Name: Bone Geconditioneerd Medium: Voorbereiding en Bioassay (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 18 s
Description: Leer hoe bot-geconditioneerd medium wordt bereid uit varkensmandibulachips en getest in vitro. Deze methode analyseert genexpressieveranderingen in cellen en helpt onderzoekers bij het bestuderen van botbiologie en weefselengineering.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen Catherine Solioz bedanken voor haar bekwame assistentie.

1. BCM Voorbereiding <ol><li> Verkrijgen varken onderkaken van de plaatselijke slager zo vers mogelijk. Plaats de kaken op een stevige ondergrond en laat een volledige dikte flap bijzondere aandacht geen zacht weefsel niet te verlaten of periosteum gehecht aan het bot. Werk in een schone omgeving zonder dat hij onder stroomkap. </li><li> Zodra een volledige dikte flap wordt losgelaten, gebruikt een bot schraper om de botsplinters oogsten uit de buccale zijde. Houdt u er rekening mee dat het bot schraper heeft scherpe zijn. Handvat stevig op het bot schraper met lange bewegingen te verzamelen op het bot. Gooi het bot chips kleiner dan 1mm. <ol><li> Om inheemse bot chips te houden, plaatst u direct de botsplinters in plastic schaaltjes van 10 cm diameter met Dulbecco&#39;s gemodificeerd Eagle&#39;s medium (DMEM) aangevuld met 1% antibiotica en antimycotica niet laten uitdrogen. </li><li> Om het effect van warmtebehandeling evalueren onderworpen botchips pasteurisatie gedurende 30 min bij 80 ° C ofautoclaaf gedurende 20 minuten bij 121 ° C. </li><li> Om het effect van demineralisatie evalueren schud botsplinters in 1 M HCl gedurende 4-6 uur bij 4 ° C en herhaaldelijk wassen met kweekmedium tot de pH neutraal. </li></ol></li><li> Plaats een totaal van 5 g botchips per 10 ml vers DMEM aangevuld met 1% antibiotica en antimycotica in een nieuwe plastic schaaltje. </li><li> Plaats de plastic schaaltjes in een bevochtigde atmosfeer bij 37 ° C gedurende 24 uur. Vervolgens oogst BCM. Centrifugeer de BCM bij 200 xg gedurende 10 min om vuil te verwijderen, filteren steriel (0,2 nm) en houd aliquots bij -80 ° C ingevroren. </li><li> Ontdooi de BCM voorraad direct voor gebruik en te voorkomen dat herhaalde cycli van invriezen en ontdooien. </li><li> Voor aangegeven experimenten, genieten collageenmembranen met BCM of serumvrij medium gedurende 1 uur bij KT. Was krachtig de membranen met PBS en plaats ze in 96 putjesplaten. Natte membranen worden bezaaid met cellen. </li><li> BCM bereidingsproces wordt samengevat in figuur 1. </li&gt; </ol> 2. bioassays basis van mesenchymcellen <ol><li> Seed humane mesenchymale cellen (bijvoorbeeld botcellen, gingivale en periodontale ligament fibroblasten) in een 12-wells plaat met een concentratie van 30.000 cellen / cm2. Aan zaad van de cellen gebruiken groeimedium, bestaande uit DMEM, 10% foetaal kalfsserum en antibiotica. Laat de cellen hechten aan de plaat O / N. </li><li> Gooi het kweekmedium en was de cellen met voorverwarmde PBS bij 37 ° C. Stimuleren van de cellen door toevoeging van voorverwarmd serumvrij kweekmedium met en zonder 20% BCM. Plaats de cellen in een vochtige atmosfeer bij 37 ° C gedurende 24 uur. </li><li> Gooi het kweekmedium, spoel de cellen met voorverwarmd PBS en pak het RNA volgens uw voorkeur protocol. </li><li> Dient de concentratie van RNA om dezelfde hoeveelheid RNA van elk monster. Bereid cDNAs en voer een qRT-PCR om geselecteerde genen waarvan een voorbeeld in tabel 1 primers geanalyseerd. OPMERKING: Dit zijn de verdunningen van elk onderdeel: 2x SYBR Green, 20x primer vooruit, 20x primer reverse, 5x steriel DD water, 5x cDNA. De qRT-PCR uitgevoerd in 40 cycli van 95 ° C 15 sec en 60 ° C 1 min. </li><li> Bereken het relatieve expressie niveaus door het normaliseren van de huishouding gen GAPDH met behulp van de methode Δ (ACt) waarbij OCT is CT doelgroep - CT GAPDH en Δ (OCT) is OCT-gestimuleerde - AC T controle. </li><li> Hierna kwaliteitscontrole, voeg BCM kweekmedium voor alle soorten cellen waaronder mesenchymale cellen, hematopoietische cellen en endotheliale cellen te stimuleren. </li></ol>

<ol><li>Buser, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+Stability+of+Early+Implant+Placement+with+Contour+Augmentation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+dental+research%22%5BJournal%5D)">Long-term Stability of Early Implant Placement with Contour Augmentation.</a> Journal of dental research. , (2013).</li>
<li>Chiapasco, M., Casentini, P., Bone Zaniboni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((augmentation+procedures+in+implant+dentistry%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+oral+%26+maxillofacial+implants.+24+Suppl%22%5BJournal%5D)">augmentation procedures in implant dentistry.</a> The International journal of oral & maxillofacial implants. 24 Suppl. , 237-259 (2009).</li>
<li>Giannoudis, P. V., Dinopoulos, H., Bone Tsiridis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((substitutes%3A+an+update.+Injury%5BTitle%5D)+AND+%2236%2C+Suppl+3.+S20-S27%22%5BJournal%5D)">substitutes: an update. Injury.</a> 36, Suppl 3. S20-S27. , (2005).</li>
<li>Jensen, S. S., Broggini, N., Hjorting-Hansen, E., Schenk, R., Bone Buser, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((healing+and+graft+resorption+of+autograft%2C+anorganic+bovine+bone+and+beta-tricalcium+phosphate.+A+histologic+and+histomorphometric+study+in+the+mandibles+of+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+oral+implants+research%22%5BJournal%5D)">healing and graft resorption of autograft, anorganic bovine bone and beta-tricalcium phosphate. A histologic and histomorphometric study in the mandibles of minipigs.</a> Clinical oral implants research. 17, 237-243 (2006).</li>
<li>Jensen, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+novel+biphasic+calcium+phosphate+in+standardized+bone+defects%3A+a+histologic+and+histomorphometric+study+in+the+mandibles+of+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+oral+implants+research%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a novel biphasic calcium phosphate in standardized bone defects: a histologic and histomorphometric study in the mandibles of minipigs.</a> Clinical oral implants research. 18, 752-760 (2007).</li>
<li>Grabowski, G., Bone Cornett, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((graft+and+bone+graft+substitutes+in+spine+surgery%3A+current+concepts+and+controversies%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Academy+of+Orthopaedic+Surgeons%22%5BJournal%5D)">graft and bone graft substitutes in spine surgery: current concepts and controversies.</a> The Journal of the American Academy of Orthopaedic Surgeons. 21, 51-60 (2013).</li>
<li>Khan, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+bone+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+the+American+Academy+of+Orthopaedic+Surgeons%22%5BJournal%5D)">The biology of bone grafting.</a> The Journal of the American Academy of Orthopaedic Surgeons. 13, 77-86 (2005).</li>
<li>Bohr, H., Ravn, H. O., Werner, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+osteogenic+effect+of+bone+transplants+in+rabbits.+The+Journal+of+bone+and+joint+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22British%22%5BJournal%5D)">The osteogenic effect of bone transplants in rabbits. The Journal of bone and joint surgery.</a> British. 50, 866-873 (1968).</li>
<li>Bone Urist, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((formation+by+autoinduction%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">formation by autoinduction.</a> Science. 150, 893-899 (1965).</li>
<li>Caballé-Serrano, J. D., Buser, D., Gruber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+analysis+of+porcine+bone+conditioned+medium%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+oral+%26+maxillofacial+implants%22%5BJournal%5D)">Proteomic analysis of porcine bone conditioned medium.</a> The International journal of oral & maxillofacial implants. , (2014).</li>
<li>Peng, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone-Conditioned+Medium+Inhibits+Osteogenic+and+Adipogenic+Differentiation+of+Mesenchymal+Cells+In+Vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+implant+dentistry+and+related+research%22%5BJournal%5D)">Bone-Conditioned Medium Inhibits Osteogenic and Adipogenic Differentiation of Mesenchymal Cells In Vitro.</a> Clinical implant dentistry and related research. , (2014).</li>
<li>Brolese, E., Buser, D., Kuchler, U., Schaller, B., Gruber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+bone+chips+release+of+sclerostin+and+FGF-23+into+the+culture+medium%3A+an+in+vitro+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+oral+implants+research%22%5BJournal%5D)">Human bone chips release of sclerostin and FGF-23 into the culture medium: an in vitro pilot study.</a> Clinical oral implants research. , (2014).</li>
<li>Caballé-Serrano, J., Bosshardt, D. D., Gargallo-Albiol, J., Buser, D., Bone Gruber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((conditioned+medium+enhances+osteoclastogenesis+in+murine+bone+marrow+cultures.+Clin+Oral+Impl+Res%3B+in%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oral+Maxillofac+Surg%22%5BJournal%5D)">conditioned medium enhances osteoclastogenesis in murine bone marrow cultures. Clin Oral Impl Res; in.</a> Int J Oral Maxillofac Surg. , (2015).</li>
<li>Zimmermann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone-conditioned+medium+changes+gene+expression+in+bone-derived+fibroblasts%29%5BTitle%5D)+AND+%22IJOMI+accepted%22%5BJournal%5D)">Bone-conditioned medium changes gene expression in bone-derived fibroblasts).</a> IJOMI accepted. , (2014).</li>
<li>Fulzele, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelopoiesis+is+regulated+by+osteocytes+through+Gsalpha-dependent+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Myelopoiesis is regulated by osteocytes through Gsalpha-dependent signaling.</a> Blood. 121, 930-939 (2013).</li>
<li>Becerra, J., Andrades, J. A., Ertl, D. C., Sorgente, N., Nimni, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demineralized+bone+matrix+mediates+differentiation+of+bone+marrow+stromal+cells+in+vitro%3A+effect+of+age+of+cell+donor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of%22%5BJournal%5D)">Demineralized bone matrix mediates differentiation of bone marrow stromal cells in vitro: effect of age of cell donor.</a> Journal of. 11, 1703-1714 (1996).</li>
<li>Kupcova Skalnikova,, H, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+techniques+for+characterisation+of+mesenchymal+stem+cell+secretome%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Proteomic techniques for characterisation of mesenchymal stem cell secretome.</a> Biochimie. , (2013).</li>
<li>Romanello, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblastic+cell+secretome%3A+A+novel+role+for+progranulin+during+risedronate+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Osteoblastic cell secretome: A novel role for progranulin during risedronate treatment.</a> , Bone. (2013).</li>
<li>Schuldt Filho,, G, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+medium+of+demineralized+bone+matrix+activates+TGF-%CE%B2+signaling+pathways+in+mesenchymal+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cranio+Maxill+Surg%22%5BJournal%5D)">Conditioned medium of demineralized bone matrix activates TGF-β signaling pathways in mesenchymal cells in vitro.</a> J Cranio Maxill Surg. , (2015).</li>
<li>Buser, D., Chen, S. T., Weber, H. P., Belser, U. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+implant+placement+following+single-tooth+extraction+in+the+esthetic+zone%3A+biologic+rationale+and+surgical+procedures%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+periodontics+%26+restorative+dentistry%22%5BJournal%5D)">Early implant placement following single-tooth extraction in the esthetic zone: biologic rationale and surgical procedures).</a> The International journal of periodontics & restorative dentistry. 28, 441-451 (2008).</li>
<li>Stoecklin-Wasmer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absorbable+collagen+membranes+for+periodontal+regeneration%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+dental+research%22%5BJournal%5D)">Absorbable collagen membranes for periodontal regeneration: a systematic review.</a> Journal of dental research. 92, progress. 773-781 (2013).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen. Jordi Caballé-Serrano ontving een beurs van de Stichting van de Dental Onderzoek en Onderwijs, Basel, Zwitserland.

Bone-geconditioneerd medium weerspiegelt de activiteit bezit van bottransplantaten in de eerste fasen van botregeneratie. De hier beschreven protocol kan worden aangepast aan de respons van verschillende soorten cellen die betrokken zijn bij botherstel te bestuderen. Bovendien kan het protocol worden gebruikt om geconditioneerd medium verwerkte bot of vulstoffen te bereiden. De werkwijzen zijn eenvoudig uit te voeren en vertrouwen op een eenvoudig concept: de factoren vrijgemaakt uit diverse natieve en verwerkt bot. Beg...

Autoloog bot wordt veel gebruikt om defecten die ontstaan ​​als gevolg van misvorming, chirurgische resectie, reconstructieve chirurgie trauma, en voorafgaand aan implantatie 1,2 overbruggen. Het begrijpen van de biologische principes hoe bottransplantaten ondersteunen van het proces van transplantaat consolidatie niet alleen belangrijk om te begrijpen waarom autografts worden beschouwd als de gouden standaard in reconstructieve chirurgie, is het ook bionische de verbeterde constructie van botsubstituten 3. Toch graft consolidatie is sneller met autoloog bot ten opzichte van het bot vervangt 4,5. Derhalve is het noodzakelijk om de moleculaire en cellulaire mechanismen die autoloog bot zo effectief botregeneratie te ondersteunen onthullen. Er zijn drie leerboek kenmerken autografts die geacht worden de consolidatieproces 6,7 ondersteunen. Ten eerste, autoloog bot is osteoconductief, het verstrekken van begeleiding van de nieuw gevormde bot te groeienin het defect. Ten tweede, autoloog bot is osteogene, wat betekent dat het bevat mesenchymale cellen die kunnen differentiëren tot osteoblasten 8. Ten derde, autoloog bot is osteoinductieve als groeifactoren, zoals bot morfogenetische eiwitten begraven in de matrix het proces van endochondrale of zelfs intramembraneuze botvorming 9 kan initiëren. Er is een ander aspect: vers bereide botsplinters bezit van een paracrine functie op basis van de in vitro waarnemingen met &quot;-bone geconditioneerd medium&quot; 10-15. Ook zou de invloed van myelopoiese worden vermeld 16. Een soortgelijke term &quot;gedemineraliseerd bot-matrix geconditioneerd medium&quot; was al bedacht in 1996 en steunt het algemene concept van een paracriene functie van het bot, zelfs wanneer verwerkt door demineralisatie 17. Voor onze doeleinden, kunnen BCM worden bereid uit verse varken kaken 10,11. Proteomics analyses van BCM bleek de complexe samenstelling, met inbegrip van de groei feitors en bestanddelen van de extracellulaire matrix 10, ook de uitbreiding van bestaande kennis op het proteasoom van hele bot 18,19. Daarom moet de BCM vrijgegeven activiteit van verscheidene modificaties van bottransplantaten in vitro geven. Wat gebeurt er als mesenchymale cellen, bijvoorbeeld die geïsoleerd uit botsplinters of orale zachte weefsel, blootgesteld aan BCM? In vitro, BCM vermindert osteogene en adipogene differentiatie, en veroorzaakt een sterke toename van IL11-expressie 11. Chromosomale microarray geopenbaard meer genen differentieel tot expressie worden gebracht in mesenchymale cellen in respons op BCM. Onder deze genen adrenomedullin (ADM), IL11, IL33, NADPH oxidase 4 (NOX4), proteoglycan 4 (PRG4 of lubricin) en pentraxine 3 (PTX3) 15. BCM verkregen uit autoclaaf botsplinters niet de expressie van de respectieve genen 14 veranderen. BCM uit het bot chips die pasteurisatie ondergaan en bevriezing was in staat omveranderen genexpressie 14. Ook geconditioneerd medium gedemineraliseerd botmatrix (DBM-CM) verandert de expressie van TGF-β-gereguleerde genen 20. Interessant collageen barrièremembranen gebruikt om het bot chips te beschermen tegen de omringende zachte weefsels 21,22, geadsorbeerd die delen van BCM die verantwoordelijk zijn voor de veranderingen in genexpressie 23 zijn. BCM onderzoek kan worden uitgebreid tot andere celtypen betrokken bij botherstel zoals botresorberende osteoclasten en endotheliale cellen, een paar te noemen. Kortom, het accumuleren in vitro data over wetenschappelijke basis voor het ontwerp van een preklinisch onderzoek. Het huidige protocol is tweeledig: ten eerste, het laat zien hoe de BCM te bereiden. Ten tweede laat zien hoe de biologische activiteit ervan te testen op basis van mesenchymale cellen in vitro.

<table><tbody><tr><td>Pig Mandibles</td><td>Local bucher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bone Scraper</td><td>Hu-Friedy</td><td>PPBUSE2/36</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotics &amp; Antimicotics</td><td>All life Technologies</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>Collagen Membranes (Bio-Gide)</td><td>Geistlich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fetal Calf Serum</td><td>Invitrogen Corporation</td><td>16030074</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen Corporation</td><td>21885-025</td><td></td></tr><tr><td> High Pure RNA Isolation Kit</td><td>Roche</td><td>11828665001</td><td></td></tr><tr><td>Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit</td><td>Roche</td><td>4379012001</td><td></td></tr><tr><td>Primers</td><td>Microsynth</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SYBR Green (for Q-RT-PCR)</td><td>Roche</td><td>4673484001</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Roche</td><td>11666789001</td><td></td></tr></tbody></table>

bone geconditioneerd medium: voorbereiding en bioassay

Bone Conditioned Medium: Preparation and Bioassay

Autologe bottransplantaten worden op grote schaal gebruikt in de kaakchirurgie, orthopedie en traumatologie. Autologe bottransplantaten vervangen niet alleen ontbreekt het bot, maar ook ondersteuning van het complexe proces van botregeneratie. Deze gunstige gedrag autografts wordt toegeschreven aan drie kenmerken: osteoconductiviteit, osteogenicity en osteo-inductiviteit. Er is echter een ander aspect: Bone ent laat een groot aantal moleculen, zoals groeifactoren, die mesenchymale cellen die betrokken zijn bij botherstel kunnen richten. De paracriene eigenschappen van bottransplantaten worden bestudeerd in vitro door het gebruik van bot-geconditioneerde medium (BCM). Hier presenteren we een protocol over hoe bot geconditioneerd medium te bereiden van inheemse varken corticale bot en bot dat de thermische verwerking of demineralisatie onderging. Cellen kunnen direct worden blootgesteld aan BCM en gezaaid op biomaterialen, zoals collageen membranen, vooraf gedrenkt BCM. We geven voorbeelden van in vitro bioassays met mesenchymale cellen op de expressie van TGF-β gereguleerde genen. De gepresenteerde protocollen moeten aanmoedigen om de paracriene effecten van bottransplantaten verdere onthullen tijdens de regeneratie van bot en een pad voor translationeel onderzoek te openen op het brede terrein van de reconstructieve chirurgie.

Bone geconditioneerd medium wordt bereid uit verse varkens botsplinters. Algemeen overzicht van het proces BCM voorbereiden en biomaterialen in combinatie met BCM gebruikt wordt getoond in figuur 1 respectievelijk figuur 2. Tijdens het BCM preparaat is het belangrijk om grote botsplinters met lange bewegingen korte delen of zeer kleine botsplinters verkrijgen kan de kwaliteit van de uiteindelijke BCM beïnvloeden. Kwaliteit van BCM kan worden gecontroleerd door analyse van de genexpressi...

We beschrijven hier hoe-bone geconditioneerd medium (BCM) voor te bereiden en te testen zijn activiteit in vitro.

Bone Geconditioneerd Medium: Voorbereiding en Bioassay

Autologous bone grafts are widely used in oral and maxillofacial surgery, orthopedics, and traumatology. Autologous bone grafts not only replace missing ...

Het algemene doel van deze video is om te beschrijven hoe bot-geconditioneerd medium wordt bereid en de activiteit ervan in vitro wordt getest. Dit wordt bereikt door eerst botchips te verzamelen van een varkensmandibel met behulp van een botschraper. De tweede stap is om de botchips te verwarmen of te demineraliseren of niets te doen voordat ze 24 uur in cultuurmedium worden geïncubeerd.Vervolgens wordt het bot-geconditioneerde medium verzameld dat alle factoren bevat die vrijkomen uit de botchips. De laatste stap is om cellen te stimuleren met het bot-geconditioneerde medium of om een biomateriaal voor te incuberen met het bot-geconditioneerde medium en cellen erop te zaaien na de incubatieperiode. Uiteindelijk wordt kwantitatieve real-time PCR gebruikt om veranderingen in genexpressie van de cellen na behandeling te tonen.Gebruik van autologe bottransplantaten alleen of in combinatie met andere biomaterialen stimuleert botregeneratie in peri-implant botdefecten en zorgt zo voor goede langetermijnresultaten. Deze video presenteert een in vitro bio-assay, die nuttig is om de genetische respons van massale cellen op de biomoleculen in botconditie te bepalen. Bot-geconditioneerd med

bone-conditioned-medium-preparation-and-bioassay

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This video demonstrates the assessment of multiple caspase activations in bone marrow-derived macrophages through stimulation with the influenza virus. Following macrophage lysis, heat-inactivation of lysate, and centrifugation, intracellular caspases are collected for subsequent immunological analysis.

Assessment of the Activation of Multiple Caspases in Macrophages

This video demonstrates the production of oligodendrocyte-conditioned medium (OCM) from oligodendrocyte lineage cells by stressing them to enhance their molecular release into the medium. This medium, which is rich in growth factors, cytokines, and other bioactive molecules, can be added to neuron cultures to gain insight into the impact of oligodendrocytes-secreted factors on neuronal physiology and connectivity.

A Method for Generating Oligodendrocyte-Conditioned Medium

De vloerplaat is een cruciale structuur van de ontwikkeling van het ruggenmerg, waardoor dampdoorlatend signalen naar voorouders en differentiëren neuronen. We beschrijven een methode om vloer-plaat geconditioneerd medium produceren, toe te passen op verse ruggenmerg weefsel, en de consequenties daarvan op de eiwitten van belang door biochemie.

Cultuur van Geïsoleerde Vloerplaat Tissue en productie van geconditioneerd medium om functionele eigenschappen van Floor-plaat uitgebracht Signalen Assess

Dit manuscript beschrijft een ex vivo modelsysteem bestaande uit orgaan-geconditioneerde media, afgeleid van de lymfknoop, bot, long en hersenen van muizen. Dit modelsysteem kan worden gebruikt om op orgaan afgeleidde oplosbare factoren te identificeren en te bestuderen en hun effecten op de orgaantropisme en metastatisch gedrag van kankercellen.

Genereren van Organ-geconditioneerde media en toepassingen voor het bestuderen van Organ-specifieke invloeden op Borstkanker Gemetastaseerde Behavior

Het aantal nieuwe biomaterialen ontworpen voor het herstellen van grote bot laesies groeit voortdurend met als doel het verbeteren bot genezing en het overwinnen van de complicaties geassocieerd met bot transplantatie. Hier presenteren we een multidisciplinaire strategie voor preklinische biocompatibiliteit testen van biomaterialen voor bot reparatie.

Biologische verenigbaarheid profiel op biomaterialen voor bot regeneratie

Dit protocol presenteert een radioactief gelabelde aminozuuropnametest, die nuttig is voor het evalueren van aminozuurconsumptie in primaire cellen of in geïsoleerde botten.

Evaluatie van aminozuurconsumptie in gekweekte botcellen en geïsoleerde botschachten

Real-time cel metabole flux assay meet het zuurstofverbruik en de extracellulaire verzuringssnelheid, die overeenkomt met mitochondriale en glycolytische adenosinetrifosfaatproductie, met behulp van pH- en zuurstofsensoren. Het manuscript legt een methode uit om de energiestatus van osteoblasten en de karakterisering en interpretatie van de cellulaire bio-energetische status te begrijpen.

Real-time cell metabolic flux analyzer gebruiken om osteoblast bio-energetica te monitoren

Dit protocol beschrijft een uitgebreide methode voor het beoordelen van caspase-activering (caspase-1, caspase-3, caspase-7, caspase-8, caspase-9 en caspase-11) in reactie op zowel in vitro als in vivo (bij muizen) modellen van infectie, steriele beledigingen en kanker om de initiatie van celdoodroutes te bepalen, zoals pyroptose, apoptose, necroptose en PANoptose.

Evaluatie van Caspase-activering om aangeboren immuunceldood te beoordelen

We presenteren een tweestappenprotocol voor hoogwaardige mitochondrische isolatie dat compatibel is met eiwitontdekking en kwantificering op proteoomschaal. Ons protocol vereist geen genetische manipulatie en is dus geschikt voor het bestuderen van mitochondriën uit primaire cellen en weefsels.

Tweestaps tagvrije isolatie van mitochondriën voor verbeterde eiwitontdekking en kwantificering

Deze video beschrijft een methode voor het zuiveren van Wolbachia pipientis van een Anopheles gambiae cellijn en vervolgens het kweken van de endosymbiont in cel-vrij medium. Een test voor de levensvatbaarheid van de bacterie is aangetoond.

Behoud van Wolbachia in Cell-vrij medium

Leer hoe bot-geconditioneerd medium wordt bereid uit varkensmandibulachips en getest in vitro. Deze methode analyseert genexpressieveranderingen in cellen en helpt onderzoekers bij het bestuderen van botbiologie en weefselengineering.

Bone Geconditioneerd Medium: Voorbereiding en Bioassay

Meer video's verkennen