Name: Hydroliza kompleksu zasad Ni-Schiffa w warunkach odpowiednich do zachowania kwasowo-labilnych grup ochronnych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 44 s
Description: Naucz się izolować nienaturalne aminokwasy z kompleksu niklowego Schiffa przy zachowaniu kwasowo-labilnych grup ochronnych łańcucha bocznego. Metoda obejmuje łagodną hydrolizę EDTA i ochronę Fmoc, co umożliwia zastosowanie w syntezie peptydów na fazie stałej.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Finansowanie zapewnione przez Uniwersytet Slippery Rock. Chcielibyśmy podziękować T. Boronowi III (Slippery Rock University) i C. Haneyowi (University of Pennsylvania) za ich spostrzeżenia.

1. Hydroliza kompleksu Ni-Schiff-Base
<ol>
	<li>Rozpuścić 1 mmol kompleksu zasady Ni-PBP-Schiff w 40 ml N,N-dimetyloformamidu (DMF), mieszając w kolbie okrągłodennej o pojemności 250 ml w temperaturze pokojowej.</li>
	<li>Dodać 60 ml 0,2 M wodnego roztworu EDTA o pH 4,5.</li>
	<li>Za pomocą mieszadła magnetycznego i płytki mieszającej mieszaj połączony roztwór przez noc. Gdy kompleks zasad Schiffa zostanie zhydrolizowany, kolor zmieni się z głębokiej czerwieni na biel.</li>
	<li>Po zakończeniu reakcji, na co wskazuje brak czerwonego zabarwienia, przenieść reakcję do rozdzielacza o pojemności 250 ml.</li>
	<li>Dodać 50 ml dichlorometanu, zakryć rozdzielacz i wymieszać. Odcedź organiczne płyny do zlewki na odpady. Powtórz ten proces trzy razy, aby usunąć PBP i wszelkie pozostałości kompleksu zasad Ni-PBP-Schiffa. Zebrać pozostałą warstwę wodną do kolby okrągłodennej o pojemności 250 ml.</li>
</ol>
2. Ochrona hydrolizowanego aminokwasu Fmoc
<ol>
	<li>Dostosować izolowaną warstwę wodną z kroku 1.5 opisanego powyżej do pH 7 przy użyciu stałego wodorowęglanu sodu. Okresowo sprawdzaj pH za pomocą pasków testowych pH.</li>
	<li>Dodać 168 mg wodorowęglanu sodu (2,00 mmol, 2 ekwiwalenty) do roztworu i wymieszać za pomocą mieszadła magnetycznego i płytki mieszającej.</li>
	<li>Rozpuścić 337 mg estru N-hydroksysukcynimidu Fmoc (1,00 mmol, 1 ekwiwalent) w minimalnej ilości dioksanu (około 4 lub 5 ml) w fiolce o pojemności 10 ml. Przenieś ten roztwór do roztworu wodnego i mieszaj przez noc.</li>
	<li>Po pozostawieniu reakcji na wymieszanie przez noc, powstały roztwór zakwasić do pH 2 za pomocą 1 M kwasu solnego. Okresowo sprawdzaj pH za pomocą pasków testowych pH.</li>
	<li>Przenieść reakcję do rozdzielacza o pojemności 250 ml i dodać 50 ml octanu etylu. Zakryć rozdzielacz separatora, dobrze wymieszać i zebrać warstwę organiczną w kolbie Erlenmeyera o pojemności 250 ml. Powtórz ten proces jeszcze dwa razy, łącząc ekstrakty organiczne. Wysuszyć połączone ekstrakty organiczne około 3 g siarczanu magnezu.</li>
	<li>Skoncentrować połączone ekstrakty organiczne za pomocą wyparki obrotowej, aby uzyskać surowy aminokwas chroniony przez Fmoc.</li>
</ol>

<ol><li>Wang, J., Shi, T., Deng, G., Jiang, H., Liu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+Enantio-+and+Diastereoselective+Mannich+Reactions+of+Chiral+Ni%28II%29+Glycinates+with+amino+sulfones.+Efficient+asymmetric+synthesis+of+aromatic+%CE%B1%2C%CE%B2-diamino+acids%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Org.+Chem%22%5BJournal%5D)">Highly Enantio- and Diastereoselective Mannich Reactions of Chiral Ni(II) Glycinates with amino sulfones. Efficient asymmetric synthesis of aromatic α,β-diamino acids.</a> J. Org. Chem. 73 (21), 8563-8570 (2011).</li>
<li>Wang, J., Lin, D., Zhou, S., Ding, X., Soloshonok, V. A., Liu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asymmetric+synthesis+of+sterically+and+electronically+demanding+linear+%CF%89%2C-trifluoromethyl+containing+amino+acids+via+alkylation+of+chiral+equivalents+of+nucleophilic+glycine+and+alanine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Org.+Chem%22%5BJournal%5D)">Asymmetric synthesis of sterically and electronically demanding linear ω,-trifluoromethyl containing amino acids via alkylation of chiral equivalents of nucleophilic glycine and alanine.</a> J. Org. Chem. 76 (2), 684-687 (2011).</li>
<li>Wang, J., Zhou, S., Lin, D., Ding, X., Jiang, H., Liu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+diastereo-+and+enantioselective+synthesis+of+syn-%CE%B2%2C-substituted+tryptophans+via+asymmetric+Michael+addition+of+a+chiral+equivalent+of+nucleophilic+glycine+and+sulfonylindoles%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">Highly diastereo- and enantioselective synthesis of syn-β,-substituted tryptophans via asymmetric Michael addition of a chiral equivalent of nucleophilic glycine and sulfonylindoles.</a> Chem. Commun. 47 (29), 8355-8357 (2011).</li>
<li>Belokon, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+catalytic+synthesis+of+%CE%B1%2C-amino+acids+under+phase-transfer+conditions+with+a+novel+catalyst%2Fsubstrate+pair%5BTitle%5D)+AND+%22Angew.+Chem.+Int.+Ed%22%5BJournal%5D)">Highly efficient catalytic synthesis of α,-amino acids under phase-transfer conditions with a novel catalyst/substrate pair.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 40 (10), 1948-1951 (2001).</li>
<li>Zhou, S., Wang, J., Lin, D., Zhao, F., Liu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enantioselective+synthesis+of+2-substituted-tetrahydroisoquinolin-1-yl+glycine+derivatives+via+oxidative+cross-dehydrogenative+coupling+of+tertiary+amines+and+chiral+nickel%28II%29+glycinate%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Org.+Chem%22%5BJournal%5D)">Enantioselective synthesis of 2-substituted-tetrahydroisoquinolin-1-yl glycine derivatives via oxidative cross-dehydrogenative coupling of tertiary amines and chiral nickel(II) glycinate.</a> J. Org. Chem. 78 (22), 11204-11212 (2013).</li>
<li>Belokon, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+of+%CE%B1%2C-amino+acids+via+asymmetric+phase+transfer-catalyzed+alkylation+of+achiral+nickel%28II%29+complexes+of+glycine-derived+Schiff+bases%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Chem.+Soc%22%5BJournal%5D)">Synthesis of α,-amino acids via asymmetric phase transfer-catalyzed alkylation of achiral nickel(II) complexes of glycine-derived Schiff bases.</a> J. Am. Chem. Soc. 125 (42), 12860-12871 (2003).</li>
<li>Ueki, H., Ellis, T. K., Martin, C. H., Soloshonok, V. A. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ejoc.200200688/abstract">Efficient large-scale synthesis of picolinic acid-derived nickel(II) complexes of glycine.</a> Eur. J. Org. Chem. 2003 (10), 1954-1957 (2003).</li>
<li>Dener, J. M., Fantauzzi, P. P., Kshirsagar, T. A., Kelly, D. E., Wolfe, A. B. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/op010204f">Large-scale syntheses of Fmoc-protected non-proteogenic amino acids: useful building blocks for combinatorial libraries.</a> Org. Process Res. Dev. 5 (4), 445-449 (2001).</li>
<li>Cruz, L. J., Beteta, N. G., Ewenson, A., Albericio, F. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/op049917z">&#34;One-pot&#34;, preparation of N-carbamate protected amino acids via the azide.</a> Org Process Res. Dev. 8 (6), 920-924 (2004).</li>
<li>Hart, J. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHart%2C+JR+%22Ullmann%27s+Encyclopedia+of+Industrial+Chemistry%22">Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry</a>. , Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. (2000).</li>
<li>Adamson, J. G., Blaskovich, M. A., Groenevelt, H., Lajoie, G. A. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/jo00010a050">Simple and convenient synthesis of tert-butyl ethers of Fmoc-serine, Fmoc-threonine, and Fmoc-tyrosine.</a> J. Org. Chem. 56 (10), 3447-3449 (1991).</li>
<li>Seyfried, M. S., Lauber, B. S., Luedtke, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple-turnover+isotopic+labeling+of+Fmoc-+and+Boc-protected+amino+acids+with+oxygen+isotopes%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Lett%22%5BJournal%5D)">Multiple-turnover isotopic labeling of Fmoc- and Boc-protected amino acids with oxygen isotopes.</a> Org. Lett. 12 (1), 104-106 (2010).</li>
<li>Bonke, G., Vedel, L., Witt, M., Jaroszewski, J. W., Olsen, C. A., Franzyk, H. <a target="_blank" href="https://www.thieme-connect.de/DOI/DOI?10.1055/s-2008-1067171">Dimeric building blocks for solid-phase synthesis of α,-peptide-β,-peptoid chimeras.</a> Synthesis. 2008 (15), 2381-2390 (2008).</li>
</ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Opisany powyżej protokół jest przydatny ze względu na jego zdolność do ułatwiania izolacji szkieletu aminokwasowego z kompleksu zasad Ni-Schiffa w łagodnych warunkach pH, a następnie ochrony Fmoc tego wyizolowanego aminokwasu poprzez dwa krytyczne etapy. Pierwszy krok polega na wymieszaniu roztworu DMF/wody zawierającego EDTA, aby ułatwić uwalnianie aminokwasu z kompleksu. Pozostałości złożonych lub organicznych produktów ubocznych można łatwo usunąć za pomocą ekstrakcji. Drugi etap tego protokołu polega na ochronie Fmoc...

Nienaturalne aminokwasy (UAA), posiadające łańcuchy boczne różniące się od tych występujących w dwudziestu naturalnie występujących aminokwasach, znajdują zastosowanie w szerokim zakresie aplikacji. Synteza tych UAA może być jednak trudna, w zależności od struktury łańcuchów bocznych oraz stereochemii szkieletu aminokwasowego. Aktywacja wiązania C-H glicyny w kontekście kompleksu niklu z zasadą Schiffa została wykorzystana do otrzymania wielu pochodnych aminokwasów, w tym kwasów α,β-diaminowych1 oraz UAA z fluorowanymi2 lub heterocyklicznymi łańcuchami bocznymi.3
Po dodaniu nienaturalnych łańcuchów bocznych funkcjonalizowane UAA są zazwyczaj usuwane z kompleksu bazy Schiffa poprzez cofanie w kwasie solnym4, a następnie izolowane za pomocą chromatografii jonowymiennej. Chociaż protokół ten jest zazwyczaj wydajny, prowadzi do otrzymania aminokwasów, które mogą być nieodpowiednie do zastosowania w syntezie peptydów na fazie stałej (SPPS). Specyfika SPPS wymaga obecności kwasolabilnych grup ochronnych łańcucha bocznego, a silnie kwasowy charakter typowych warunków rozkładu kompleksu Ni-bazy Schiffa uniemożliwia izolację UAA z nienaruszonymi grupami ochronnymi. Z naszej wiedzy zgłoszono tylko jedną alternatywną metodę rozkładu: zastosowanie kwasu etylenodiaminotetraoctowego (EDTA) i hydrazyny w podwyższonej temperaturze,5 co samo w sobie może być nieodpowiednie dla niektórych grup ochronnych łańcucha bocznego, takich jak ftalimidy.
<img alt="Reakcja chemiczna PBP i H-Gly-OH prowadząca do powstania Ni-PBP-Gly z wykorzystaniem Ni²⁺, KOH; schemat syntezy." src="/files/ftp_upload/55677/55677fig1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rysunek 1"> 
Rysunek 1: Synteza Ni-PBP-Gly z Ni2+, PBP oraz glicynę (Gly). <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55677/55677fig1large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>
W niniejszym opracowaniu przedstawiamy metodę hydrolizy kompleksu Ni-zasady Schiffa, Ni-PBP-Gly (Rycina 1). Kompleks ten, pochodny Ni2+, glicyny oraz amidu kwasu pyridine-2-karboksylowego (2-benzoilo-fenylowego) (PBP),6 okazał się użyteczną platformą do syntezy różnych nienaturalnych aminokwasów (UAA) i jest łatwo dostępny dzięki dwuetapowej ścieżce syntetycznej.7 Synteza tego kompleksu została opisana w literaturze jako wydajna.6 Nasze wyniki opisane poniżej demonstrują przydatność warunków hydrolizy z wykorzystaniem EDTA w pH od lekko kwasowego do obojętnego, co jest odpowiednie dla UAA posiadających kwasolabilne grupy ochronne łańcuchów bocznych. Po hydrolizie otrzymany roztwór wodny można wyizolować i poddać natychmiast standardowym warunkom ochrony Fmoc, aby uzyskać aminokwas chroniony grupą Fmoc (Rycina 2).
<img alt="Schemat ścieżki syntezy chemicznej Fmoc-Gly-OH poprzez produkt pośredni Ni-PBP-Gly; chemia organiczna." src="/files/ftp_upload/55677/55677fig2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="Rycina 2"> 
Rysunek 2: Hydroliza i ochrona grup Fmoc aminokwasu wyizolowanego z Ni-PBP-Gly. Warunki reakcji: i. EDTA (12 eq), pH 4,5; ii. Przemycie octanem etylu i dostosowanie pH do 7; iii. Fmoc-OSu (1 eq), NaHCO₃3 (2 ekwiwalenty). <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55677/55677fig2large.jpg" target="_blank">Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.</a>

<table><tbody><tr><td>Ni-PBP-Gly</td><td></td><td></td><td>Zsyntetyzowany z opublikowanego protokołu</td></tr><tr><td>DMF</td><td>Fisher</td><td>D119-4</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher</td><td>S311-100</td><td></td></tr><tr><td>Dichlorometan</td><td>Acros</td><td>AC610050040</td><td></td></tr><tr><td>Wodorowęglan sodu</td><td>Fisher</td><td>S233-500</td><td></td></tr><tr><td>Fmoc-OSu</td><td>Chem-Impex</td><td>"00147"</td><td></td></tr><tr><td>Dioksan</td><td>Fisher</td><td>D111-500</td><td></td></tr><tr><td>Kwas solny</td><td>Fisher</td><td>A144-500</td><td></td></tr><tr><td>Octan etylu</td><td>Acros</td><td>AC610060040</td><td></td></tr><tr><td>Siarczan magnezu</td><td>Fisher</td><td>M65-500</td><td></td></tr><tr><td>ZEOPrep 60ECO Żel krzemionkowy</td><td>ZEOChem</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heksany</td><td>Fisher</td><td>3200250.650.443</td><td></td></tr><tr>Kolumna <td></td><td></td><td></td><td>chromatograficzna</td></tr><tr><td>Paski</td><td></td><td></td><td></td>testowe pH</tr><tr><td>Parownik</td><td></td><td></td><td></td>obrotowy</tr><tr><td>250 ml Lejek</td><td></td><td></td><td></td>separatora</tr><tr><td>250 ml Kolba</td><td></td><td></td><td></td>okrągłodenna</tr><tr><td>Mieszadło</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Płytka</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> mieszająca

hydroliza kompleksu zasad ni-schiffa w warunkach odpowiednich do zachowania kwasowo-labilnych grup ochronnych

Hydrolysis of a Ni-Schiff-Base Complex Using Conditions Suitable for Retention of Acid-labile Protecting Groups

Nienaturalne aminokwasy, aminokwasy zawierające funkcje łańcucha bocznego rzadko spotykane w naturze, są coraz częściej spotykane w syntetycznych sekwencjach peptydowych. Synteza niektórych nienaturalnych aminokwasów często obejmuje użycie prekursora składającego się z zasady Schiffa stabilizowanej kationem niklu. Nienaturalne łańcuchy boczne mogą być zainstalowane na szkielecie aminokwasowym znajdującym się w tym kompleksie zasad Schiffa. Powstały w ten sposób nienaturalny aminokwas można następnie wyizolować z tego kompleksu za pomocą hydrolizy zasady Schiffa, zwykle przez zastosowanie refluksu w silnie kwaśnym roztworze. Te wysoce kwaśne warunki mogą usuwać labilne jak kwasowość grupy ochronne łańcucha bocznego niezbędne do wykorzystania nienaturalnych aminokwasów w syntezie peptydów w fazie stałej wspomaganej mikrofalami. W niniejszej pracy przedstawiono efektywną hydrolizę, a następnie ochronę Fmoc aminokwasu wyizolowanego z kompleksu zasad Ni-Schiffa. Warunki hydrolizy przedstawione w tej pracy są odpowiednie do zachowania kwasowo-labilnych grup ochronnych łańcucha bocznego i mogą być przystosowane do różnych nienaturalnych substratów aminokwasowych.

Postawiliśmy hipotezę, że usunięcie Ni2+ z kompleksu Ni-PBP-Gly mogłoby umożliwić wydajną hydrolizę wodną zasady Schiffa bez konieczności stosowania drastycznych wartości pH. Ponieważ EDTA jest tanim i dobrze zbadanym czynnikiem chelatującym,10 założyliśmy, że dodanie EDTA do roztworu Ni-PBP-Gly ułatwi chelatowanie jonów Ni2+, promując tym samym hydrolizę kompleksu.
Aby sprawdzić nas...

Tutaj prezentujemy efektywną hydrolizę i późniejszą ochronę Fmoc aminokwasu wyizolowanego z kompleksu zasad Ni-Schiffa. Przedstawione tutaj warunki hydrolizy są odpowiednie do stosowania, gdy wymagane jest zachowanie kwasowo-labilnych grup ochronnych łańcucha bocznego. Technika ta może być dostosowana do różnych nienaturalnych substratów aminokwasowych.

Hydroliza kompleksu zasad Ni-Schiffa w warunkach odpowiednich do zachowania kwasowo-labilnych grup ochronnych

Unnatural amino acids, amino acids containing side-chain functionalities not commonly seen in nature, are increasingly found in synthetic peptide ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest wygodna izolacja nienaturalnych aminokwasów z kompleksu niklu z zasadą Schiffa, a następnie ich ochrona grupą Fmoc. Metoda ta może pomóc w odpowiedzi na kluczowe pytania w dziedzinie chemii organicznej, takie jak sposób łatwiejszej syntezy nienaturalnych aminokwasów. Główną zaletą tej techniki jest możliwość izolacji aminokwasów z kwasolabilnymi grupami ochronnymi łańcuchów bocznych z kompleksu niklu z zasadą Schiffa.Osoby rozpoczynające pracę z tą metodą mogą napotkać trudności ze względu na ograniczoną rozpuszczalność kompleksu niklu w rozpuszczalnikach organicznych. DMF jest najodpowiedniejszym rozpuszczalnikiem, ponieważ pozwala na rozpuszczenie kompleksu i jest mieszalny z wodą. Pomysł na tę metodę pojawił się u nas po konsultacji z naszym profesorem chemii nieorganicznej, dr. Boronem, na temat niklu i czynników chelatujących metale.Aby rozpocząć tę procedurę, należy dodać 40 ml DMF do kolby okrągłodennej o pojemności 250 ml. Jeden milimol kompleksu niklu z zasadą Schiffa PBB należy rozpuścić w DMF, mieszając w temperaturze pokojowej. Następnie należy dodać 60 ml 0,2 M wodnego roztworu EDTA o pH 4,5.Za pomocą mieszadła magnetycznego i mieszarki magnetycznej mieszaj roztwór przez noc. Po zakończeniu reakcji przenieś roztwór do rozdzielacza o pojemności 250 ml. Dodaj 50 ml DCM.Następnie należy zamknąć rozdzielacz i wymieszać zawartość. Odlać frakcję organiczną do zlewka na odpady. Proces dodawania DCM, mieszania i usuwania frakcji organicznej powtórzyć trzykrotnie.Następnie zebrać pozostałą warstwę wodną do kolby okrągłodennej o pojemności 250 mililitrów. Najpierw użyć stałego wodorowęglanu sodu, aby dostosować pH wyizolowanej warstwy wodnej do pH siedem. Następnie dodać 168 miligramów wodorowęglanu sodu.Mieszaj roztwór za pomocą magnetycznego mieszadła i mieszadła magnetycznego. Kluczowe jest dostosowanie pH do wartości siedem przed dodaniem dwóch ekwiwalentów wodorowęglanu sodu. Jest to istotne, ponieważ roztwór musi być lekko zasadowy, aby ułatwić ochronę grup Fmoc.W fiolce o pojemności 10 mililitrów rozpuścić 337 miligramów estru Fmoc i hydroksyjesuccinimidu w pięciu mililitrach dioksanu. Przenieść tę mieszaninę do roztworu wodnego i mieszać przez noc. Następnego dnia użyć 1 M kwasu solnego, aby zakwasić roztwór do pH 2.Po tym transferze przelać reakcję do rozdzielacza o pojemności 250 ml. Dodać 50 ml octanu etylu. Ważne jest, aby pH nie spadło poniżej 2 oraz aby ten etap został wykonany szybko.Niezastosowanie się do tego zalecenia może doprowadzić do utraty grup ochronnych łańcucha bocznego. Zamknąć rozdzielacz i dokładnie wymieszać. Następnie zebrać fazę organiczną do kolby Erlenmeyera o pojemności 250 ml.Powtórzyć proces dodawania octanu etylu, mieszania i zbierania warstwy organicznej jeszcze dwa razy, łącząc otrzymane ekstrakty organiczne. Następnie osuszyć połączone ekstrakty organiczne za pomocą około trzech gramów siarczanu magnezu. Za pomocą ewaporatora rotacyjnego odparować połączone ekstrakty organiczne do uzyskania surowego aminokwasu chronionego grupą Fmoc.W niniejszym badaniu szkielet aminokwasowy zostaje wyizolowany z kompleksu niklu z zasadą Schiffa w łagodnych warunkach pH, a następnie poddany ochronie grupą Fmoc w dwóch kluczowych etapach. W pierwszym kroku roztwór DMF i wody zawierający EDTA jest mieszany, aby ułatwić uwolnienie aminokwasu z kompleksu. Po wyizolowaniu i ekstrakcji uwolnionego aminokwasu, zostaje on poddany warunkom ochrony Fmoc, co pozwala na otrzymanie aminokwasu z ochroną Fmoc.Postęp reakcji hydrolizy śledzi się poprzez monitorowanie zmiany barwy roztworu z czerwonej na białą. Reakcje z udziałem mniej niż ośmiu ekwiwalentów EDTA wykazują pewną zmianę barwy, lecz są zawsze niepełne. Natomiast reakcje bez EDTA nie wykazują żadnej zmiany barwy.W związku z tym, aby doprowadzić reakcję do końca, wymagane jest co najmniej osiem ekwiwalentów EDTA. Następnie ocenia się wpływ pH na reakcję hydrolizy. Pomyślną hydrolizę obserwuje się w zakresie pH od 4,5 do 7,5 w temperaturze pokojowej podczas mieszania przez noc.Wykazuje to elastyczność hydrolizy EDTA. Następnie sprawdzono wykonalność tych warunków hydrolizy, wykorzystując szereg aminokwasów z różnymi grupami ochronnymi łańcucha bocznego. W każdym przypadku grupy ochronne łańcucha bocznego zostały w pełni zachowane, co potwierdzono za pomocą widma NMR protonowego.Po opanowaniu tej techniki można ją przeprowadzić w ciągu 48 godzin, pod warunkiem prawidłowego wykonania. Podczas realizacji tej procedury ważne jest przestrzeganie określonego poziomu pH opisanego w tekście. Po wykonaniu tej procedury można zastosować inne metody, takie jak hydroliza pozostałych aminokwasów z kwasolabilnymi grupami ochronnymi łańcuchów bocznych, aby odpowiedzieć na dodatkowe pytania, na przykład dotyczące użyteczności tej techniki w odniesieniu do różnych substratów.Po opracowaniu technika ta utoruje drogę badaczom w dziedzinie syntezy organicznej do badania syntezy nienaturalnych aminokwasów z kwasolabilnymi grupami ochronnymi łańcuchów bocznych. Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo mieć dobrą wiedzę na temat tego, jak izolować aminokwasy z kompleksu niklu z zasadą Schiffa PPB, stosując warunki reakcji w łagodnych zakresach pH. Należy pamiętać, że praca z rozpuszczalnikami organicznymi, w szczególności z DMF, może być niezwykle niebezpieczna, dlatego podczas wykonywania tej procedury zawsze należy przestrzegać środków ostrożności, takich jak stosowanie środków ochrony indywidualnej.

hydrolysis-ni-schiff-base-complex-using-conditions-suitable-for

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biochemia

Opisano bezpieczne i prawidłowe stosowanie odczynników z litu organicznego.

Protokół bezpiecznych reakcji litucji z użyciem odczynników litoorganicznych

Tutaj prezentujemy protokół usuwania aldehydów i reaktywnych ketonów z mieszanin za pomocą protokołu ekstrakcji ciecz-ciecz bezpośrednio za pomocą nasyconego wodorosiarczynu sodu w mieszalnym rozpuszczalniku. Ten połączony protokół jest szybki i łatwy do wykonania. Aldehyd lub keton można ponownie wyizolować przez podłoże warstwy wodnej.

Rozdzielanie aldehydów i reaktywnych ketonów z mieszanin przy użyciu protokołu ekstrakcji wodorosiarczynów

Tutaj prezentujemy protokoły syntezy nukleozydów disacharydowych metodą regioselektywnej O-glikozylacji rybonukleozydów poprzez tymczasową ochronę ich ugrupowań 2',3'-diolu za pomocą cyklicznego estru boronowego. Metoda ta ma zastosowanie do kilku niezabezpieczonych nukleozydów, takich jak adenozyna, guanozyna, cytydyna, urydyna, 5-metylurydyna i 5-fluorourydyna, aby uzyskać odpowiednie nukleozydy disacharydowe.

Regioselektywna O-glikozylacja nukleozydów poprzez tymczasową ochronę 2',3'-diolem przez ester boronowy do syntezy nukleozydów disacharydowych

Przygotowanie kompleksów modelowych SNS z kleszczami kobaltu(II) dehydrogenazy alkoholowej wątroby jest przedstawione tutaj. Kompleksy można otrzymać w reakcji prekursora liganda z CoCl2·6H2O, a następnie można je rekrystalizować, pozwalając eterowi dietylowemu powoli dyfundować do roztworu acetonitrylu zawierającego kompleks kobaltu.

Otrzymywanie kompleksów modelu cęgowego SNS kobaltu(II) dehydrogenazy alkoholowej wątroby

Tutaj opisujemy protokoły rozbijania komórek ssaków poprzez mielenie w stanie stałym w temperaturze kriogenicznej, wytwarzanie ekstraktu komórkowego z powstałego proszku komórkowego i izolowanie interesujących kompleksów białkowych poprzez wychwytywanie powinowactwa na paramagnetycznych kulkach w skali mikronowej sprzężonych z przeciwciałami.

Wychwytywanie powinowactwa do kompleksu białkowego z komórek ssaków poddanych mieleniu w kriomerze

Ten artykuł opisuje metodę badania metabolizmu komórkowego w złożonych społecznościach wielu typów komórek, wykorzystując kombinację śledzenia stabilnych izotopów, sortowania komórek w celu izolowania określonych typów komórek oraz spektrometrii mas.

Metoda pomiaru metabolizmu w posortowanych subpopulacjach złożonych zbiorowisk komórkowych za pomocą śledzenia stabilnych izotopów

Gigantyczne pęcherzyki zawierające wysoko upakowane składniki o rozmiarach mikrometrów są użytecznymi modelami komórek. Metoda wirowania emulsji typu woda w oleju jest prostym, ale potężnym narzędziem do przygotowywania gigantycznych pęcherzyków z zamkniętymi materiałami.

Otrzymywanie gigantycznych pęcherzyków otaczających mikrosfery przez odwirowanie emulsji typu woda w oleju

Opisany tutaj zmodyfikowany test na jedną hybrydę drożdży jest rozszerzeniem klasycznego testu na hybrydę drożdży (Y1H) do badania i walidacji interakcji heteromerycznego kompleksu białkowego z DNA w systemie heterologicznym dla dowolnego funkcjonalnego badania genomicznego.

Zmodyfikowany system hybrydowy drożdż-jeden do badań interakcji heteromerycznego kompleksu białkowego i DNA

Przedstawiono uproszczony protokół do przeprowadzenia obszernej charakterystyki biochemicznej i strukturalnej białka wiążącego substrat węglowodanowy ze Streptococcus pneumoniae.

Charakterystyka biochemiczna i strukturalna białka wiążącego substrat transportu węglowodanów SP0092

Toeprinting ma na celu zmierzenie zdolności transkrybowanego RNA in vitro do tworzenia kompleksów inicjujących translację z rybosomami w różnych warunkach. Protokół ten opisuje metodę odciskania palca RNA ssaków i może być stosowany do badania translacji zarówno zależnej od czapeczki, jak i sterowanej przez IRES.

Analiza odcisków palców u nóg tworzenia kompleksu inicjacji translacji na mRNA ssaków

Naucz się izolować nienaturalne aminokwasy z kompleksu niklowego Schiffa przy zachowaniu kwasowo-labilnych grup ochronnych łańcucha bocznego. Metoda obejmuje łagodną hydrolizę EDTA i ochronę Fmoc, co umożliwia zastosowanie w syntezie peptydów na fazie stałej.

Hydroliza kompleksu zasad Ni-Schiffa w warunkach odpowiednich do zachowania kwasowo-labilnych grup ochronnych

Przeglądaj więcej filmów