Immunostimulerende Agent evaluatie: Lymfoïde weefsel extractie en injectie Route-afhankelijke dendritische cel activeren
16 september 2018
Experimentele procedures voor de verdere winning van lymfatische weefsels voor het testen van lymfoïde dendritische cel activatie worden beschreven na behandeling van een immuniteitsverhoging nanomateriaal.
Het algemene doel van deze procedure is om de unieke techniek die nodig is bij het isoleren van mediastinale lymfeklier van muizen vertrouwd te maken. De operatie werd uitgevoerd na het injecteren van immunostimulant materiaal op zes verschillende routes bij muizen. In deze studie gebruikten we een nieuwe klasse van materiaalvormende nano-sized structuren.
Oppervlakteactieve stoffen bestaan uit hydrofiele kopgroep en hydrofobe staart. Die vormen bolvormige micelle of andere secundaire structuur als gevolg van microfaag scheiding. We gebruikten deze eigenschap om een bio macromolecule dat is DNA.
DNA amphiphile, hier getoond, als regelmatige nucleotiden zoals A, C, G, T, heeft hydrofiele blokken, terwijl lipide gemodificeerde neuro-cel nucleobases fungeren als de hydrofobe eenheden. De gemodificeerde oligo werd gesynthetiseerd door DNA synthesizer in grootschalige octogrammen. In equi-media vormen de amphifiele lipide NC's spontaan nano-sferische micelles.
Wanneer micelle wordt gevormd, blijft het DNA enkelstrengs als een lege drager met een diameter van ongeveer 10 nanometer. Om de drager uit te rusten met immuun-stimulerend middel, is het eenvoudige kwestie van het uitbreiden van de DNA-sequentie met tol-achtige receptor negen adjuvans namelijk eCpG. Lipide DNA en eCpG basis hier daarom wordt de buitenoppervlakte van micelle afgebroken met CpG opeenvolging.
We noemen dit immuunstimulerende Nano deeltje dan als het INP. Om de juiste manier van INP's voor immuunrespons te bepalen, injecteerden we INP's naar muizen in 64 injectieroutes en bijgevolg werd een goed lymfeklierweefsel geanalyseerd. Voor meer gedetailleerde injectie instructie vindt u een JOB artikel gepubliceerd door Charles River in 2012.
Het belangrijkste voordeel van deze video is visueel laten zien hoe mediastinale lymfeklier te verkrijgen. De video toont expliciet de locatie van mediastinale lymfeklier die veel mensen moeilijk vinden bij het isoleren van de organen. Alle experimenten werden uitgevoerd volgens de richtlijnen van de Institutional Animal Care and Use Committee in het Shanghai Public Health Clinical Center, of University of Ulsan College of Medicine.
Dit deel toont de specifieke locatie van organen of weefsels, die cruciaal zijn voor immunologische analyse. Milt en twee lymfeklieren worden geïsoleerd. Allereerst werden muizen opgeofferd door de inademing van kooldioxide euthanasie en alle inspanningen werden gedaan om het lijden te minimaliseren als gevolg van de begeleiding van Institutional Animal Care and Use Committee.
Laten we vanaf nu de organen vinden en isoleren. Bevestig eerst de muis goed op het bedieningsbureau met vier pinnen op de palm van de muis. Steriliseer het dissectiegebied met alcohol.
Ontleden de buitenste dekking van de onderkant van de muis buik met een grote sized schaar. Gebruik tangen om de beide zijden van de bevestiging te openen en te repareren met pinnen op de operatietafel. De locatie van inguinale lymfeklier wordt blootgesteld door het vinden van de combinatie van het vat naar beneden in de richting van het linkerbeen.
De vorm van het vat ziet eruit als gekantelde alfabet letter Y.Ontdek de laag met de tangen en trek het uit de huid. Snijd het buikvlies met een kleinere schaar om inwendige organen bloot te leggen. Verplaats de darm naar rechts met behulp van tangen wikkel dan in de vorm van milt, die laten zien aan de linkerkant, linkerbovenzijde van de buik.
Extra aandacht is vereist tijdens de procedure, omdat milt is gemakkelijk te verstoren. Tot slot het belangrijkste punt van deze video: het oogsten van mediastinale lymfeklier. Het is gelegen onder de bovenkant van de long, die moeilijk te zien is vanwege de kleine omvang en enigszins verborgen locatie.
Voorzichtig bloot het gebied met behulp van kleine schaar en tangen. Snijd beide zijden van de ribben en het middenrif ook. Knip de afgesneden ribben boven de borst.
Tijdens de procedure voorkomen dat schadelijke hart en bloedvaten, omdat het de site zou kunnen verblinden, het vinden van de doorschijnende mediastinale lymfeklier. Als per ongeluk het bloedvat barstte, veeg dan voorzichtig het bloed met gaas uit. Pak de linkerkant van de long en draai het zachtjes naar de andere kant om onder de long te zien.
Trek de mediastinale lymfeklier op met tangen. Na het oogsten van de mediastinale lymfeklier, zorg ervoor dat perfect verwijderen van al het vet en bloed rond de lymfeklier, omdat ongewenst weefsel kan de analyse beïnvloeden. Tot slot, alle geïsoleerde organen op een petrischaal gevuld met media.
Totaal 0.1 keer 10 tot de zesde cellen werden geanalyseerd op deze stroom cytometrie. Op basis van kracht getter en grootte getter leukocyte bevolking werd gated en dat cellen werden uitgesloten door donkere vlekken. 24 uur na inp-injectie door 64 injectieroutes werden milt, inguinale lymfeklier en mediastinale lymfeklier geoogst en geanalyseerd dc-activering door stroomcytometrie.
Gebaseerd op de strategie van flow cytometrie DC populatie werd gedefinieerd als CD11C positieve en afstamming negatieve cellen in de live leukocyte. Met name de intranasale injectie van INP bevorderde een aanzienlijke toename van de CD40, 80, 86 expressie in de mediastinale lymfeklier in vergelijking met PBS voor de controle. Daarom suggereerde deze gegevens dat intranasale injectie van INP kan worden gebruikt als slijmvlies adjuvans voor verbetering van de immuniteit in de longen.
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Overzicht
Dit artikel beschrijft een procedure voor het isoleren van mediastinale lymfeklieren van muizen na de injectie van een immunostimulerend nanomateriaal. De techniek richt zich op de extractie van lymfatisch weefsel om de activering van dendritische cellen in het lymfe te beoordelen.
Belangrijke Studiecomponenten
Wetenschapsgebied
- Neurowetenschappen
- Immunologie
- Nanotechnologie
Achtergrond
- Het begrijpen van de activering van dendritische cellen in het lymfe is cruciaal voor immunologisch onderzoek.
- Immunostimulerende materialen kunnen immuunresponsen versterken.
- Nano-gestructureerde materialen hebben unieke eigenschappen die in biologische toepassingen kunnen worden gebruikt.
- Isolatietechnieken zijn essentieel voor het bestuderen van specifieke immuuncellen.
Doel van het Onderzoek
- Om onderzoekers vertrouwd te maken met de techniek van het isoleren van mediastinale lymfeklieren.
- Om de effecten van een nieuwe klasse van immunostimulerend nanomateriaal te evalueren.
- Om de activering van dendritische cellen in het lymfe na de behandeling te onderzoeken.
Gebruikte Methoden
- Injectie van immunostimulerend materiaal via zes verschillende routes bij muizen.
- Isolatie van mediastinale lymfeklieren met behulp van specifieke chirurgische technieken.
- Gebruik van oppervlakteactieve stoffen om nano-gestructureerde materialen te vormen.
- Toepassing van DNA als een bio macromolecuul in het onderzoek.
Belangrijkste Resultaten
- Succesvolle isolatie van lymfatisch weefsel van muizen.
- Activering van dendritische cellen in het lymfe waargenomen na de behandeling.
- Aantoon van de effectiviteit van het immunostimulerende nanomateriaal.
- Inzichten in de rol van nano-gestructureerde materialen in immuunresponsen.
Conclusies
- De techniek voor het isoleren van mediastinale lymfeklieren is effectief en reproduceerbaar.
- Immunostimulerende nanomaterialen kunnen een significant effect hebben op de activering van immuuncellen.
- Verder onderzoek is gerechtvaardigd om het volledige potentieel van deze materialen in de immunologie te onderzoeken.
Veelgestelde Vragen
Executive Industry Relevance
Precise evaluation of immunostimulatory agents requires robust methods for extracting and analyzing lymphoid tissues to assess dendritic cell activation across administration routes. This workflow enables biopharma teams to compare immune activation profiles of novel nanoparticle-based agents, supporting predictive confidence in early immunotherapy and vaccine discovery. The approach directly informs route-of-administration decisions and portfolio triage for immunomodulatory candidates.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of immune activation mechanisms by quantifying dendritic cell responses in lymphoid tissues.
- Supports biological de-risking by comparing activation signatures across multiple administration routes.
- Facilitates functional target validation for immunostimulatory nanoparticle candidates.
Screening & Assay Development
- Provides standardized tissue extraction and flow cytometry protocols for reproducible immune cell analysis.
- Delivers quantitative readouts of dendritic cell activation markers (CD40, CD80, CD86) for assay development.
- Enables screening of administration routes to optimize immunogenicity profiles.
Translational & Preclinical Research
- Aligns immune activation data with route-dependent delivery strategies for translational vaccine and immunotherapy research.
- Supports continuity from discovery through preclinical validation by enabling direct tissue-level immune monitoring.
- Informs risk-adjusted advancement of candidates with favorable activation and safety profiles.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into the immunotherapy discovery continuum from early target validation through preclinical candidate selection, enabling direct comparison of immune activation across administration routes.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing on immunostimulant mechanism and tissue-specific activation.
- Screening: Provides reproducible, quantitative flow cytometry outputs for cross-route comparison.
- Analytics: Delivers marker-based dendritic cell activation data to inform candidate ranking.
- Translational Research: Connects route-dependent immune activation to preclinical delivery strategies.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable tissue extraction and analysis workflow for nanoparticle immunostimulant evaluation.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in immunostimulant mechanism and route selection.
- Operational Value: Standardizes tissue extraction and flow cytometry for reproducible immune profiling.
- Strategic Value: Enables informed go/no-go decisions for immunomodulatory candidates based on quantitative immune activation.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of candidates with optimal activation and delivery profiles.
Implementation Considerations
- Requires expertise in murine dissection and lymphoid tissue extraction, especially for mediastinal lymph nodes.
- Needs access to flow cytometry instrumentation and analytical infrastructure for immune cell profiling.
- Demands cross-team standardization of tissue handling and gating strategies for reproducibility.
- Adaptation may be needed for different animal models or tissue targets.
- Careful tissue preparation is critical to avoid contamination and ensure accurate immune cell analysis.
