Akwizycja i analiza danych w audiometrii odpowiedzi wywołanej pniem mózgu u myszy

Protokół ten zawiera szczegółowe informacje o tym, jak planować, przeprowadzać i analizować reakcje słuchowe pnia mózgu wywołane kliknięciem i dźwiękiem u myszy. Główną zaletą tej techniki jest to, że pozwala na złożone i szybkie profilowanie słuchowe farmakologicznych i zmutowanych modeli myszy. Nowe informacje na temat wczesnej fazy APP i związanych z nią zmian w przetwarzaniu słuchowym u myszy i szczurów można przełożyć na ludzi.

Dlatego metoda ta ma kluczowe znaczenie w charakterystyce i fenotypowaniu chorób słuchowych, neurologicznych i słuchowych. Metoda ta jest najważniejsza dla identyfikacji dyakuzy, niedoczynności słuchowej i anaguzii. Na przykład w metabolicznym, metabolicznym, wrodzonym i aspi-met-acury ubytku słuchu związanym z wiekiem, wywołanym hałasem, a także w deficytach słuchu spowodowanych deformacjami lub wadami rozwojowymi, urazami i nowotworami.

Użytkownicy, którzy nie mają styczności z tą techniką, powinni zwrócić szczególną uwagę na prawidłowe elektrorozmieszczanie i przedeksperymentalną kalibrację systemu. Wizualna demonstracja metody ma kluczowe znaczenie dla zilustrowania znieczulenia, rejestracji ABR, procesów filtrowania ABR i zautomatyzowanych neuroterapii ABR. Zacznij od włączenia przedwzmacniacza podłączonego do mikrofonu, co najmniej pięć minut przed kalibracją, aby umożliwić zrównoważenie systemu.

Włącz oscyloskop. Następnie umieść mikrofon podłączony do przedwzmacniacza wewnątrz sześciennej kostki tłumiącej dźwięk, aby naśladować eksperymentalne mysie ucho. Następnie otwórz dostępne na rynku oprogramowanie do przetwarzania i akwizycji i zaprogramuj protokoły bodźców dla kliknięć i impulsów tonów.

Zacznij od jednostki bodźca kliknięcia, aby przeprowadzić analizę i określić progi kliknięć. Następnie następuje symetria ABR lewego i prawego ucha. A później amplitudy i opóźnienia ABR.

Następnie użyj tego samego oprogramowania, aby zweryfikować protokół stymulacji impulsów tonalnych za pomocą oprogramowania do projektowania bodźców Sig-Gen RZ. I sprawdza ustawienia bodźca w oprogramowaniu do akwizycji Bio-Sig RZ. Zaprogramuj odpowiedni zakres częstotliwości do testowania, w zależności od kwestii naukowej, i upewnij się, że zakresy częstotliwości, które mają być zastosowane, spełniają możliwości techniczne głośnika.

W celu uśrednienia ustaw liczbę sekwencyjnych bodźców akustycznych, na przykład kliknięć lub wybuchów tonów, na 300 razy, z częstotliwością 20 na sekundę; średni czas trwania 25 milisekund i współczynnik wzmocnienia przedwzmacniacza, 20 razy. Następnie sprawdź odpowiednią częstotliwość próbkowania dla akwizycji danych ABR, a następnie przepuść filtr za pomocą sześciosondażowego filtru o wartości masła. W razie potrzeby aktywuj filtr wycinający.

Rozpocznij kalibrację serii tonów, wybierając kalibrację:CAL200K file; w oprogramowaniu, aby aktywować tryb konfiguracji kalibracji. I wybierz obwody zgodnie z warunkami eksperymentalnymi. Użyj systemu procesora, aby wykonać procedurę kalibracji.

Upewnij się, że specyfikacje techniczne mikrofonu i głośnika pod względem poziomu ciśnienia akustycznego lub limitów SPL, zakresu częstotliwości i dystrybucji są zgodne. Następnie wybierz i uruchom wstępnie zdefiniowany protokół stymulacji kliknięć. Uruchom SPL jednym kliknięciem, aby sprawdzić, czy spektrum bodźców dźwiękowych jest analizowane przez szybką transformację oscyloskopu w trybie online, spełnia wymagania.

Wybierz i uruchom wstępnie zdefiniowany protokół stymulacji impulsami tonalnymi w zakresie od jednego do 42 kiloherców. Potwierdź spektrum częstotliwości zarejestrowanych akustycznych bodźców testowych za pomocą oscyloskopu i FFT online. Na koniec zakończ kalibrację impulsów tonów, ładując utworzony plik kalibracyjny do protokołu bodźca impulsu impulsu tonu.

Zacznij od umieszczenia znieczulonej myszy w kabinie wygłuszającej, wyłożonej pianką akustyczną. W celu zarejestrowania monofonicznych potencjałów słuchowych wywołanych pniem mózgu należy umieścić podskórne elektrody ze stali nierdzewnej w wierzchołku, osiowym oka szpilkowym i brzuszno-bocznym prawej lub lewej małżowiny usznej, w zależności od mierzonego ucha. Z drugiej strony, w przypadku nagrań binauralnych, umieść elektrody ujemne zarówno na prawej, jak i lewej małżowinie usznej.

Umieść elektrodę masową na biodrze zwierzęcia. Przed włożeniem uformuj kształt haczyka na końcu elektrody ze stali nierdzewnej, aby zagwarantować podskórne mocowanie elektrod. A po włożeniu prawidłowo umieść mównicę myszy 10 centymetrów naprzeciwko głośnika.

Podłącz wszystkie elektrody do stopnia głównego i sprawdź ich impedancję. Następnie przed każdym zapisem wykonaj pomiary impedancji wszystkich elektrod, aby zweryfikować prawidłowe ustawienie elektrod i przewodność. Nagrywaj ABR w warunkach swobodnego pola za pomocą jednego głośnika.

Na koniec przeprowadź analizę ABR za pomocą automatycznego wykrywania progów i analizy opóźnień fal, aby określić dodatnie szczyty i ujemne fale. Pierwszym krokiem w analizie ogólnej sprawności słuchowej było zbadanie ABR wywołanych kliknięciami dla różnych SPL, od zera do 90, za pomocą zautomatyzowanego systemu wykrywania progów ABR. Przeanalizowano potencjalne zmiany w poziomach progowych ABR wywołane różnymi częstotliwościami wybuchów tonów.

W przykładowych liniach myszy Cav3.2 plus, minus i Cav3.2 minus, minus wykazywały podwyższone progi słyszenia związane z kliknięciem i impulsem tonu w porównaniu z grupą kontrolną. Na koniec przeprowadzono funkcję wzrostu amplitudy ABR wywołaną kliknięciem oraz analizę opóźnienia kształtu fali ABR za pomocą podejścia falkowego. To ostatnie pozwala na wgląd w możliwy przestrzenno-czasowy wpływ interesującego genu na przetwarzanie informacji słuchowych w obrębie ucha wewnętrznego i pnia mózgu.

Prawidłowe umieszczenie elektrody ABR w pomiarze małżowiny usznej i kalibracja systemu są niezbędne do wykonania tej techniki. Przedstawione tutaj podejście słuchowe może być również wykorzystywane w połączeniu z systemem telemetrycznym do analizy złożonych, średnich opóźnień i późnych słuchowych potencjałów wywołanych. Pomaga to w charakterystyce i fenotypowaniu chorób słuchowych, neurologicznych i neurologicznych.