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DOI: 10.3791/62878-v
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This study explores the crucial role of co-translational interactions in nascent-chain modifications, targeting, folding, and assembly pathways using selective ribosome profiling. The model organism employed is the eukaryote Saccharomyces cerevisiae.
공동 번역 상호 작용은 초기 체인 수정, 타겟팅, 폴딩 및 조립 경로에서 중요한 역할을합니다. 여기에서, 우리는 선택적 리보솜 프로파일링, 생체 내에서, 모델 진핵생물 사카로마이세스 세레비시아에서 이러한 상호작용의 직접적인 분석을 위한 방법을 설명한다.
공동 번역 상호 작용은 접이식 및 조립 경로를 목표로하는 초기 체인 수정에 중요한 역할을합니다. 여기에서, 우리는 선택적 리보솜 프로파일링, 진핵생물 사카로마이세스 세레비시아 모델에서 이러한 상호작용의 생체내 직접 분석을 위한 방법을 설명한다. 선택적 리보솜 프로파일링은 생체 내에서 공동-번역 상호작용을 직접적인 방식으로 캡처하고 특성화하는 현재까지 유일한 방법이다.
선택적 리보솜 프로파일링은 모든 인자에 대한 글로벌 프로파일링을 가능하게 하고, 리보솜을 거의 코돈 분해능으로 번역하는 상호작용을 가능하게 합니다. 원하는 태그된 단백질을 함유하는 구축된 효모 세포를 수집함으로써 시작한다. 믹서 밀에서 극저온 분쇄를 사용하여 세포 용해를 30 헤르츠에서 두 분 동안 두 번 수행하십시오.
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