Name: 동적 인터페이스의 공초점 현미경 시각화를 위한 마이크로텐시오미터 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: 배우세요 공초점 현미경과 마이크로텐시오미터를 결합하여 곡면 유체-유체 계면의 구조-특성 관계를 실시간으로 분석하는 방법을. 폐 표면활성제 기능 저해 메커니즘 연구에 활용할 수 있습니다.

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모든 공초점 현미경 이미지는 니콘 A1RHD 멀티포톤 직립 공초점 현미경을 사용하여 수득하였다. 우리는 미네소타 대학의 대학 이미징 센터에서 지원 직원, 특히 기예르모 마르크스 (Guillermo Marques)의지도와 도움을 인정합니다. 이 작업은 NIH Grant HL51177에 의해 지원되었습니다. SI는 Ruth L. Kirschstein NRSA Institutional Research Training Grant F32 HL151128의 지원을 받았다.

저자는 공개 할 이해 상충이 없습니다.

결합 된 CPM / CFM은 계면 역학, 평형 및 형태를 검사하기위한 강력한 도구입니다. 이 프로토콜은 CPM/CFM으로 데이터를 얻는 데 필요한 단계를 설명합니다.
도 2는 표시된 모세관, 용매 및 열 교환을 위한 채널을 갖는 셀 설계를 도시한다. 용매 교환을위한 입구는 세포의 하단에 있어야하며 출구는 상단에 있어야하므로 교환 중에 셀이 오버플로되지 않도록해야합니다. 실제로, 입구 및 출구 유량은 동일한 연동 펌프에 대해 약간 다를 수 있다. 이 셀 설계의 한 가지 일반적인 문제점은 셀에서 누출되는 것입니다. 이것은 셀과 연결 중 하나 사이의 연결 불량으로 인해 가장 자주 발생하지만 모든 연결이 건조하고 누출되지 않으면 셀을 둘러싼 볼트의 과도한 조임으로 인해 셀의 유리 슬라이드에 균열이 생길 수 있습니다.
그림 3은 다양...

계면활성제 필름으로 덮인 공기-물 계면은 일상 생활에서 유비쿼터스입니다. 계면 활성제 - 물 주입은 고갈 된 들판에서 오일 회수를 향상시키는 데 사용되며 셰일 가스 및 오일의 유압 파쇄 용액으로 사용됩니다. 기액 거품 및 액체 - 액체 에멀젼은 윤활유 및 세정제로서 많은 산업 및 과학 공정에 공통적이며 식품에서 일반적입니다. 계면에서의 계면활성제 및 단백질은 포장, 저장 및 투여 동안 항체 입체 형태를 안정화 1,2,3,4,5, 눈에서의 눈물막 안정성 6,7,8, 및 폐 역학9,10,11,12,13,14, 15.
계면과 그 성질에 흡착하는 표면 활성제 또는 계면활성제에 대한 연구는 많은 다른 실험 기술로 오랜 역사를 가지고 있습니다 16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27 . 최근의 개발은 모세관 압력 마이크로 텐시오미터 (CPM)로, 다른 일반적인 방법 9,23,24,25보다 훨씬 적은 재료를 사용하면서 훨씬 작은 길이 스케일에서 고도로 곡선 된 인터페이스에서 계면 특성을 검사 할 수 있습니다. 공초점 형광 현미경 (CFM)은 CPM 22 또는 Langmuir 골짜기 20,26,27,28,29의 공기 - 물 계면에서 지질 및 단백질의 형태를 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 여기서 CPM과 CFM은 형태학적 현상을 동적 및 평형 계면 특성에 연결하여 생물학적 및 기술적 인터페이스에 대한 구조-기능 관계를 개발하기 위해 결합되었다.
CPM-CFM에 접근할 수 있는 계면 계면활성제 시스템에서 중요한 수많은 파라미터가 있다. CPM에서, 직경 30-200 μm의 기포가 유리 모세관 튜브의 팁에 고정된다. CPM의 이전 버전에서, 기포의 내부와 외부 사이의 모세관 압력 차이는 물 컬럼 및 진동 주사기 펌프 9,30을 통해 제어되었다; 여기에 설명 된 새 버전은 이들을 더 높은 정밀도의 컴퓨터 제어 마이크로 유체 펌프로 대체합니다. 표면 장력 (γ)은 펌프에 의해 설정된 계면을 가로 지르는 압력 강하, ΔP 및 기포의 곡률 반경, R의 광학 분석으로부터 라플라스 방정식 인 ΔP = 2γ / R을 통해 결정됩니다. 계면의 동적 표면 장력은 가용성 계면활성제를 함유하는 벌크 액체와 접촉하는 새로운 기포의 생성에 이어 10 ms 시간 분해능으로 결정될 수 있다. 계면활성제 흡착 역학은 확산도, 표면 커버리지, 벌크 농도와 평형 표면 장력 사이의 관계를 포함하는 계면활성제의 필수 특성을 결정하기 위해 고전적인 Ward-Tordai 방정식 10,31에 의해 설명될 수 있다. 일단 평형 표면 장력이 달성되면, 계면 영역은 진동화되어 팽창 탄성률을 측정하고, 표면 장력의 변화를 기록함으로써, 기포 표면적의 작은 변화에 의해 유도된, <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/64110/64110eq01.jpg" style="margin: auto;">A32일 수 있다. 얽힌 중합체 또는 단백질과 같은 그들 자신의 내부 구조를 개발하는 보다 복잡한 계면의 경우, 표면 장력은, 보다 일반적인 표면 응력(4,33<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/64110/64110eq02.jpg" style="margin: auto;">)으로 대체된다.
호흡 동안의 폐 안정성은 폐포 공기-액체 계면(9,10)에서 낮은 표면 장력 및 높은 팽창 모듈러스 둘 다를 유지하는 것에 직접적으로 연결될 수 있다. 모든 내부 폐 표면은 조직 수화를 유지하기 위해 상피 라이닝 유체의 연속적이고 미크론 두께의 필름으로 라이닝된다(34). 이 상피 라이닝 유체는 주로 염 및 다양한 다른 단백질, 효소, 당 및 폐 계면 활성제와 함께 물입니다. 임의의 곡선형 액체-증기 계면의 경우와 마찬가지로, 모세관 압력은 폐포(또는 버블)의 내부에서 더 높은 압력으로 유도된다. 그러나 표면 장력이 폐 내의 모든 곳에서 일정하다면 라플라스 방정식 인 ΔP = 2γ / R은 작은 폐포가 더 큰 폐포에 비해 더 높은 내부 압력을 가하여 더 작은 폐포의 가스 내용물이 더 크고 낮은 압력 폐포로 흐르게한다는 것을 보여줍니다. 이것은 "라플라스 불안정"9,35로 알려져 있습니다. 최종 결과는 가장 작은 폐포가 붕괴되어 액체로 채워지고 다시 팽창하여 폐의 일부가 붕괴되고 다른 부분이 과도하게 팽창하여 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)의 전형적인 증상입니다. 그러나 제대로 기능하는 폐에서는 폐포 계면 영역의 공기 - 상피액 계면이 호흡 중에 팽창하고 수축함에 따라 표면 장력이 동적으로 변합니다. 만약, 또는 <img alt="Equation 4" src="/files/ftp_upload/64110/64110eq04.jpg" style="margin: auto;">라플라스 압력이 반경이 감소함에 따라 감소하고 반경이 <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/64110/64110eq03.jpg" style="margin: auto;">증가함에 따라 증가하여 라플라스 불안정성을 제거함으로써 폐(9)를 안정화시킨다. 따라서, 빈도, <img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/64110/64110eq05.jpg" style="margin: auto;">단층 형태학 및 조성, 및 폐포액 조성에 어떻게 의존하는지는 폐 안정성에 필수적일 수 있다. CPM-CFM은 또한 계면활성제 흡착(25), 단층형태학(22) 및 팽창 모듈러스(9)에 대한 계면 곡률의 효과에 대한 첫 번째 시연을 제공하였다. CPM 내의 저장소의 작은 부피(∼1 mL)는 액상의 신속한 도입, 제거 또는 교환을 허용하고, 고가의 단백질 또는 계면활성제(10)의 필요한 양을 최소화한다.
CPM-CFM 이미지에서의 콘트라스트는 계면(16,27)에서 형광 태깅된 지질 또는 단백질의 작은 분획의 분포에 기인한다. 2차원 계면활성제 단층은 종종 표면 장력 또는 표면 압력의 함수로서 측방향 상 분리를 나타내는데, 이는 깨끗한 유체-유체 계면의 표면 장력 차이이며, <img alt="Equation 6" src="/files/ftp_upload/64110/64110eq06.jpg" style="margin: auto;"> π0 및 계면활성제-피복 계면의 γ γ는 순수한 유체 표면 장력을 낮추π는 작용을 하는 계면에서의 계면활성제 분자의 상호작용에 의해 야기되는 2차원 "압력"으로 생각될 수 있다. 낮은 표면 압력에서, 지질 단일층은 액체-유사 무질서한 상태에 있고; 이것은 액체 팽창 (LE) 상으로 알려져 있습니다. 표면 압력이 증가하고 지질 분자 당 면적이 감소함에 따라, 지질은 서로 배향하고 장거리 정렬된 액체 응축 (LC) 상 16,20,27로 1차 상 전이를 겪을 수 있다. LE 및 LC 상은 다양한 표면 압력에서 공존할 수 있고, 형광 태깅된 지질이 LC 상으로부터 배제되고 LE 상으로 분리됨에 따라 가시화될 수 있다. 따라서, LE 상은 밝고 LC 상은 CFM16으로 이미징될 때 어둡다.
이 원고의 목표는 결합 된 공초점 현미경 마이크로 텐시오미터를 만들고 작동하는 데 필요한 단계를 설명하는 것입니다. 이를 통해 독자는 흡착 연구를 수행하고, 표면 장력, 유변학 적 행동을 측정하고, 미크론 규모의 공기 / 물 또는 오일 / 물 계면 계면에서 동시에 계면 형태를 검사 할 수 있습니다. 여기에는 필요한 모세혈관을 당기고, 자르고, 소수화하는 방법, 압력, 곡률 및 표면적 제어 모드를 사용하기 위한 지침, 그리고 마이크로텐시오미터 곡선 계면으로의 불용성 계면활성제의 계면 전달에 대한 논의가 포함된다.

<table><tbody><tr><td>1.5 O.D. Tygon 튜빙</td><td>Fischer Scientific</td><td></td><td>튜빙</td></tr><tr><td>A1RHD 다광자 정립 컨포칼 현미경</td><td>Nikon</td><td></td><td>컨포칼 현미경</td></tr><tr><td>산 세척 용액</td><td></td><td></td><td>물로 50% 희석한 황산 및 알노크로믹스</td></tr>, <tr><td>알노크로녹</td>스 <td>Alconox</td><td>2510</td> <td>희석 전에 맑아질 때까지 기다립니다.황산과 혼합하여 포장 지침과 희석하여 산성 세척 용액을 만듭니다</td></tr>. <tr><td>세라믹 유리 커터</td><td>Sutter Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>클로로포름</td><td>시그마-알드리치</td><td>650471</td><td>HPLC 플러스</td></tr><tr><td>Curosurf</td><td>Chiesi</td><td></td><td>&nbsp; 폐 계면 활성제</td></tr><tr><td>Di Water</td><td></td><td></td><td>18.5 M & Omega; - cm</td></tr><tr><td>에탄올</td><td>어떤</td><td></td><td>200 증거는 소수성에 사용되며, 변성 청소에 사용</td></tr><tr><td>Fiber-Lite 모델 190 광섬유 조명기</td><td>Dolan-Jenner Industries Inc.</td><td>281900100</td><td>광원; 다른 광원들도 작동해야 합니다</td></tr>. <tr><td>플로우 EZ F69 mbar w/Link 모듈</td><td>플루이젠</td>트 <td>LU-FEZ-0069</td><td>미세유체 펌프</td></tr><tr><td>플루이젠트 SDK VIs</td><td>플루이젠</td><td></td>트 <td>CPM 가상 인터페이스에 필요</td></tr><tr><td>플루오로엘라스토머 가스켓</td><td></td><td></td><td>1mm 두께의 Viton 시트로 가공, 그림 3 참조</td></tr><tr><td>가스 필터</td><td>Norgren</td><td>F07-100-A3TG</td><td>미세유체 펌프와 압력 조절기 사이에 놓기</td></tr><tr><td>가스 조절기</td><td>Norgren</td><td>10R0400R</td><td>가스 필터 범위 2-120psi에 연결된 펌프 범위로 압력을 낮추</td></tr>십시오. 유리 <tr><td>Capilary</td><td>Sutter Instruments</td><td>B150-86-10</td><td>붕규산 유리 O.D. 1.5mm I.D. 0.86mm</td></tr><tr><td>유리 슬라이드</td><td>75mm</td><td></td><td>x 25mm</td></tr><tr><td>유리 주사기</td><td>Hamilton</td><td>84878</td><td>25 &뮤; L 유리 주사기</td></tr><tr><td>소수성 제제</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>667420</td><td>1H, 1H, 2H, 2H-Perfluoro-octyltriethoxysilane 98 %, 기타 소수성 트리에 톡시 실란으로 대체 될 수</td></tr> 있습니다 <tr>클로로포름의<td>불용성 계면 활성제</td><td>Avanti</td><td>850355C-200mg</td><td>16 : 0 DPPC</td></tr><tr><td>LabVIEW 소프트웨어</td><td>National Instruments</td><td></td><td>2017</td></tr><tr><td>Longpass Filter</td><td>ThorLabs</td><td>FEL0650</td><td>650nm 롱패스 필터, 파장은 여기를 제거해야 합니다. 레이저 주파수</td></tr>, <tr><td>Lyso-PC</td><td>Avanti</td><td>855675P</td><td>16:0 Lyso PC 1-palmitoyl-2-hydroxy-sn-glycero-3-phosphocholine</td></tr><tr><td>Masterflex L/S 가변 속도 아날로그 콘솔 펌프 시스템 w/&nbsp; Easy-Load II 펌프 헤드</td><td>Masterflex</td><td>HV-77916-20</td><td>연동 펌프</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>Mathworks</td><td></td><td>R2019</td></tr><tr><td>마이크로피펫 풀러 P-1000</td><td>셔터 기기</td><td></td><td>모세관 풀러</td></tr><tr><td>미세 장력계 셀 및 홀더</td><td></td><td></td><td>PEEK로 가공된 셀, 알루미늄으로 가공된 홀더, 그림 3 및 4</td></tr><tr><td>마이크로 장력계 대물</td>렌즈 <td>Nikon</td> <td>참조</td><td>Fluor 20x/0.50W DIC M/N2 &n2 &infin;/0 WD 2.0 mm</td></tr><tr><td>NI Vision Development Module</td><td>National Instruments</td><td></td><td>Required for CPM virtual Interface</td></tr><tr><td>PEEK 핑거 타이트 피팅</td><td>IDEX</td><td>F-120x</td><td>10-32 콘 포트</td></tr><tr><td>PEEK 플러그</td><td>IDEX</td><td>P-551</td><td>10-31 콘 포트</td></tr><tr><td>피펫 팁</td><td>Eppendorf</td><td>22492225</td><td>100 &mu; L - 1000 &뮤; L, 오토클레이브</td></tr><tr><td>플라스틱 겸자</td><td>Thermo Scientific</td><td>6320-0010</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 주사기</td><td>Fischer Scientific</td><td>14-955-459</td><td>10mL</td></tr><tr><td>배관 부품</td><td>Fischer Scientific</td><td></td><td>3방향 밸브 및 기타 배관 부품으로 튜브를 연결합니다.</td></tr><tr><td>리서치 플러스 1채널 100 &mu; L&ndash; 1000 &뮤; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td>Micro pipetter</td></tr><tr><td>Sulfuric Acid</td><td>산</td><td></td><td>성 세척 용액에 사용</td></tr><tr><td>T Plan SLWD 20x/0.30 OFN25 WD 30mm</td><td>Nikon</td><td></td><td>Confocal Microscope Objective</td></tr><tr><td>Texas Red DHPE triethylammonim salt</td><td>Thermo Fischer Scientific</td><td>1395MP</td><td>Fluorophore</td></tr><tr><td>Vaccum Pump</td><td>Gast</td><td>DOA-P704-AA</td><td></td></tr></tbody></table>

동적 인터페이스의 공초점 현미경 시각화를 위한 마이크로텐시오미터

Microtensiometer for Confocal Microscopy Visualization of Dynamic Interfaces

유체-유체 계면에 대한 표면-활성 분자의 흡착은 자연에서 유비쿼터스적이다. 이러한 계면을 특성화하려면 계면활성제 흡착률을 측정하고, 벌크 계면활성제 농도의 함수로서 평형 표면 장력을 평가하고, 평형 후 계면 영역의 변화에 따라 표면 장력이 어떻게 변하는지를 연관시켜야 합니다. 고속 공초점 현미경으로 형광 이미징을 사용하여 계면을 동시에 시각화하면 구조-기능 관계를 직접 평가할 수 있습니다. 모세관 압력 마이크로텐시오미터(CPM)에서, 반구형 기포가 1 mL 부피의 액체 저장소에서 모세관의 끝에 고정된다. 버블 인터페이스를 가로지르는 모세관 압력은 라플라스 방정식에 기초한 모델 기반 압력, 버블 곡률 또는 버블 영역 제어를 허용하는 상용 미세유체 유동 제어기를 통해 제어됩니다. Langmuir 물마루 및 펜던트 드롭과 같은 이전 기술과 비교하여 측정 및 제어 정밀도 및 응답 시간이 크게 향상되었습니다. 모세관 압력 변동을 밀리초 단위로 적용하고 제어할 수 있습니다. 버블 인터페이스의 동적 반응은 버블이 확장되고 수축함에 따라 두 번째 광학 렌즈를 통해 시각화됩니다. 버블 윤곽선은 원형 프로파일에 적합하여 버블 곡률 반경, R 및 결과를 무효화하는 원형으로부터의 편차를 결정합니다. 라플라스 방정식은 계면의 동적 표면 장력을 결정하는 데 사용됩니다. 평형 후, 컴퓨터 제어 마이크로 유체 펌프에 의해 작은 압력 진동을 부과하여 버블 반경 (0.001-100 사이클 / 분의 주파수)을 진동시켜 팽창 모듈러스를 결정할 수 있습니다 시스템의 전체 치수는 마이크로 텐시오미터가 고속 공초점 현미경의 렌즈 아래에 들어갈 정도로 충분히 작아서 형광 태그가 지정된 화학 종을 서브 미크론 측방향 분해능으로 정량적으로 추적 할 수 있습니다.

측정 오류의 주요 원인은 절단 공정(그림 5A,B) 또는 코팅 공정(그림 5D)에서 결함이 있는 모세혈관에서 발생합니다. 두 가지 유형의 결함 모두 광학 이미지 분석 시스템에 의해 버블 모양과 크기를 결정하는 데 오류를 일으켜 부정확 한 표면 장력 값을 초래합니다. 모세관을 CPM에 삽입하기 전에 광학 현미경으로 당겨서 코팅 한 후에 각각의 새로운 모세관을 신중하게 검사하는 것이 중요합니다. 잘못 절단된 모세관은 폐기해야 하지만, 제대로 코팅되지 않은 모세관은 산-세척되고 재코팅되어 모세관의 끝에서 버블 핀닝을 개선할 수 있다(프로토콜의 2단계). 모세관은 엔드 컷이 모세관(그림 5C)과 모세관 끝에 직접 있는 버블 핀(그림 5E)에 완벽하게 수직인 경우에 가장 잘 작동합니다. 모세관의 ...

이 원고는 계면 형태를 시각화하면서 계면 장력과 표면 팽창 유변학을 동시에 측정하기 위해 마이크로 텐시오미터 / 공초점 현미경의 설계 및 작동을 설명합니다. 이것은 기술 및 생리학에서 중요한 인터페이스의 구조 - 속성 관계의 실시간 구축을 제공합니다.

Adsorption of surface-active molecules to fluid-fluid interfaces is ubiquitous in nature. Characterizing these interfaces requires measuring surfactant ...

이 방법은 컨포칼 현미경과 모세관 압력 마이크로 장력계를 결합하여 높은 공간 및 시간 분해능에서 곡선 유체 유체 인터페이스를 연구하는 데 사용할 수 있는 강력한 도구를 만듭니다. 이 기술은 고도로 구부러진 계면에서 표면 형태학의 표면 특성과 컨포칼 이미지를 동시에 측정하여 표면 활성 물질의 구조 및 기능 관계를 검사할 수 있습니다. 우리는 염증 생성물이 정확한 호흡 곤란 증후군과 관련된 호흡 문제를 일으키는 폐 계면 활성제를 억제한다고 가정합니다.이 문은 이러한 물질에 노출된 폐 계면활성제 특성과 형태 및 폐 안정성을 조사할 수 있다. 시작하려면 모세관의 큰 면이 셀의 아래쪽으로 밀릴 때까지 셀 상단에 배치하여 CPM 셀을 조립합니다. 피크 커넥터를 부드럽게 조여 모세관을 고정한 다음 미세유체 펌프에서 튜브를 모세관의 큰 면에 부착합니다.필요에 따라 용매 교환 저장소 및/또는 온도 조절 수조를 CPM 셀 상의 각각의 입구 및 출구에 부착한다. 그렇지 않으면 사용하지 않는 입구와 출구를 막으십시오. CPM 셀을 컨포칼 현미경 스테이지에 부착하여 CFM 대물렌즈, CPM 카메라 및 CPM 광원과 대략적으로 정렬합니다.펌프의 권장 작동 압력에서 미세유체 펌프로의 가스 흐름을 열고 모세관으로의 흐름이 열려 있는지 확인합니다. 기준 압력을 25mbar로 설정하고 압력 제어 모드로 전환하는 CPM 가상 인터페이스 실행을 시작합니다. 그런 다음 피펫을 사용하여 CPM 셀을 물로 채 웁니다.마이크로 장력계 카메라를 사용하여 모세관 팁에 초점을 맞추고 기포와 겹치도록 항문을 배열합니다. 컨포칼 현미경의 액침 대물렌즈를 셀의 유체와 접촉시키고 컨포칼 현미경을 사용하여 기포에 초점을 맞춥니다. 거품 재설정을 클릭하고 새 거품이 형성되었는지 확인하십시오.버블이 터지지 않으면 보기 창 아래의 버블 리셋 탭에서 리셋 압력을 높이거나 리셋 지연 시간을 늘리십시오. 세포 주사기에 직접 물을 꺼내 비우고 다시 부착하십시오. 원하는 샘플로 셀을 채 웁니다.고압멸균 피펫을 사용하여 CPM 소프트웨어를 압력 제어 모드로 유지하여 새로운 버블 인터페이스가 생성될 때 초기 표면 장력이 미터당 약 73밀리뉴턴이 되도록 합니다. 새로 형성된 버블의 반경을 결정한 후 그 값을 중심선 영역 제어부에 입력하고 영역 제어 탭을 클릭하여 영역 제어로 제어 유형을 변경한다. 공초점 비디오 녹화를 시작한 다음 버블 재설정을 클릭하고 즉시 데이터 수집을 클릭합니다.막대를 밀어 샘플의 총 흡수 시간에 따라 데이터 기록 속도를 조정합니다. 실험 종료 후. 올바른 파일 경로를 선택하고 저장 버튼을 클릭하여 파일을 저장합니다.CFM에서도 녹음을 중지하고 저장하십시오. 원하는 기준 값 진동 백분율과 진동 주파수를 입력하고 진동이 압력 진동, 영역 진동 또는 곡률 진동인지 여부를 결정하여 적절한 탭을 선택합니다. 공초점 비디오 녹화를 시작하고 CPM 소프트웨어에서 데이터 수집을 클릭합니다.각 진동 주기에 적절한 수의 데이터 포인트를 제공하기 위해 데이터 수집 속도를 선택합니다. 다른 진동 진폭 또는 주파수가 필요한 경우 실험 중에 값을 변경하고 결과를 저장하십시오. 먼저 연동 펌프의 입구 튜브를 원하는 교환 용액 병에 삽입하고 출구 튜브를 폐기물 용기에 삽입합니다.공초점 소프트웨어에서 비디오 녹화를 시작한 다음 CPM 소프트웨어에서 데이터 수집을 클릭합니다. 다음으로 연동 펌프 속도를 설정하십시오. 여러 유체를 교환해야하는 경우 연동 펌프를 중지하고 입구를 다른 교환 용액에 연결하십시오.교환이 완료되면 앞에서 설명한 대로 결과를 저장합니다. 일정한 압력 흡수에 대한 마이크로텐시오미터 결과는 연구 전반에 걸쳐 기포 표면적이 상당히 증가하고 일정한 표면적이 경우보다 훨씬 느린 흡수를 유도한다는 것을 입증했다. 흡수 과정에서 계면의 형광 신호는 낮게 시작되어 계면활성제가 계면에 흡수됨에 따라 증가합니다.계면활성제가 표면 도메인을 형성하는 경우 이들 도메인은 형성 및 성장하는 것을 관찰할 수 있다. 진동 연구를 수행 할 때 진동은 제어되는 매개 변수에 대해서만 진정한 정현파입니다. 표면적 제어 연구를 위해 여기에 표시된 것처럼 이것은 영역의 진동이 정현파여야 하므로 표면 팽창 모듈형을 계산할 때 중요합니다.진동 연구에서 수집된 표면 장력 및 면적 데이터는 계면활성제 층의 계면 팽창 계수를 직접 계산하는 데 사용되었습니다. 포스포 지질 모노 층을 진동시킬 때, 흑색 액체 응축 도메인의 움직임은 연속적인 착색 액체 팽창 상 전체에 걸쳐 관찰 될 수있다. 인터페이스의 개별 도메인은 곡선 버블에서 진동이 발생함에 따라 인터페이스를 덮도록 성장한 분기 네트워크로 재구성되었습니다.이것은 표면 장력과 표면 팽창 계수의 동시 변화에 의해 확증됩니다. 폐 계면 활성제 단층에 대한 용매 교환 연구 중에 완충 용액과 올가미 PC 용액으로 교환이 진행됨에 따라 도메인의 형태가 크게 변했습니다. 기포의 진동과 고정을 시각적으로 추적하여 모세관이 정사각형이고 기포가 구형을 유지하는지 확인하는 것이 중요합니다.공기-물 인터페이스 외에도 오일-물 인터페이스를 연구하여 에멀젼의 안정성과 특성을 결정할 수 있습니다. 이 기술은 곡선 인터페이스의 구조 속성 관계를 구성하는 단일 변경 방법을 제공합니다. 그것은 이전에 평면 인터페이스에서만 연구된 인종 간 형태학을 지배하는 요인에 대한 새로운 탐구를 허용합니다.

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연구

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공학

동적 인터페이스의 컨포칼 현미경 시각화를 위한 Microtensiometer

따라서, 그것이 관여 단백질의 공간적 및 시간적 행위를 파악하는 것이 중요 신호 전달 이해하기 위해, 플라즈마 막 내에서 또는 세포 내 위치에 두 단백질의 compartmentalization 크게 신호 결과에 영향을 미칠 수있는 규제 메커니즘입니다. 우리는 여기서 T 세포의 신호 전달을 연구하는 TIRF 현미경 기반 시스템을 설명하지만, 광범위하게 적용됩니다.

실시간, TCR의 동시 이미징 및 관련 신호 전달 단백질에 대한 TIRF 현미경 기법

이 비디오에서는 적절한 완충액이 있는 커버슬립 표면에서 자라는 미세소관을 시각화하기 위한 간섭 반사 현미경(IRM) 기술에 대해 설명합니다. 입사광을 이용한 조명 시, 커버슬립-버퍼 인터페이스와 버퍼-미세소관 인터페이스는 빛을 반사하며, 이 두 인터페이스가 결합되어 간섭 패턴을 생성함으로써 미세소관을 밝은 배경에 대한 고대비 이미지로 시각화할 수 있습니다.

미세소관 역학의 Label-free 시각화를 위한 간섭 반사 현미경 검사

Integrin 긴장 다양 한 세포 기능에 중요 한 역할을 담당합니다. 통합 긴장 센서 integrin 긴장은 picoNewton (pN) 감도 보정와 서브 마이크론 해상도 몇 군데.

Integrin 긴장과 셀룰러 힘 통합 긴장 센서와 서브 마이크론 해상도 이미징

이 프로토콜은 시험관 내 표면 분석법을 사용하여 미세 소관의 무, 고대비, 고속 이미징을 위한 표준 형광 현미경에 간섭 반사 현미경 을 구현하기 위한 가이드입니다.

마이크로소관의 라벨이 없는 고속 이미징을 위한 간섭 반사 현미경 검사법 구현

여기서, 우리는 광학 트랩에 의한 직접 힘 측정을 통해 3차원 감금에서 격리된 배아 제브라피쉬 세포의 세포내 기계적 특성을 조사하는 프로토콜을 제시한다.

광학 핀셋을 사용하여 감금된 세포 전 역학의 직접 힘 측정

여기서, TIRF 현미경 기반 시험관내 재구성 분석법이 제시되어 두 미세소관 집단의 역학을 동시에 정량화하고 비교한다. 가교된 미세소관 다발 및 단일 미세소관 상에서 다수의 미세소관-관련 단백질의 집단 활성을 동시에 보는 방법이 기술된다.

TIRF 현미경에 의한 시험관 내에서 가교 및 단일 미세 소 관 의 역학의 동시 시각화

TGT 표면은 성장 인자 - 인테그린 누화를 연구하는 혁신적인 플랫폼입니다. 유연한 프로브 설계, 부착 리간드의 특이성, 자극 조건의 정밀한 조절은 EGFR-인테그린 인터플레이의 강력한 정량적 평가를 가능하게 한다. 결과는 EGFR을 '메카노-조직자' 튜닝 인테그린 역학으로 강조하여 초점 접착 어셈블리 및 세포 확산에 영향을 미칩니다.

성장 인자 매개 인테그린 역학 및 접착력을 정량화하기 위한 장력 게이지 테더 프로브

우리는 동적 미세 소관 및 형광 표지 된 미세 소관 관련 단백질의 동시 이미징을 위해 간섭 반사 현미경 검사 및 전체-내부-반사-형광 현미경을 구현하기위한 프로토콜을 제시합니다.

동시 간섭 반사 및 전체 내부 반사 형광 현미경 검사 이미징 동적 미세 소관 및 관련 단백질

여기에서는 시험관 내에서 미세소관 다발을 재구성하고 동시 광학 트래핑 및 전반사 형광 현미경을 사용하여 그 안에 가해지는 힘을 직접 정량화하는 프로토콜을 제시합니다. 이 분석은 활성 미세소관 네트워크 내에서 단백질 앙상블에 의해 생성된 힘과 변위의 나노스케일 수준 측정을 허용합니다.

재구성된 활성 미세소관 다발 내의 힘을 직접 측정

이 프로토콜은 단일 대물렌즈 광시트 형광 현미경을 구축하는 방법과 세포골격 네트워크 시각화를 위한 사용법에 대해 자세히 설명합니다.

세포골격 네트워크의 시각화를 위한 맞춤형 단일 대물렌즈 광시트 형광 현미경의 설계 및 구축

여기에서는 공압식으로 작동되고 고해상도 현미경 검사와 호환되는 다목적 등축 스트레칭 장치를 제시합니다.

고배율 Live-Cell Confocal Fluorescence Microscopy를 위한 Equibiaxial Stretching Device

배우세요 공초점 현미경과 마이크로텐시오미터를 결합하여 곡면 유체-유체 계면의 구조-특성 관계를 실시간으로 분석하는 방법을. 폐 표면활성제 기능 저해 메커니즘 연구에 활용할 수 있습니다.

동적 인터페이스의 공초점 현미경 시각화를 위한 마이크로텐시오미터

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