Wizualny zapis potencjału wywołanego w szczurzym modelu eksperymentalnej demielinizacji nerwu wzrokowego

Ogólnym celem poniższego eksperymentu jest monitorowanie demielinizacji nerwu wzrokowego in vivo. Osiąga się to poprzez pierwsze wszczepienie mikroelektrod przez korę wzrokową. W drugim etapie liina jest mikrowstrzykiwana do nerwu wzrokowego, co wywołuje ogniskową zmianę demielinizacji.

W ten sposób można dokonać wizualnie przywołanych potencjalnych nagrań. Ostatecznie analiza regresji wykazuje silną liniową korelację między wizualnym wywołanym potencjalnym opóźnieniem opóźnienia a głośnością. Ten film pokaże naszą technikę rejestrowania wizualnych potencjałów wywołanych przez szczury.

Korzystając z wszczepionych elektrod czaszkowych, zademonstrujemy również technikę ogniskowej demielinizacji nerwu wzrokowego za pomocą techniki mikroiniekcji. Wszystkie eksperymenty są przeprowadzane w naszym laboratorium na Wydziale Lekarskim Uniwersytetu Macquarie. Technika zostanie zademonstrowana przez Nitina Chichi, naszego doktoranta Aby rozpocząć znieczulanie dorosłego szczura w wieku powyżej 12 tygodni za pomocą dootrzewnowego wstrzyknięcia ketaminy i meine przed rozpoczęciem operacji.

Sprawdź, czy nie ma odruchów odstawienia. Bądź przygotowany na podanie 10% dawek ketaminy w razie potrzeby, aby poradzić sobie z wszelkimi odruchami, które powinny powrócić do zwierzęcia podczas operacji. Następnie należy ogolić skórę w miejscu operacji, a następnie umieścić zwierzę na poduszce grzewczej, aby zakończyć przygotowania.

Peeluj skórę jodonem powidonu, ułóż zwierzę i nałóż maść okulistyczną. Pamiętaj również, aby zachować aseptykę za pomocą sterylnych narzędzi. Aby rozpocząć operację, wykonaj podłużne nacięcie skóry na linii środkowej głowy.

Następnie oczyść tkankę łączną, aby uzyskać dobrą ekspozycję czaszki. Następnie, za pomocą mikrowiertarki ręcznej, ostrożnie umieść w otworach małe otwory na wiertła, siedem milimetrów za bgma i trzy milimetry bocznie do linii środkowej. Implant wkręca elektrody przez czaszkę i około 0,5 milimetra do kory mózgowej.

Następnie wszczepij elektrodę śrubową referencyjną na linii środkowej, trzy milimetry rostral do bgma w razie potrzeby. Nałóż cement dentystyczny, aby otoczyć i zamocować elektrody śrubowe. Na koniec zszyj skórę zamkniętą.

Elektrody można pozostawić odsłonięte, aby nie trzeba było ponownie otwierać skóry przy każdym nagraniu. Teraz szybko podaj niesteroidowy lek przeciwzapalny lub NLPZ lub opioidowy lek przeciwbólowy, zanim zwierzę wyzdrowieje ze znieczulenia. Na koniec potraktuj skórę maścią z antybiotykiem.

Umieść zwierzę w klatce regeneracyjnej z podkładką rozgrzewającą i stale je monitoruj, aż będzie w pełni zdolne do poruszania się. Następnie pozwól mu się zregenerować przez co najmniej tydzień. Przed wykonaniem nagrań VEP przygotuj zwierzę do operacji, jak opisano wcześniej, i wykonaj nacięcie skóry o długości od jednego do 1,5 centymetra powyżej oczodołu oka, jego oka za pomocą cienkich nożyczek do tęczówki.

Otwórz tkankę podskórną i uzyskaj dostęp do jamy oczodołu. Następnie pod stereoskopem otwórz torebkę spojówki i ścięgien przednich. Następnie wycofaj mięśnie zewnątrzgałkowe i gruczoły łzowe wewnątrzoczodołowe.

Aby odsłonić około trzech milimetrów nerwu wzrokowego wokół nerwu wzrokowego, użyj ostrza okulistycznego, aby otworzyć warstwy opony twardej i pajęczynówki wzdłużnie. Następnie włóż szklaną mikropipetę przymocowaną do strzykawki Hamiltona do nerwu, dwa milimetry za kulą ziemską. W ciągu 30 sekund wstrzyknij bolus lyiny z barwnikiem, aby zakończyć procedurę.

Zszyj nacięcie skóry. Zastosuj maść z antybiotykiem, aby zapobiec infekcji. Przenieś zwierzę do podkładki rozgrzewającej i monitoruj je, aż wyzdrowieje.

Po znieczuleniu zwierzęcia i przygotowaniu skóry jak poprzednio, przenieś je do ciemnego pomieszczenia. Utrzymuj temperaturę ciała w granicach pół stopnia 37 stopni Celsjusza, używając homeotematycznego systemu i sondy temperatury podczas monitorowania w ciemności. Dostosuj zwierzę na pięć do 30 minut.

Po pół godzinie rozszerz źrenice za pomocą 1% tropikalnych kropli do oczu IDE. Następnie za pomocą nożyczek i kleszczy. Otwórz skórę nad czaszką i uzyskaj dostęp do wstępnie umieszczonych elektrod śrubowych NC.

Podłącz do miernika impedancji. Następnie zmierz i utrzymuj impedancję elektrody poniżej pięciu kiloomów. Teraz połącz nad przeciwległą korą wzrokową stymulowanego oka.

Następnie włóż elektrodę igłową do ogona, aby wynurzyć ziemię. Teraz umieść skalibrowany mini stymulator Ganzfelda na skórze wokół powiek, aby poprawić izolację oczu. Następnie przeprowadź stymulację fototyczną za pomocą 100 błysków w jednym hercu z filtrem dolnoprzepustowym w jednym hercu i przepustem w górnym paśmie.

Filtruj przy 100 hercach. Po zakończeniu zszyj skórę i trzymaj zwierzę na podkładce rozgrzewającej, aby dojść do siebie po znieczuleniu. Możliwe jest powtarzanie nagrań od kilku tygodniowo do jednego co kilka tygodni.

Wstawiennictwo, ślady VEP pokazują, że występuje znaczne opóźnienie w opóźnieniu N one. Po wstrzyknięciu nerwu wzrokowego codziennie wykonywano zapisy, aby wykazać odtwarzalność. Częściowe uszkodzenia nerwu wzrokowego w wyniku demielinizacji można było zaobserwować w skrawkach tkanek wybarwionych błękitem luxal fast.

Po zmierzeniu objętości zmiany uwidoczniła się korelacja między opóźnieniem opóźnienia a wielkością zmiany. Technika ta może być stosowana do wywoływania zmian w nerwie wzrokowym i do korelacji tych zmian ze zmianami w VP, może być stosowana jako model ogniskowej demielinizacji. Ponieważ indukowana wielkość zmiany jest dość zmienna, ważne jest, aby skorelować zmiany histologicznie.