클로스 트리 디움 콜라게나 제의 줄무늬 체 주입

Encephalopathy of prematurity는 조산으로 인한 손상과 관련된 중추 신경계 이상을 포함합니다. 이 보고서는 융모막염을 모방한 자궁 내 일시적인 전신 저산소증-허혈 및 양수 내 지질다당류 투여(LPS)에 대한 임상적으로 관련된 쥐 모델, 그리고 감염 자극 및 태반 관류 부족이 CNS 발달에 미치는 관련 영향을 설명합니다.

미숙아의 모델링 뇌증은 흰쥐의 내부 - 양수 리포 폴리 사카 라이드와 태아 저산소증 - 허혈을 사용하여

여기에 제시 된 프로토콜은 성인 남성 다크 아구티 쥐에서 두 피질 반구의 광범위한 회색 물질 탈모의 재현을 허용합니다. 상기 방법은 카테터의 인트레이스레브레인 이식, 골엘린 올리고드로시테 당단백질에 대한 임상 접종, 이식된 카테터를 통한 프로염증성 사이토카인 혼합물의 인트레이스레브렐 주입을 포함한다.

프로 염증 성 사이토카인의 인트레이스렐 주입에 의해 유도된 광범위한 대뇌 피질 탈량의 쥐 모델

우리는 자가 혈액의 이중 주입을 통해 쥐에 거대한 pontine 출혈 모델을 설정하는 프로토콜을 제시한다.

자동 혈액의 이중 주입에 의한 대규모 폰틴 출혈

지주막하 출혈은 계속해서 사람의 사망률과 이환율에 대한 높은 부담을 안고 있습니다. 상태와 병태생리학에 대한 추가 연구를 용이하게 하기 위해 pre-chiasmatic, 단일 주입 모델이 제시됩니다.

쥐 모델에서 실험적 지주막하 출혈을 유도하기 위한 자가 혈액의 Pre-chiasmatic, 단일 주사

신생아 쥐에서 출혈후 미숙수두증(PHHP)을 융모양막염과 뇌실내 출혈을 결합하여 모델링할 수 있습니다. 이러한 산전 및 산후 사건의 조합은 대두증, 심실 비대증 및 두개내압 상승을 포함한 PHP의 임상적 특징을 수명 전반에 걸쳐 정확하게 요약합니다.

Modeling Posthemorrhagic Hydrocephalus of Prematurity in Rats

본 연구에서는 기본 후두경을 사용하여 쥐에서 ALI를 발달시키는 비침습적 기기관내 삽입 기법이 입증되어 LPS가 폐에 정밀히 전달되도록 합니다. LPS는 후두경을 이용한 기관내관 을 통해 주입됩니다. 폐 손상의 규모는 여러 시점에서 평가됩니다.

설치류에서 급성 폐 손상을 유도하기 위한 비침습적 기관내 지포폴리당(Lipopolysaccharide) 투여

배우세요 LPS 주입을 이용하여 Sprague-Dawley 쥐에서 뇌 미세출혈을 유도하고 검출하는 방법을. 이 기술은 염증성 뇌 손상 메커니즘 연구와 다양한 신경질환 연구에 활용됩니다.

아 급성 대뇌 Microhemorrhages 쥐에서 Lipopolysaccharide 주입에 의해 유도 된

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