Name: 3D-visualisatie van retinale vasculaire pericyten bij muizen door immunokleuring (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 22 s
Description: Leer 3D-visualisatie van retinale pericyten bij muizen door immunokleuring en weefselopheldering. Deze methode reduceert achtergrondsignalen en verbetert de ruimtelijke analyse van vaatgezondheid.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Visualisatie van retinale pericyten met behulp van weefselopruiming en fluorescerende labeling

<ol><li>Dreisig, K., Blixt, F. W., Warfvinge, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+cryo-sections%2C+whole-mounts%2C+and+hypotonic+isolated+vasculature+preparations+for+immunohistochemical+visualization+of+microvascular+pericytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Retinal cryo-sections, whole-mounts, and hypotonic isolated vasculature preparations for immunohistochemical visualization of microvascular pericytes.</a> J Vis Exp. (140), e57733(2018).</li>
<li>Tual-Chalot, S., Allinson, K. R., Fruttiger, M., Arthur, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+mount+immunofluorescent+staining+of+the+neonatal+mouse+retina+to+investigate+angiogenesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Whole mount immunofluorescent staining of the neonatal mouse retina to investigate angiogenesis in vivo.</a> J Vis Exp. (77), e50546(2013).</li>
<li>Park, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plastic+roles+of+pericytes+in+the+blood-retinal+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Plastic roles of pericytes in the blood-retinal barrier.</a> Nat Commun. 8, 15296(2017).</li>
<li>Hughes, S., Chan-Ling, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+smooth+muscle+cell+and+pericyte+differentiation+in+the+rat+retina+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Characterization of smooth muscle cell and pericyte differentiation in the rat retina in vivo.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 45 (8), 2795-2806 (2004).</li>
<li>Puro, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinovascular+physiology+and+pathophysiology%3A+New+experimental+approach%2Fnew+insights%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinovascular physiology and pathophysiology: New experimental approach/new insights.</a> Prog Retin Eye Res. 31 (3), 258-270 (2012).</li>
<li>Hutter-Schmid, B., Humpel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-derived+growth+factor+receptor-beta+is+differentially+regulated+in+primary+mouse+pericytes+and+brain+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Neurovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Platelet-derived growth factor receptor-beta is differentially regulated in primary mouse pericytes and brain slices.</a> Curr Neurovasc Res. 13 (2), 127-134 (2016).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demonstrating+hairy+and+glabrous+skin+innervation+in+a+3d+pattern+using+multiple+fluorescent+staining+and+tissue+clearing+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Demonstrating hairy and glabrous skin innervation in a 3d pattern using multiple fluorescent staining and tissue clearing approaches.</a> J Vis Exp. (183), e63807(2022).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+calcitonin+gene-related+peptide+immunoreactive+innervation+of+the+rat+cranial+dura+mater+with+immunofluorescence+and+neural+tracing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Visualizing the calcitonin gene-related peptide immunoreactive innervation of the rat cranial dura mater with immunofluorescence and neural tracing.</a> J Vis Exp. (167), e61742(2021).</li>
<li>Batista, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normative+mice+retinal+thickness%3A+16-month+longitudinal+characterization+of+wild-type+mice+and+changes+in+a+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Normative mice retinal thickness: 16-month longitudinal characterization of wild-type mice and changes in a model of Alzheimer's disease.</a> Front Aging Neurosci. 15, 1161847(2023).</li>
<li>Huang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericyte-endothelial+interactions+in+the+retinal+microvasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Pericyte-endothelial interactions in the retinal microvasculature.</a> Int J Mol Sci. 21 (19), 7413(2020).</li>
<li>Dong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-mediated+delivery+of+an+anti-angiogenic+peptide+inhibits+pathological+retinal+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Exosome-mediated delivery of an anti-angiogenic peptide inhibits pathological retinal angiogenesis.</a> Theranostics. 11 (11), 5107-5126 (2021).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retro-orbital+injection+of+fitc-dextran+is+an+effective+and+economical+method+for+observing+mouse+retinal+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Retro-orbital injection of fitc-dextran is an effective and economical method for observing mouse retinal vessels.</a> Mol Vis. 17, 3566-3573 (2011).</li>
<li>Riew, T. R., Jin, X., Kim, S., Kim, H. L., Lee, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+dynamics+of+cells+expressing+ng2+and+platelet-derived+growth+factor+receptor-%CE%B2+in+the+fibrotic+scar+formation+after+3-nitropropionic+acid-induced+acute+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Temporal dynamics of cells expressing ng2 and platelet-derived growth factor receptor-β in the fibrotic scar formation after 3-nitropropionic acid-induced acute brain injury.</a> Cell Tissue Res. 385 (3), 539-555 (2021).</li>
<li>Susaki, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+cubic+protocols+for+whole-brain+and+whole-body+clearing+and+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Advanced cubic protocols for whole-brain and whole-body clearing and imaging.</a> Nat Protoc. 10 (11), 1709-1727 (2015).</li>
<li>Liang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cubic+protocol+visualizes+protein+expression+at+single+cell+resolution+in+whole+mount+skin+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Cubic protocol visualizes protein expression at single cell resolution in whole mount skin preparations.</a> J Vis Exp. (114), e54401(2016).</li>
<li>Burns, S. A., Elsner, A. E., Gast, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Imaging the retinal vasculature.</a> Annu Rev Vis Sci. 7, 129-153 (2021).</li>
<li>Tomer, R., Ye, L., Hsueh, B., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+clarity+for+rapid+and+high-resolution+imaging+of+intact+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Advanced clarity for rapid and high-resolution imaging of intact tissues.</a> Nat Protoc. 9 (7), 1682-1697 (2014).</li>
<li>Cai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Panoptic+imaging+of+transparent+mice+reveals+whole-body+neuronal+projections+and+skull-meninges+connections%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Panoptic imaging of transparent mice reveals whole-body neuronal projections and skull-meninges connections.</a> Nat Neurosci. 22 (2), 317-327 (2019).</li>
<li>Richardson, D. S., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clarifying+tissue+clearing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Clarifying tissue clearing.</a> Cell. 162 (2), 246-257 (2015).</li>
<li>Alarcon-Martinez, L., Yemisci, M., Dalkara, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericyte+morphology+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Histol+Histopathol%22%5BJournal%5D)">Pericyte morphology and function.</a> Histol Histopathol. 36 (6), 633-643 (2021).</li>
<li>Dessalles, C. A., Babataheri, A., Barakat, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericyte+mechanics+and+mechanobiology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Pericyte mechanics and mechanobiology.</a> J Cell Sci. 134 (6), jcs240226(2021).</li>
<li>Alarcon-Martinez, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurovascular+dysfunction+in+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Neurovascular dysfunction in glaucoma.</a> Prog Retin Eye Res. 97, 101217(2023).</li>
<li>Uemura, M. T., Maki, T., Ihara, M., Lee, V. M. Y., Trojanowski, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+microvascular+pericytes+in+vascular+cognitive+impairment+and+dementia%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Brain microvascular pericytes in vascular cognitive impairment and dementia.</a> Front Aging Neurosci. 12, 80(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4',6-diamidino-2-fenylindole (DAPI)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3571</td><td>Bescherm tegen licht</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 donkey anti-goat IgG (H+L)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11055</td><td>Bescherm tegen licht</td></tr><tr><td>C57BL/6 muis</td><td>Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.</td><td>SCXK (Jing) 2021-0006</td><td></td></tr><tr><td>Confocal beeldvormingssysteem</td><td>Olympus</td><td>FV1200</td><td></td></tr><tr><td>Geit anti-PDGFR-β</td><td>Research and Development</td><td>AF1042</td><td>25 µg</td></tr><tr><td>Imaris software</td><td>Oxford Instruments</td><td>v.9.0.1</td><td></td></tr><tr><td>Lycopersicon esculentum(Tomaatlecticine, DyLight594)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>L32471</td><td>1 mg</td></tr><tr><td>Microcentrifugebuisje</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td>1,5 mL</td></tr><tr><td>Normaal ezelsserum</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>017-000-121</td><td>10 mL</td></tr><tr><td>Panoramisch weefselsnijder</td><td>Olympus</td><td>VS120-S6-W</td><td></td></tr><tr><td>Photoshop en Illustrator</td><td>Adobe</td><td>CS6</td><td></td></tr><tr><td>RapiClear 1.52 Oplossing</td><td>SunJin Lab</td><td>RC152001</td><td>10 mL</td></tr><tr><td>Zes-well plaat</td><td>Costar</td><td>3335</td><td></td></tr><tr><td>Springschaar</td><td>Fine Science Tools</td><td>15003-08</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus microscoopglas</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4951PLUS-001</td><td>25 mm x 75 mm x 1 mm</td></tr></tbody></table>

3d-visualisatie van retinale vasculaire pericyten bij muizen door immunokleuring 

3D Visualization of Retinal Vascular Pericytes in Mice by Immunostaining

3D-visualisatie van retinale vasculaire pericyten bij muizen door immunokleuring 

Retinal pericytes are essential for vascular development and stability of the retina, playing a key role in maintaining the integrity of the retinal ...

3d-visualization-retinal-vascular-pericytes-mice

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemie

Source: Wang, Z., et al. Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina. J. Vis. Exp. (2021).This video demonstrates a technique for in vivo retinal imaging using two-photon microscopy. Anesthetized mice are prepared for imaging by securing their heads, Applying eye lubricant, and placing a coverslip over the eye. Retinal ganglion cells (RGCs) expressing fluorescent proteins are first visualized using epifluorescence for alignment. Finally, two-photon imaging is employed,...

Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina

De neonatale muizen netvlies biedt een goed gekarakteriseerd fysiologisch model van angiogenese, die onderzoeken van de rol van de verschillende genen of medicijnen die angiogenese moduleren in een...

Hele Mount immunofluorescentiekleuring van de Neonatale Mouse Retina naar Angiogenese Onderzoek<em&gt; In vivo</em

Intravitale microscopie kan bij dieren worden gebruikt om retinale vaatdiameters, bloedstroomsnelheden en totale retinale bloedstroom te visualiseren en te meten.

Intravitale Video Microscopie Metingen van retinale bloedstroom in Muizen

Het knaagdier netvlies is lang erkend als een toegankelijke venster naar de hersenen. In dit technisch document bieden we een protocol dat het muismodel van zuurstof geïnduceerde retinopathie van de mechanismen die leiden tot het falen van vasculaire regeneratie binnen het centrale zenuwstelsel na ischemische schade te bestuderen in dienst heeft. Het beschreven systeem kan ook worden ingezet om strategieën te ontwikkelen om hergroei van functionele bloedvaten te bevorderen binnen het netvlies...

Beoordeling van de Vasculaire Regeneratie in het CZS met de muis Retina

We tonen drie verschillende weefsel voorbereiding technieken voor immunohistochemische visualisatie van rat retinale microvasculaire pericytes, dat wil zeggen, cryo-secties, geheel-mounts en hypotone isolatie van de vasculaire netwerk.

Netvlies Cryo-secties, geheel-Mounts en hypotone geïsoleerde therapieën voorbereidingen voor immunohistochemische visualisatie van microvasculaire Pericytes

In vivo beeldvorming is een krachtig hulpmiddel voor de studie van biologie in gezondheid en ziekte. Dit protocol beschrijft transpupillaire beeldvorming van het netvlies van de muis met een standaard microscoop met twee fotonen. Het demonstreert ook verschillende in vivoimaging-methoden om fluorescerend meerdere cellulaire cohorten van het netvlies te labelen.

Transpupillaire twee-fotonen in vivo beeldvorming van het netvlies van de muis

Dit protocol beschrijft een gedetailleerde methode voor de bereiding en immunofluorescentiekleuring van retinale flat mounts en analyse van muizen. Het gebruik van fluoresceïne fundusangiografie (FFA) voor muizenpups en beeldverwerking worden ook in detail beschreven.

Monitoring van dynamische groei van retinale vaten in zuurstof-geïnduceerde retinopathie muismodel

Dit artikel beschrijft een gevestigde en reproduceerbare lectinevlekkentest voor de gehele retinale preparaten van mount en de protocollen die nodig zijn voor de kwantitatieve meting van vasculaire parameters die vaak worden gewijzigd in proliferatieve en niet-proliferatieve retinopathieën.

Kwantificering van vasculaire parameters in whole mount retinas van muizen met niet-proliferatieve en proliferatieve retinopathieën

Het retinale vaatstelsel van muizen is bijzonder interessant voor het begrijpen van de mechanismen van vasculaire patroonvorming. Dit protocol meet automatisch de diameter van de retinale vaten van muizen op basis van fluorescerende angiografie-fundusbeelden op een vaste afstand van de optische schijf.

Het meten van de diameter van het netvliesvat van fluorescerende angiografiebeelden van muizen

Er werd een beschermingstest ontwikkeld om de veerkracht van het netvlies tegen overlijden door diabetes/diabetische retinopathie-gerelateerde beledigingen zoals oxidatieve stress en cytokines te controleren.

Een test om bescherming van het netvlies te detecteren tegen diabetesgerelateerde sterfte bij muizen

Dit manuscript beschrijft een gedetailleerd protocol voor het isoleren van retinale gliacellen Müller uit muizenogen. Het protocol begint met enucleatie en dissectie van muizenogen, gevolgd door isolatie, zaaien en kweken van Müller-cellen.

Isolatie van primaire müllercellen van de retinale glia van muizen

Leer 3D-visualisatie van retinale pericyten bij muizen door immunokleuring en weefselopheldering. Deze methode reduceert achtergrondsignalen en verbetert de ruimtelijke analyse van vaatgezondheid.

3D-visualisatie van retinale vasculaire pericyten bij muizen door immunokleuring

Meer video's verkennen