Murine Oppervlakkige lymfkliertest Chirurgie

Het algemene doel van deze procedure is om lymfeklieren chirurgisch te verwijderen uit een onder narcose staande muis. Dit wordt bereikt door eerst de lymfeklieren te lokaliseren. De lymfeklieren worden verzameld en vervolgens wordt de incisie gesloten.

Ten slotte kan een enkele celsuspensie worden verkregen voor experimentele analyse. Uiteindelijk kunnen vitale lymfocytpopulaties worden geëvalueerd door middel van flowcytometrie. Visuele demonstratie van deze techniek is cruciaal, aangezien de lokalisatie en verwijdering van lymfeklieren moeten worden bekeken om te worden beheerst.

Nadat de muis is verdoofd, breng ooglijster aan, injecteer buprenorfine en bevestig de sedatie door een teenprik, draai vervolgens de muis op zijn zij. Lokaliseer eerst de brachiale lymfeklier en scheer vervolgens het te vertrekken gebied. Na het borstelen van eventuele losse haren, breng een ontsmettingsmiddel aan op het gebied en maak vervolgens een kleine incisie van ongeveer vijf millimeter aan de achterkant van de vierde poot.

Gebruik twee paar pincetten om de incisie te strekken totdat de brachiale lymfeklier, die er grijsachtig of donkerder kan uitzien dan het omliggende vet, zichtbaar wordt. Knijp vervolgens met één paar pincetten in de fascie die de lymfeklier bedekt. Plaats het tweede paar pincetten zo ver mogelijk onder de lymfeklier en trek licht aan het membraan zonder het omliggende weefsel te breken.

Gebruik vervolgens het eerste paar pincetten om de fascie te breken en de lymfeklier te verwijderen. Als de lymfeklier met succes is geoogst, zal er een bloedvlek verschijnen waar de lymfeklier eerder zat. Plaats de uitgezaagde lymfeklier in een isotone oplossing als deze zinkt, dit bevestigt dat het geoogste weefsel een lymfeklier is en geen vet.

Controleer vervolgens of er geen haren in de wond zitten en sluit de incisie door de twee binnenkanten van de huid aan elkaar te plakken en ze met een tot twee clips te bevestigen, afhankelijk van de grootte van de incisie. Lokaliseer vervolgens een inguinale lymfeklier en scheer het te vertrekken gebied. Na het borstelen van eventuele losse haren, breng een ontsmettingsmiddel aan op het gebied en maak vervolgens een kleine incisie van ongeveer vijf millimeter boven de achterpoot nabij de buik.

Nadat de incisie is geopend met twee paar pincetten zoals zojuist getoond voor de brachiale lymfeklier, identificeer de inguinale lymfeklier die zich nestelt in het omringende vetweefsel. Verwijder vervolgens de lymfeklier met de twee paar pincetten zoals zojuist gedemonstreerd. Bevestig opnieuw de succesvolle oogst van de lymfeklier door de bloedvlek te noteren die verschijnt waar de lymfeklier eerder zat, en laat vervolgens de inguinale lymfeklier vallen in een apart bakje met isotone oplossing.

Nadat alle lymfeklieren zijn geoogst, plaats de muis in een kooi en voeg nat voedsel toe zodat de muis gemakkelijk kan eten. Controleer de muis na ongeveer zes tot acht uur na de operatie om er zeker van te zijn dat deze geen pijn ervaart. Observeer zorgvuldig dat houding, gang, interactie met omgeving en uiterlijk van de vacht vergelijkbaar is met die van een normale gezonde muis.

Ten slotte dissocioort de lymfeklier door hem tegen bevroren glijbanen in een petrischaal te drukken en breng hem vervolgens over in een buis om een enkele celsuspensie te verkrijgen. Na het kleuren van de cellen voor de celoppervlakte-antigenen van belang, analyseer de cellen door middel van flowcytometrie. Hier worden voorbeeldvoorwaartse en zijwaartse scatterplots getoond voor lymfeklieren die zijn geoogst uit verdoofde of geofferde dieren.

De profielen en percentages van cellen in de levende lymfocytpoorten van de twee scatterplots zijn hetzelfde. Dit toont aan dat lymfeklierenchirurgie een geschikte techniek is om cellen te oogsten. Eenmaal onder de knie is de lymfeklierenchirurgie in vijf tot 10 minuten per muis te voltooien als deze correct wordt uitgevoerd.