중고심 노드 발사 속도의 마이크로 전극 어레이 기록으로 마우스의 본질적인 심장 페이스메이킹 결함을 식별합니다.

본질적인 심박수를 측정하는 것은 심장 건강의 중요한 지표입니다. 이 기술은 시내심 노드에 대한 대부분의 혼동 영향을 제외하면서 이 속도를 정확하게 측정합니다. 내재된 심박수의 MEA 기록은 광범위한 전기 생리학 훈련 없이 단세포 기록과 유사한 정확한 발사 속도 데이터를 캡처합니다.

이 기술을 사용하는 개인은 초기 실험에서 건강한 조직 준비를 얻기 위해 고군분투 할 수 있으므로 실제 데이터 수집을 시작하기 전에 해부를 연습하고 버퍼 및 데이터 수집 설정을 최적화하십시오. 절차를 시연하는 것은 닥터 맨 시와 프라빈 쿠마르, 내 실험실에서 박사 후 연구원이 될 것입니다. 안락사 된 마우스의 피부를 hemostat로 잡고 외과 가위를 사용하여 왼쪽 코스트 아치에서 오른쪽 코스트 아치까지 흉곽의 바닥 아래에 있는 피부에 횡절개를 합니다.

외과 가위를 사용하여 회랑을 열고 과도한 출혈을 방지하기 위해 간을 닉핑하지 않고 다이어프램에서 간을 조심스럽게 분리하십시오. 흉부 구멍을 노출하기 위해 흉부를 따라 다이어프램을 절개합니다. 외과 가위를 사용하여 늑골 아치가장자리에서 클레이클까지 흉곽의 측면 벽을 잘라서 심장을 노출한 다음 23 게이지 주사기 바늘을 사용하여 어깨 위에 흉곽을 고정시하십시오.

이송 파이펫을 사용하여 따뜻한 헤파린화된 완전 Tyrode의 솔루션을 심장에 떨어뜨려 촉촉함을 유지합니다. 여분의 미세 Graefe 집게로 폐를 잡고 폐를 제거하기 위해 수술 가위로 기관을 끊습니다. 심장을 제거하기 위해, 여분의 미세 Graefe 집게와 마음의 정점을 잡고 수술 가위로 대오르타와 열등한 베나 카바를 잘라.

경화 실리콘 엘라스토머가 들어있는 페트리 접시에 하트를 옮기고 2~3밀리리터의 따뜻한 헤파린처리된 완전 티로데의 용액으로 심장을 목욕시키는 이송 파이펫을 사용하십시오. 해부 핀으로 하트 의 정점을 접시에 부착합니다. 듀몬트 2 라미네절 집게로 열등한 베나 카바를 잡습니다.

열등하고 우수한 베나 카바를 통해 22 게이지 주사기 바늘을 삽입하여 오른쪽 아트리움에서 위치를 파악하여 시노온 절제 노드의 대략적인 위치를 식별합니다. Dumont 2 라미네절제술 집게로 올바른 심방 부속물을 잡고 올바른 심방 부속기를 통해 해부 핀을 놓아 제자리에 고정하십시오. 왼쪽 심방 부속기에 대해 동일한 절차를 반복한 다음 베나 카베에 스며있는 주사기 바늘을 제거하십시오.

카스트로비에호 가위를 사용하여 심실을 가로질러 심장의 정점을 제거한 다음 따뜻한 백패린화 된 완전한 Tyrode의 용액을 추가하여 심장을 씻으셔도됩니다. 카스트로비에호 가위를 사용하여 동맥이 심실에서 분리될 때까지 대실 중격을 따라 자르고 절개를 심실에 더 가깝게 유지하십시오. 좌측 아트리움을 제거하기 위해 간 중격을 따라 자른다.

해부 핀을 오른쪽 아트리움 주변에 배치하여 평평하게 놓습니다. 카스트로비에호 가위를 사용하여 아트리움에서 남은 지방, 혈관 또는 조직을 제거하고 오른쪽 심방 노드를 찾습니다. 입력 솔루션 모델에 Tyrode의 솔루션을 추가하고 카보겐 가스의 흐름을 켜티로드의 솔루션을 산소화합니다.

연동 펌프를 25 RPM으로 설정하여 분당 2 밀리리터의 유량을 제공합니다. 펌프를 시작한 후 버퍼가 시스템에서 누출되지 않았는지 확인하고 온도 컨트롤러를 섭씨 37도로 설정합니다. Dumont 55 포셉을 사용하여 해부페트리 접시에서 미세 전자기 어레이 그리드로 해부된 조직을 전달합니다.

조직을 부드러운 페인트 브러시로 부드럽게 배치하여 전극 그리드의 시노심 노드 영역을 오버레이합니다. 그런 다음 뼈 집게 또는 곡선 된 집게를 사용하여 조직 위에 메쉬를 놓습니다. 뼈 집게를 사용하여 하프 앵커를 메시에 배치하여 모든 것을 제자리에 고정시합니다.

커넥터 플레이트에 미세 전하 배열 접시를 정렬합니다. 하프 슬라이스 앵커를 방해하지 않고 미세 전광구 어레이 접시에 관류 캡을 조심스럽게 놓고 테이프로 관류 간격을 고정하십시오. 앰프를 켜고 소프트웨어에서 레코딩에 대한 워크플로우를 설정합니다.

beat_recording 선택합니다. 모플로 템플릿. 그것을 열고 원하는 기록 조건에 따라 추적, 추적 기간, 추적 간격, 입력 전압, 샘플링 속도 및 기타 기록 매개 변수의 수를 설정합니다.

레코드 및 재생 버튼을 클릭하여 기록을 시작하고 추적 사이에 2분 간격으로 1분 동안의 10개의 추적에 대한 데이터를 수집합니다. 펌프를 일시 중지하고 펌프 유입 튜브를 일반 레코딩 솔루션에서 원하는 약물이 포함된 Tyrode의 솔루션으로 전환합니다. 펌프를 다시 시작하고 레코딩을 다시 시작합니다.

일단 약물 주입 Tyrode의 용액이 조직에 도달하면, 기록 10 기준선 기록에 대한 이전과 같은 방식으로 흔적. 마이크로 전극 배열에 조직의 위치의 최종 그림을 촬영합니다. 분석 소프트웨어의 비트 주파수 분석 템플릿에서 저장된 기록된 데이터 파일을 엽니다.

재생을 클릭하고 전체 기록이 데이터 시각화를 위해 실행된 다음 적절한 분석 매개 변수를 할당하도록 허용합니다. 분석에 포함될 채널을 선택하고 자동화된 파형 피크 식별을 위해 원하는 진폭 최대값 또는 진폭 미니마 임계값을 설정합니다. 재생 아이콘을 다시 클릭하여 데이터 집합을 다시 실행하고 분석 매개 변수가 스파이크 추출에 적합한지 확인합니다.

분석을 위해, 실험의 기준 기간 동안 대부분의 채널에 걸쳐 각 추적에 대해 안정적인 구타 율을 나타내는 세 가지 가장 안정적인 연속 트레이스와 약물 노출 기간 동안 또 다른 3 개의 연속 안정적인 흔적을 식별합니다. 재생 및 레코드 아이콘을 클릭하여 분석을 시작합니다. 이 데이터는 시노어심 노드 비트 주파수 측정을 위해 45일 된 남성 야생 형 블랙 스위스 마우스에서 수집되었습니다.

서로 다른 모양과 진폭을 가진 파형은 다른 채널에서 관찰되었고 모든 채널은 동일한 interspike 간격과 발사 주파수를 보였습니다. 그러나, 전극과의 조직 접촉 정도는 진폭과 같은 파형 특성에도 영향을 미칠 수 있다. 10개의 기록된 추적에서 안정적인 비트 주파수와 인터스파이크 간격을 가진 3개의 연속 채널이 추가 분석을 위해 선택되었습니다.

나쁜 추출 된 스파이크 패턴은 결석해야하지만, 존재하는 경우 소음이나 불안정에 의해 영향을받습니다. 개별 심장 박동에 대응하는 파형은 본질적인 심장 페이스 메이킹 활동을 반영합니다. 마이크로 전극 어레이 시스템은 약리학적 효과를 분석하기 위해 약물 제제를 쉽게 적용 할 수 있습니다.

64개 채널 모두에 걸쳐 선택된 3개의 트레이스의 본질적인 발사 속도는 샘플링 데이터에서 분당 약 320비트로 나타났다. 4-aminopyrimidine의 도입은 예상대로 인터스파이크 간격을 증가, 분당 320에서 210 비트에서 비트 주파수를 감소. 분석을 위해 신뢰할 수 있는 데이터를 수집하려면 추적이 안정적이고 표준 기준을 충족하는지 확인하여 기록 중에 조직이 건강하다는 것을 확인하는 것이 중요합니다.

MEA는 심장의 그밖 지구에 있는 심장 활동을 기록하기 위하여 이용될 수 있습니다, 유전과 약리학 조작의 효력을 공부하기 위하여 가능한 상세한 지역 특정 특성화를 허용하.