Name: 중고심 노드 발사 속도의 마이크로 전극 어레이 기록으로 마우스의 본질적인 심장 페이스메이킹 결함을 식별합니다. (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: 배우세요 마우스 중고심 노드의 미세전극 어레이 기록을 이용한 본질적 심장 페이스메이킹 측정법. 이 기술은 약리학적 효과 연구와 심장 건강 메커니즘 탐구에 활용됩니다.

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이 작품은 건강의 국가 학회에 의해 투자되었다, 보조금 번호 R01NS100954 및 R01NS099188.

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조직이 깨지기 쉽고 건강한 조직이 성공적인 기록을 위해 필요하기 때문에 SAN 해부 과정을 연습하고 마스터하는 것이 필수적입니다. SAN 해부 동안 올바른 방향은 조직의 적절한 영역을 얻기 위해 필수적입니다. 그러나, 심혼의 원래 방향은 이 노력을 복잡하게 하는 해부 과정에서 쉽게 분실될 수 있습니다. 따라서 적절한 좌우 방향을 보장하기 위해 아리아를 시각적으로 검사해야 합니다. 일반적으로 오른쪽 아트리움은 더 투명해지는 경향이 있는 반면 왼쪽 아트리움은 일반적으로 색상25,48에서더 어둡고 빨간색이 더 강합니다. 더욱이, 조직들이 쉽게 기계적으로손상되기때문에, 그것으로 작업하거나 전극 그리드에 장착하는 동안 SAN 조직을 스트레칭하거나 전극 그리드에 장착하지 않는 것이 필수적이다. 건강하고 제대로 해부 된 SAN 조직을 확인하는 팁은 조직이 구타하고 있는지 확인하기 위해 현미경의 ...

심장은 뇌에서 유래하는 것과 같은 심장 본질적인 및 외신 영향 모두에 의해 지배되는 복잡한 기관입니다. 시노아심 노드(SAN)는 포유류 심장 박동1,2의개시 및 영속에 대한 심장 박동세포(sinoatrial 세포, 또는 SA 세포라고도 함)를 수용하는 심장의 정의된 영역이다. 본질적인 심박수는 그밖 심장 또는 신경 유머 영향에 의해 영향 없이 심박동기 세포에 의해 구동되는 비율입니다, 그러나 심전도와 같은 인간과 살아있는 동물에 있는 심박수의 전통적인 측정은, 심장에 있는 심박동기 및 신경 영향 둘 다 반영합니다. SA 세포에 가장 주목할 만한 신경 영향은 신체의 생리적 요구 사항을 충족하기 위해 발사 패턴을 지속적으로 조절하는 자율 신경계에서3입니다. 이 아이디어를 지원, 모두 동정과 부교감 투영 SAN4근처에서 찾을 수 있습니다. 본질적인 심장 신경계(ICNS)는 특히 오른쪽 아리아에서 신경절플시가 SAN5,6의활동을 조절하는 또 다른 중요한 신경 영향이다.
기능 장애는 많은 심장 장애를 기초할 수 있고, 그밖 합병증의 리스크에 기여할 수 있기 때문에, 페이스 메이킹 적자를 이해하는 것은 임상적으로 중요합니다. 아픈 부비동 증후군 (SSS)은 적절한 페이스 메이킹7,8을방해하는 부상 절의 기능 장애를 특징으로하는 질병의 범주입니다. SSS는 부비동 서맥, 부비동 정지, 부비동 정지, 부비동 정지, 부비동 정지, 부도심 출구 블록, 번갈아 기다림 과 tachyarrhythmias9로 제시할 수 있고, 색전성 치기및 갑작스런 죽음의 증가한 리스크를 포함하여 합병증으로 이끌어 낼 수 있습니다8,10. 브루가다 증후군을 가진 사람들은, 급격한 심장 죽음의 증가한 리스크를 가진 심실 세동에 의해 표시된 심장 무질서, 또한 comorbid SAN 기능 장애11,12가있는 경우에 부정맥 사건에 대한 더 중대한리스크에있습니다. 시노온 임상 장애는 또한 심장 을 넘어 생리적인 결과가 있을 수 있습니다. 예를 들어, SSS는 대뇌저구혈(13)으로인해 환자에서 발작을 유발하는 것으로 관찰되었다.
시노어심 페이스 메이킹 적자를 식별하려면, 본질적인 심박수는 자율 신경계 또는 유머 요인의 영향 없이 SAN의 활동을 측정하여 결정되어야 합니다. 임상적으로, 이것은 약리학적 자율봉쇄(14)에의해 근사될 수 있다, 그러나 이 같은 기술은 또한 본질적인 심장 기능을 연구하기 위하여 포유류 모형에 적용될 수 있다(15,16). 이 접근법은 신경 영향 기여의 큰 부분을 차단하고 생체 내 심장 검사에서 허용하는 동안, 그것은 완전히 심장에 대한 모든 외외적 인 영향을 제거하지 않습니다. 동물 모델에서 본질적인 심장 기능을 연구하는 데 사용되는 또 다른 연구 기술은 일반적으로 전기그램, 속도 또는 상심 다중 전자 화물 배열17,18, 19,20을사용하여 측정을 포함하는 Langendorff-perfused 된 심혼을 사용하여 고립된 심장 기록이다. 이 기술은 신체에서 심장을 제거하는 것을 포함하기 때문에 심장 기능에 더 구체적이지만, 측정은 여전히 본질적인 심박수 측정21에영향을 미칠 수있는 메카노 전기 자동 조절 메커니즘에 의해 영향을받을 수 있습니다. 고립 된 심장 기록은 또한 여전히ICNS를통해 자율 조절에 의해 영향을받을 수있다5,6,22,23. 더욱이, 심장 기능 측정에 중요한 심장의 생리학적으로 관련된 온도를 유지하는 것은 고립된 심장 접근법20에서어려울 수 있다. SAN 기능을 연구하는 보다 직접적인 방법은 SAN 조직을 구체적으로 분리하고 활동을 측정하는 것입니다. 이는 SAN 스트립(절연 SAN 조직) 또는 고립된 SAN 맥박조정기세포(24,25)를 통해 달성될 수있다. SAN은 매우 작고 고도로 정의된 영역이므로 둘 다 높은 수준의 기술 적 교육이 필요하며, 세포 격리는 해리가 올바르게 수행되지 않으면 세포의 전반적인 상태를 손상시킬 수 있으므로 더 큰 도전을 제기합니다. 더욱이, 이러한 기술은 개별 기록 마이크로 전극을 사용하여 조직 또는 세포로부터 성공적으로 기록하기 위해 전문가 전기 생리학적 기술이 필요합니다.
이 프로토콜에서, 우리는 본질적인 심박수 측정을 얻기 위하여 마이크로 전극 배열 (MEA)를 사용하여 시험관 내SAN을 기록하는 기술을 기술합니다. 이 접근은 집중적인 전기 생리기술 세트가 결여된 연구원에 접근하기 위하여 높게 특정 한 전기 생리학 기록을 만드는 이점이 있습니다. MEA는 이전에 1 차 심근 세포배양26,27,28,29,30,31,32,심장 시트33,34,35,36,37,38,39및 조직 전체 탈산40에서심근세포 기능을 연구하는 데 사용되었습니다. 41,42, 43,44,45,46, 47. 이전 작업은 또한 SAN 조직41,42에서필드 잠재력을 검사하기 위하여 행해졌습니다. 여기에서는 MEA를 사용하여 뮤린 내성 SAN 발사 속도를 기록하고 분석하는 방법론을 제공합니다. 우리는 또한 이 기술이 4-aminopyridine (4-AP), 전압 게이트 K+ 채널 차단제의 효력을 보여주는 견본 실험을 제공함으로써 SAN 본질적인 발사 비율에 약리학 효력을 시험하기 위하여 어떻게 이용될 수 있는지 설명합니다. 정의된 해부학 적 랜드 마크를 사용하여, 우리는 정확하게 다른 방법에 필요한 광범위한 조직 해부 또는 세포 격리를 수행하지 않고 SAN을 기록 할 수 있습니다. MEA는 비용 금지 될 수 있지만, 기록은 임상 및 생리 연구 응용 프로그램의 광대 한 배열에 사용할 수있는 페이스 메이킹의 매우 구체적이고 신뢰할 수있는 측정을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>4-아미노피리딘</td><td>시그마</td><td>A78403-25G</td><td></td></tr><tr><td>22 게이지 주사기 바늘</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-5A</td><td>해부에 사용</td></tr><tr><td>23 게이지 주사기 바늘</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-6C</td><td>해부에 사용</td></tr><tr><td>60mm 페트리 접시</td><td>Genesee Scientific</td><td>32-105G</td><td></td></tr><tr><td>500mL 파이렉스 병</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-414-1C</td><td>용액 보관에 사용</td></tr><tr><td>1000 mL Pyrex Bottle</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-414-1D</td><td>용액 보관에 사용</td></tr><tr><td>뼈 집게</td><td>Fine Science Tools</td><td>16060-11</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘 이수화물 (CaCl2&middot; 2H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5080-500G</td><td></td></tr><tr><td>Carbogen(95% O2, 5% CO2)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo 가위, 4"</td><td>Fine Science Tools</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021-1KG</td><td></td></tr><tr><td>데이터 수집 PC</td><td></td><td></td><td>CPU: Intel Xeon 또는 Intel Core i7, 메모리: 8GB, HDD: 1TB, 그래픽 카드: NVIDIA 또는 On-board, 화면: 1920x1080</td></tr><tr><td>해부 현미경</td><td>Jenco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>해부 핀</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #2 Laminectomy Junps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11223-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #55 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; 엑스트라 파인 그레이프 펜치</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>11152-10</td><td></td></tr><tr><td>유리 챔버</td><td>그레인저</td><td>49WF30</td><td>마우스 안락사에 사용됨</td></tr><tr><td>하프 앵커 키트</td><td>워너 인스트루먼트</td><td>&nbsp; SHD-22CL / 15 WI 64-0247</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Fisher Chemicals</td><td>SA48-4</td><td>pH 밸런싱에 사용</td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>Fine Science Tools</td><td>13013-14</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Aurobindo Pharma Limited IDA, Pashamylaram</td><td>NDC 63739-953-25</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375-250G</td><td></td></tr><tr><td>도립 현미경</td><td>Motic</td><td>AE2000</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-893-1389</td><td></td></tr><tr><td>랩 테이프</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-950</td><td></td></tr><tr><td>해부 현미경 용 광</td><td>Dolan-Jenner</td><td>MI150DG 660000391014</td><td></td></tr><tr><td>염화 마그네슘 (MgCl2)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>208337-100G</td><td></td></tr><tr><td>MED64 헤드 앰프</td><td>MED64</td><td>MED-A64HE1S</td><td></td></tr><tr><td>MED64 메인 앰프</td><td>MED64</td><td>MED-A64MD1A</td><td></td></tr><tr><td>MED64 관류 캡</td><td>MED64</td><td>MED-KCAP01</td><td></td></tr><tr><td>MED64 관류 파이프 홀더 키트</td><td>MED64</td><td>MED-KPK02</td><td></td></tr><tr><td>MED64 ThermoConnector</td><td>MED64</td><td>MED-CP04</td><td></td></tr><tr><td>메시</td><td>&nbsp; 워너 인스트루먼트</td><td>640246</td><td></td></tr><tr><td>미세 전극 어레이 (MEA)</td> <td>알파 메드 사이언티픽</td><td>MED-R515A</td><td></td></tr><tr><td>Mobius 소프트웨어</td><td>WitWerx Inc.</td><td></td> pH 밸런싱에 사용되는 <td>MED64</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Fisher Chemicals</td><td>S320-500</td><td></td></tr> 용 특정 소프트웨어 <tr><td>Normal Saline</td><td>Ultigiene</td><td>NDC 50989-885-17</td><td></td></tr><tr><td>페인트 브러시</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1751733</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Genesee Scientific</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>연동 펌프</td><td>Gilson</td><td>F155009</td><td></td></tr><tr><td>연동 펌프 튜빙</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-171-298</td><td>1/8'' 내경</td></tr><tr><td>폴리에틸렌이민</td><td>시그마</td><td>P3143</td><td></td></tr><tr><td>염화칼륨(KCl)</td><td>시그마-알드리치</td><td>P9333-500G</td><td></td></tr><tr><td>인산칼륨 일염기성(KH2PO4)</td><td>시그마-알드리치</td><td>P5655-500G</td><td></td></tr><tr><td>나트륨 중탄산염</td><td>시그마</td><td>S6297</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨 (NaCl)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>S671-3</td><td></td></tr><tr><td>실그뤼드 엘라스토머 키트</td><td>다우 코닝</td><td>184 SIL ELAST KIT 0.5KG</td><td></td></tr><tr><td>인산나트륨 일염기</td><td>성 시그마</td><td>S6566</td><td></td></tr><tr><td>사붕산나트륨</td><td>시그마</td><td>S9640</td><td></td></tr><tr><td>수술용 가위</td><td>정밀 과학 도구</td><td>14074-09</td><td></td></tr><tr><td>트랜스퍼 피펫 (3mL 졸업)</td><td>Samco Scientific</td><td>225</td><td></td></tr></tbody></table>

중고심 노드 발사 속도의 마이크로 전극 어레이 기록으로 마우스의 본질적인 심장 페이스메이킹 결함을 식별합니다.

Microelectrode Array Recording of Sinoatrial Node Firing Rate to Identify Intrinsic Cardiac Pacemaking Defects in Mice

오른쪽 심방 노드 (SAN)는 심장의 심박 동기 세포를 포함하고 있으며이 지역의 기능 장애는 빈맥이나 서맥을 유발할 수 있습니다. 심장 페이스 메이킹 결함의 신뢰할 수 있는 식별은 속도 적자를 마스크 할 수있는 자율 신경계의 영향을 크게 방지하여 본질적인 심박수의 측정을 필요로한다. 본질적인 심장 맥박조정기 기능을 분석하는 전통적인 방법은 생체 내 심박수에서 측정하기 위하여 약물 유도한 자율 봉쇄, 본질적인 심박수를 측정하기 위하여 고립된 심혼 기록, 및 sinoatrial 심박동기 세포의 sinoatrial 스트립 또는 단세포 패치 클램프 기록을 포함합니다 자발적인 행동 잠재적인 발사 비율을 측정하기 위하여. 그러나 이러한 보다 전통적인 기술은 기술적으로 어렵고 수행하기 어려울 수 있습니다. 여기에서, 우리는 마우스에서 전체 마운트 시노어 노드 제제의 마이크로 전극 어레이 (MEA) 기록을 수행하여 본질적인 심장 발사 속도를 측정하는 새로운 방법론을 제시합니다. MEA는 체외 외 세포 필드 잠재력을 기록하기 위해 그리드와 같은 패턴으로 배열된 여러 미세 전극으로 구성됩니다. 본 원에 기재된 방법은 본질적인 심박수를 기록하기 위한 이전 접근법보다 상대적으로 빠르고 간단하며 더 정밀해지는 동시에 간편한 약리학적 심문을 가능하게 하는 결합된 이점이 있다.

조직이 15 분 동안 접시에 적응하도록 허용 한 후, 10 1 분 흔적이 기록됩니다. 현재 프로토콜은 한 시간 이상 활동을 기록하지만 여기에 표시되지 않은 게시되지 않은 데이터에서 ≥4 h에 대한 안정적인 발사 패턴을 기록했습니다. 실험 적 준비가 데이터 수집에 좋은 경우, 각 기록 채널은 주어진 채널(그림 11D)에대한 균일 한 모양의 일관되고 균등하게 간격 반복 파형 (즉, 스파이크)을 전시해야합니다. 이 파형은 본질적인 심장 페이스 메이킹 활동을 반영하는 개별 적인 심박동에 해당합니다. 인터스파이크 간격은 탈극화 개시 부위에 비해 위치의 작은 차이로 인해 채널 간에 완벽하게 정렬되지 않을 수 있더라도 모든 채널에 대해 동일해야한다(그림 8). 주어진 채널에 대한 파형의 모양은 일관성이 있어야하지만, 파형의 모양은 조직내 전극의 위치에 따라 채널마다달라집니다(도 8).</strong...

이 프로토콜은 마우스의 페이스메이킹 결함을 식별하기 위해 전체 시노어심 노드 조직의 미세 전극 어레이 기록을 사용하여 본질적인 심장 발사 속도를 측정하는 새로운 방법론을 설명하는 것을 목표로합니다. 약리학 에이전트는 또한 본질적인 페이스 메이킹에 그들의 효력을 공부하기 위하여 이 방법에 소개될 수 있습니다.

The sinoatrial node (SAN), located in the right atrium, contains the pacemaker cells of the heart, and dysfunction of this region can cause tachycardia or ...

본질적인 심박수를 측정하는 것은 심장 건강의 중요한 지표입니다. 이 기술은 시내심 노드에 대한 대부분의 혼동 영향을 제외하면서 이 속도를 정확하게 측정합니다. 내재된 심박수의 MEA 기록은 광범위한 전기 생리학 훈련 없이 단세포 기록과 유사한 정확한 발사 속도 데이터를 캡처합니다.이 기술을 사용하는 개인은 초기 실험에서 건강한 조직 준비를 얻기 위해 고군분투 할 수 있으므로 실제 데이터 수집을 시작하기 전에 해부를 연습하고 버퍼 및 데이터 수집 설정을 최적화하십시오. 절차를 시연하는 것은 닥터 맨 시와 프라빈 쿠마르, 내 실험실에서 박사 후 연구원이 될 것입니다. 안락사 된 마우스의 피부를 hemostat로 잡고 외과 가위를 사용하여 왼쪽 코스트 아치에서 오른쪽 코스트 아치까지 흉곽의 바닥 아래에 있는 피부에 횡절개를 합니다.외과 가위를 사용하여 회랑을 열고 과도한 출혈을 방지하기 위해 간을 닉핑하지 않고 다이어프램에서 간을 조심스럽게 분리하십시오. 흉부 구멍을 노출하기 위해 흉부를 따라 다이어프램을 절개합니다. 외과 가위를 사용하여 늑골 아치가장자리에서 클레이클까지 흉곽의 측면 벽을 잘라서 심장을 노출한 다음 23 게이지 주사기 바늘을 사용하여 어깨 위에 흉곽을 고정시하십시오.이송 파이펫을 사용하여 따뜻한 헤파린화된 완전 Tyrode의 솔루션을 심장에 떨어뜨려 촉촉함을 유지합니다. 여분의 미세 Graefe 집게로 폐를 잡고 폐를 제거하기 위해 수술 가위로 기관을 끊습니다. 심장을 제거하기 위해, 여분의 미세 Graefe 집게와 마음의 정점을 잡고 수술 가위로 대오르타와 열등한 베나 카바를 잘라.경화 실리콘 엘라스토머가 들어있는 페트리 접시에 하트를 옮기고 2~3밀리리터의 따뜻한 헤파린처리된 완전 티로데의 용액으로 심장을 목욕시키는 이송 파이펫을 사용하십시오. 해부 핀으로 하트 의 정점을 접시에 부착합니다. 듀몬트 2 라미네절 집게로 열등한 베나 카바를 잡습니다.열등하고 우수한 베나 카바를 통해 22 게이지 주사기 바늘을 삽입하여 오른쪽 아트리움에서 위치를 파악하여 시노온 절제 노드의 대략적인 위치를 식별합니다. Dumont 2 라미네절제술 집게로 올바른 심방 부속물을 잡고 올바른 심방 부속기를 통해 해부 핀을 놓아 제자리에 고정하십시오. 왼쪽 심방 부속기에 대해 동일한 절차를 반복한 다음 베나 카베에 스며있는 주사기 바늘을 제거하십시오.카스트로비에호 가위를 사용하여 심실을 가로질러 심장의 정점을 제거한 다음 따뜻한 백패린화 된 완전한 Tyrode의 용액을 추가하여 심장을 씻으셔도됩니다. 카스트로비에호 가위를 사용하여 동맥이 심실에서 분리될 때까지 대실 중격을 따라 자르고 절개를 심실에 더 가깝게 유지하십시오. 좌측 아트리움을 제거하기 위해 간 중격을 따라 자른다.해부 핀을 오른쪽 아트리움 주변에 배치하여 평평하게 놓습니다. 카스트로비에호 가위를 사용하여 아트리움에서 남은 지방, 혈관 또는 조직을 제거하고 오른쪽 심방 노드를 찾습니다. 입력 솔루션 모델에 Tyrode의 솔루션을 추가하고 카보겐 가스의 흐름을 켜티로드의 솔루션을 산소화합니다.연동 펌프를 25 RPM으로 설정하여 분당 2 밀리리터의 유량을 제공합니다. 펌프를 시작한 후 버퍼가 시스템에서 누출되지 않았는지 확인하고 온도 컨트롤러를 섭씨 37도로 설정합니다. Dumont 55 포셉을 사용하여 해부페트리 접시에서 미세 전자기 어레이 그리드로 해부된 조직을 전달합니다.조직을 부드러운 페인트 브러시로 부드럽게 배치하여 전극 그리드의 시노심 노드 영역을 오버레이합니다. 그런 다음 뼈 집게 또는 곡선 된 집게를 사용하여 조직 위에 메쉬를 놓습니다. 뼈 집게를 사용하여 하프 앵커를 메시에 배치하여 모든 것을 제자리에 고정시합니다.커넥터 플레이트에 미세 전하 배열 접시를 정렬합니다. 하프 슬라이스 앵커를 방해하지 않고 미세 전광구 어레이 접시에 관류 캡을 조심스럽게 놓고 테이프로 관류 간격을 고정하십시오. 앰프를 켜고 소프트웨어에서 레코딩에 대한 워크플로우를 설정합니다.beat_recording 선택합니다. 모플로 템플릿. 그것을 열고 원하는 기록 조건에 따라 추적, 추적 기간, 추적 간격, 입력 전압, 샘플링 속도 및 기타 기록 매개 변수의 수를 설정합니다.레코드 및 재생 버튼을 클릭하여 기록을 시작하고 추적 사이에 2분 간격으로 1분 동안의 10개의 추적에 대한 데이터를 수집합니다. 펌프를 일시 중지하고 펌프 유입 튜브를 일반 레코딩 솔루션에서 원하는 약물이 포함된 Tyrode의 솔루션으로 전환합니다. 펌프를 다시 시작하고 레코딩을 다시 시작합니다.일단 약물 주입 Tyrode의 용액이 조직에 도달하면, 기록 10 기준선 기록에 대한 이전과 같은 방식으로 흔적. 마이크로 전극 배열에 조직의 위치의 최종 그림을 촬영합니다. 분석 소프트웨어의 비트 주파수 분석 템플릿에서 저장된 기록된 데이터 파일을 엽니다.재생을 클릭하고 전체 기록이 데이터 시각화를 위해 실행된 다음 적절한 분석 매개 변수를 할당하도록 허용합니다. 분석에 포함될 채널을 선택하고 자동화된 파형 피크 식별을 위해 원하는 진폭 최대값 또는 진폭 미니마 임계값을 설정합니다. 재생 아이콘을 다시 클릭하여 데이터 집합을 다시 실행하고 분석 매개 변수가 스파이크 추출에 적합한지 확인합니다.분석을 위해, 실험의 기준 기간 동안 대부분의 채널에 걸쳐 각 추적에 대해 안정적인 구타 율을 나타내는 세 가지 가장 안정적인 연속 트레이스와 약물 노출 기간 동안 또 다른 3 개의 연속 안정적인 흔적을 식별합니다. 재생 및 레코드 아이콘을 클릭하여 분석을 시작합니다. 이 데이터는 시노어심 노드 비트 주파수 측정을 위해 45일 된 남성 야생 형 블랙 스위스 마우스에서 수집되었습니다.서로 다른 모양과 진폭을 가진 파형은 다른 채널에서 관찰되었고 모든 채널은 동일한 interspike 간격과 발사 주파수를 보였습니다. 그러나, 전극과의 조직 접촉 정도는 진폭과 같은 파형 특성에도 영향을 미칠 수 있다. 10개의 기록된 추적에서 안정적인 비트 주파수와 인터스파이크 간격을 가진 3개의 연속 채널이 추가 분석을 위해 선택되었습니다.나쁜 추출 된 스파이크 패턴은 결석해야하지만, 존재하는 경우 소음이나 불안정에 의해 영향을받습니다. 개별 심장 박동에 대응하는 파형은 본질적인 심장 페이스 메이킹 활동을 반영합니다. 마이크로 전극 어레이 시스템은 약리학적 효과를 분석하기 위해 약물 제제를 쉽게 적용 할 수 있습니다.64개 채널 모두에 걸쳐 선택된 3개의 트레이스의 본질적인 발사 속도는 샘플링 데이터에서 분당 약 320비트로 나타났다. 4-aminopyrimidine의 도입은 예상대로 인터스파이크 간격을 증가, 분당 320에서 210 비트에서 비트 주파수를 감소. 분석을 위해 신뢰할 수 있는 데이터를 수집하려면 추적이 안정적이고 표준 기준을 충족하는지 확인하여 기록 중에 조직이 건강하다는 것을 확인하는 것이 중요합니다.MEA는 심장의 그밖 지구에 있는 심장 활동을 기록하기 위하여 이용될 수 있습니다, 유전과 약리학 조작의 효력을 공부하기 위하여 가능한 상세한 지역 특정 특성화를 허용하.

microelectrode-array-recording-sinoatrial-node-firing-rate-to

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

프로그램된 전기 자극은 심장의 전도 특성을 결정하는 능력, 다양한 서성 거려 프로토콜을 사용하여 심장 arrhythmias를 유도하고 종료할 수있는 가능성을 제공합니다. transvenous 카테터를 사용하여 intracardiac의 electrogram 레코딩은 arrhythmogenic 기판을 확인하기 위해 프로그램된 전기 자극 프로토콜을 다음과 생쥐에서 구할 수 있습니다.

마우스에 프로그램된 전기 자극을

Telemetric ECG는 심장 arrhythmias과 갑작스런 심장 죽음에 대한 동물 모델을 평가 필수적인 도구로 떠오르고있다. 여기, 우리는 생쥐의 장기 외래 ECG 모니터링 응용 프로그램에 대한 telemetric ECG 녹음에 stepwise 가이드를 제시한다.

마우스의 외래 ECG 기록

이 비디오는 쥐의 심장에서 동방결절 또는 SAN을 분리하는 절차를 보여줍니다. SAN은 자발적인 활동 전위를 생성하여 심장 박동을 시작하는 동방 세포를 수용합니다.

마우스 모델에서 동방결절 분리: 쥐 심장에서 SA 결절을 채취하는 절차

방법은 패치 클램프 전기 생리학 또는 이미징 연구를위한 성인 마우스의 동방 노드 근육 세포 (SAM을)의 분리를 위해 증명된다. 분리 된 세포를 직접 사용할 수 또는 부호화 유전자 리포터로서 관심 단백질의 발현을 허용하는 배양에서 유지 될 수있다.

성인 마우스에서 동방 노드 근육 세포의 분리, 문화 및 기능 특성화하는 방법

여기에, 우리는 높은 공간 및 시간 해상도, 마우스 우심방 특히 중국 - 심방 노드에서 전기 활동의 광학 매핑을위한 프로토콜을 제시한다.

마우스 중국 - 심방 노드의 고해상도 광학 매핑

여기, 우리는 생쥐에서 생존 가능한 심실 슬라이스의 준비와 날카로운 전극 활동 전위 녹음에 대한 그들의 사용을 설명합니다. 이러한 다세포 제제는 생체 내 에서 생리 학적 및 약리학 적 연구 에 유용한 모델이되는 조직 구조와 같은 생체 내 보존성을 제공합니다.

전기 생리학 연구를위한 마우스 짧은 축 심실 조각

이 프로토콜 설명 electrophysiological murine atria는 높은 시간적, 공간적 해상도, 막 전압의 듀얼 녹음을 포함 한 광학 매핑 시스템을 활용 하 여 평가 하 고 캘리포니아2 + 에서 과도 프로그램 특수 전극 카 테 터를 통해 자극입니다.

고해상도 광학 매핑 Murine Atria electrophysiological 평가

여기, 선물이 intracardiac 자율 신경의 변조 및 기본 전기 생리학, arrhythmogenesis, 및 비보 전 Langendorff 설치를 사용 하 여 캠프 역학에 미치는 영향의 평가 대 한 프로토콜.

심장 전기 생리학 및 전 비보 Langendorff 시스템에서 Arrhythmogenesis Intracardiac 뉴런의 영향

우리는 기술적으로 쉽게, 저렴, 빠르고, 작은 마우스에서 저렴하고 저렴한 ECG 프로토콜을 제시하고, 향상된 감도로 수행 할 수 있습니다. 우리는 마우스에 있는 약리학 에이전트, 유전 수정 및 질병 모형을 공부하기 위한 검열 접근으로 이 방법을 건의합니다.

납 II를 사용하여 마취 마우스의 심전도 기록

여기에서는 기본 ECG 매개 변수 및 일반적인 부정맥에 대한 쥐의 장기 심전도 (ECG) 데이터를 분석하기위한 반자동 접근 방식에 대한 단계별 프로토콜을 제시합니다. 데이터는 살아 있는 마우스와 깨어 있는 마우스의 이식형 원격 측정 송신기로 얻고 Ponemah 및 해당 분석 모듈을 사용하여 분석합니다.

마우스의 부정맥을 감지하기 위한 장기 심전도 기록 분석

본 프로토콜은 마우스에서 심방 세동 감수성을 평가하기 위해 경식도 심방 페이싱을 사용할 때 실험 파라미터의 최적화를 설명합니다.

마우스의 심방 세동 감수성을 평가하기위한 경식도 심방 페이싱의 최적화

배우세요 마우스 중고심 노드의 미세전극 어레이 기록을 이용한 본질적 심장 페이스메이킹 측정법. 이 기술은 약리학적 효과 연구와 심장 건강 메커니즘 탐구에 활용됩니다.

중고심 노드 발사 속도의 마이크로 전극 어레이 기록으로 마우스의 본질적인 심장 페이스메이킹 결함을 식별합니다.

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