Eksperymentalny model zapalenia wsierdzia gronkowca złocistego opornego na metycylinę (MRSA) u szczura

Ogólnym celem tej procedury jest ustalenie eksperymentalnego modelu infekcyjnego zapalenia wsierdzia u szczurów. Osiąga się to poprzez pierwszy posiew złocistego i przygotowanie cewników chirurgicznych do infekcji. Następnie przygotowuje się obszar operacyjny i zwierzę jest znieczulane.

Po znieczuleniu zwierzęcia wprowadza się cewnik przez prawą tętnicę szyjną w kierunku serca. Ostatnim krokiem jest zakażenie zwierząt złocistym złocistym poprzez wstrzyknięcie żyły ogonowej. Ostatecznie tkanki docelowe są preparowane i przygotowywane do hodowli ilościowej.

Główną przewagą tej techniki nad istniejącymi metodami, takimi jak model szybkiego zapalenia wsierdzia, jest to, że model czerwonego zapalenia wsierdzia może być używany z systemem obrazowania in vivo. Ivus. Metoda ta może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie patogenezy jamy ustnej, takie jak zjadliwość i skuteczność środka przeciwdrobnoustrojowego. Ogólnie rzecz biorąc, osoby nowe w tej technice będą walczyć, ponieważ procedura chirurgiczna jest trudna.

Najpierw zaszczepij pętlę pełną kultury M SSA z zamrożonego stada do przypadku podróży krwi owcy. Płytka ślimakowa sojowa inkubuje kulturę przez noc w temperaturze 37 stopni Celsjusza po upewnieniu się, że nie ma zanieczyszczenia. Wybierz jedną kolonię z talerza i użyj jej do zaszczepienia pięciu mililitrów bulionu sojowego w 15-mililitrowej tubce z zatrzaskiem.

Inkubować inokulum w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez noc w inkubatorze z wytrząsaniem. Ustaw na 200 obr./min, aby najpierw przygotować cewniki. Przytnij rurki polietylenowe do długości 10 centymetrów i sterylizuj cewniki w roztworze dezynfekującym cex przez 30 minut.

Następnie stopić jeden koniec wysterylizowanej rurki, naciskając końcówkę podgrzanymi sterylnymi kleszczami, aby utworzyć cewnik, który przejdzie z prawej tętnicy szyjnej do lewej komory i spowoduje uszkodzenie wsierdzia, gdy serce bije. Następnie znieczulij szczura, umieszczając go w komorze zawierającej mieszaninę tlenu fluoru jeden do jednego, aż do działania środka znieczulającego. Potwierdź znieczulenie, sprawdzając, czy mięśnie są rozluźnione i czy nie ma odruchów pedałowania.

I utrzymuj stan znieczulenia podczas operacji za pomocą stożka nosowego, który jest połączony z mieszaniną gazów. Oczyść obszar operacyjny za pomocą Betadine i 70% etanolu przy użyciu sterylnej techniki przez cały czas trwania operacji. Umieść szczura w pozycji grzbietowej i wykonaj pionowe nacięcie przez warstwę skóry szyi nad mostkiem, stosując rozwarstwienie.

Oddziel powięź, aby odsłonić prawą tętnicę szyjną. Prawa tętnica szyjna znajduje się nieco na prawo od linii środkowej nad obojczykami. Ostrożnie wyciągnij tętnicę z jamy szyi i umieść dwa 10-centymetrowe szwy jedwabne pod tętnicą, aby związać ją na odsłoniętym końcu głowowym.

Następnie umieść klips na tętnicy, aby zapobiec krwawieniu. Zrób mały otwór w górnej części tętnicy za pomocą wprowadzacza cewnika za pomocą kleszczy. Przełóż nieuszczelniony koniec cewnika przez otwór w tętnicy.

Zdejmij zacisk i wepchnij cewnik w dół w kierunku serca. Dopóki opór nie zostanie prawidłowo włożony, cewnik powinien sięgać od czterech do pięciu centymetrów w głąb tętnicy i powinien pulsować wraz z biciem serca szczura. Po umieszczeniu cewnika na miejscu zawiąż luźny szew wokół rozpieszczonego końca tętnicy i zabezpiecz cewnik na miejscu.

Za pomocą jedwabnego szwu odetnij nadmiar szwu i końcówek cewnika, a następnie wsuń końce pod skórę szyi. Zamknij skórę klipsami do skóry. Umieść szczura w czystej klatce i trzymaj go w ciepłym miejscu, aż wyzdrowieje ze znieczulenia.

Zapewnij mu jedzenie i wodę oraz często sprawdzaj szczura, zarówno w trakcie, jak i po powrocie do zdrowia. Infekcja może być wykonana od jednego do siedmiu dni po operacji, ale czas powinien pozostać spójny w eksperymentach. Oczyść ogon szczura 70% etanolem i wstrzyknij 0,5 mililitra kultury MRSA w żądanej komórce.

Policz do żyły ogonowej. Za pomocą igły o rozmiarze 27 cali należy uciskać miejsce wstrzyknięcia, aż do ustania krwawienia, zanim szczur zostanie umieszczony z powrotem w klatce. Po złożeniu w ofierze szczura przetrzyj klatkę piersiową 70% etanolem, a następnie wykonaj nacięcie w kształcie litery V w klatce piersiowej poniżej mostka.

Przetnij chrząstkę żeber po obu stronach mostka. Aby odsłonić serce, delikatnie pociągnij serce do góry i przeciśnij się przez tkankę w pobliżu aorty i wypreparuj w górę, aby uwolnić serce. Umieść serce na sterylnej szalce Petriego wyłożonej gazą o wymiarach cztery na cztery cale, a następnie wykonaj nacięcie przez wewnętrzną ścianę lewej komory i otwórz lewą komorę.

Sprawdź, czy cewnik jest prawidłowo umieszczony, a następnie wyjmij go. Zbadaj i usuń roślinność z zaworu za pomocą nożyczek i kleszczy. Należy również usunąć nerki i śledzionę, a po zważeniu i homogenizacji tkanek i wegetacji wykonać seryjne rozcieńczenia w PBS w celu hodowli ilościowej.

Pokazany tutaj jest prawidłowo umieszczony cewnik, jak wskazuje strzałka po lewej stronie. Rozciąga się w poprzek zastawki aortalnej i po lewej stronie komory serca, a wokół zastawek aortalnych widoczne są liczne roślinności, jak wskazują strzałki środkowa i prawa. Poniższa tabela zawiera przykład zjadliwości szczepu ssus w modelu zapalenia wsierdzia szczura.

Wszystkie zwierzęta poddane próbie od 10 do piątego i od 10 do szóstego. CFU rozwinęło zapalenie wsierdzia o dużej gęstości ssus w roślinach sercowych, a także w nerkach i śledzionie Po opanowaniu. Ten zabieg chirurgiczny można wykonać w ciągu 10 minut, jeśli zostanie wykonany prawidłowo.

Przystępując do tej procedury, należy pamiętać o utrzymaniu zwierzęcia w stanie oceny podczas zabiegu Po tej procedurze. Nie można wykonać metod takich jak ivus, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania, takie jak monitorowanie skuteczności środków przeciwdrobnoustrojowych w czasie rzeczywistym oraz ekspresja genów in vivo po ich opracowaniu. Technika ta może być sposobem dla badaczy w dziedzinie steporus i fikcji do zbadania jego patogennego czynnika wirulencji w infekcji wewnątrznaczyniowej.

Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak ustalić eksperymentalny model zapalenia wsierdzia u szczurów. Nie zapominaj, że praca z MRA może być bardzo niebezpieczna i podczas wykonywania tej procedury należy podjąć środki ostrożności, takie jak noszenie laboratorium, fartucha i rękawicy.