Statyczna mikroskopia sił atomowych w celu wizualizacji i scharakteryzowania złożonych nukleosomów
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 5:09 min. • July 8th, 2025
Nukleosomy, podstawowa powtarzająca się jednostka chromatyny eukariotycznej, składają się ze zwojów DNA owiniętych wokół rdzenia białek histonowych.
Aby uwidocznić złożone nukleosomy za pomocą statycznej mikroskopii sił atomowych, AFM, zacznij od cienkiego paska miki, funkcjonalizowanego w celu odtworzenia powierzchni naładowanej dodatnio. Pokrój pasek na małe kwadraty. Odpipetować zmontowaną zawiesinę nukleosomów.
Ujemnie naładowany DNA w nukleosomie wiąże się z dodatnio naładowaną grupą funkcjonalizowanego paska miki poprzez oddziaływania elektrostatyczne. Przemyć buforem, aby zapobiec przepełnieniu nukleosomów.
Zamocuj pasek miki na dysku podtrzymującym próbkę. Zamontuj go na stoliku instrumentalnym AFM.
Przymocuj uchwyt sondy do głowicy optycznej przyrządu. Uchwyt zawiera wstępnie zamontowany wspornik AFM z końcówką na jego wierzchołku.
Ustaw wiązkę laserową na tylnym wsporniku, aby uzyskać dokładny pomiar ugięcia. Umieść końcówkę w bezpośrednim kontakcie z powierzchnią zawierającą nukleosomy.
Podczas obrazowania w trybie kontaktowym, gdy końcówka wspornika skanuje powierzchnię nukleosomu, siły odpychające powstają w wyniku interakcji między atomami końcówki a próbką. Powoduje
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych