Mysi model zawału mięśnia sercowego z wykorzystaniem trwałego podwiązania lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej

Ten mysi model zawału mięśnia sercowego umożliwia monitorowanie procesów patologicznych zachodzących od niedrożności naczyń wieńcowych do późnego stadium niewydolności serca na poziomie lokalnej tkanki serca i ogólnoustrojowym. Metoda ta jest kompatybilna z każdym odczytem stosowanym obecnie w biologii i fizjologii serca. Ponadto korzysta z ogromnej różnorodności mysich modeli genetycznych.

Opanowanie odpowiednich umiejętności chirurgicznych może zająć trochę czasu. Tej procedury najlepiej nauczyć się krok po kroku z doświadczonym badaczem. Wizualna demonstracja tego mysiego modelu pozwala na dzielenie się wskazówkami, które mogą pomóc w zabiegu chirurgicznym i przyspieszyć proces uczenia się.

Użyj elektrycznej maszynki do golenia, aby szybko ogolić znieczuloną, ważącą od 25 do 30 gramów, męską mysz C57-Black/6 na gardle i lewej stronie klatki piersiowej. Potwierdź brak reakcji na szczypanie palców u stóp. Nałóż maść na oczy zwierzęcia.

Umieść mysz w pozycji leżącej na poduszce grzewczej i umieść mały kompres z gazy pod głową, aby uniknąć przegrzania oczu. Zabezpiecz kończyny taśmą klejącą. Przełóż pętlę jedwabnego szwu 5-0 pod górnymi siekaczami i przymocuj koniec pętli do poduszki grzewczej, aby usta były otwarte podczas kaniulacji.

Nałóż krem do depilacji na ogolone miejsca i delikatnie masuj bawełnianym wacikiem przez minutę. Usuń nadmiar sierści i kremu gazą, a odsłoniętą skórę oczyść kroplami 0,9% roztworu soli fizjologicznej i gazy. Nałóż kawałki sterylnej gazy na ogolone gardło i klatkę piersiową, a następnie namocz gazę jodopowidonem.

Ustaw wentylator na objętość oddechową siedmiu mililitrów na kilogram i szybkość wentylacji 140 uderzeń na minutę. Przesuń mysz pod mikroskop stereoskopowy do mikrochirurgii. Trzymając skórę na środku gardła, wykonaj 0,5-centymetrowe nacięcie wzdłuż linii ogonowej/głowowej i oddziel płaty gruczołu ślinowego.

Użyj zakrzywionych kleszczy, aby delikatnie oddzielić powięź mięśnia mostkowo-gnykowego, aż krtań i tchawica będą widoczne. Następnie zabezpiecz krawędzie otworu za pomocą zwijaczy przymocowanych do elastycznych taśm. Następnie delikatnie pociągnij język na boki i za pomocą kleszczy włóż wewnętrzną igłę kaniuli o rozmiarze 16 do tchawicy.

Wyobraź sobie prawidłowe wprowadzenie do tchawicy przez nacięcie gardła i podłącz kaniulę do respiratora. Umieść sterylną 0,9% sól fizjologiczną uzupełnioną gazą nasączoną jodopowidonem na nacięciu, aby utrzymać mokre tkanki podczas operacji. Następnie umieść rurkę wydechową w wodzie.

Obecność pęcherzyków wskazuje na udaną intubację. W celu podwiązania lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej lub LAD, ostrożnie przesuń mysz do pozycji odleżynowej po prawej stronie i ponownie zabezpiecz lewą kończynę przednią w nowej pozycji. Zidentyfikuj linię między lewym mięśniem piersiowym mniejszym a większym i wykonaj ukośne jednocentymetrowe nacięcie skóry wzdłuż linii.

Za pomocą mikronożyczek preparacyjnych oddziel powięź mięśni piersiowych bez nacinania tkanek i użyj retraktorów przymocowanych do elastycznych taśm, aby utrzymać separację. Ustaw wentylator na dodatnie ciśnienie końcowo-wydechowe wynoszące trzy centymetry wody. Użyj kleszczy, aby otworzyć jamę klatki piersiowej w trzeciej przestrzeni międzyżebrowej między trzecim a czwartym żebrem.

Umieść dwa zwijacze w klatce piersiowej, po jednym na każdym żebrze i użyj zakrzywionych cienkich kleszczy, aby ostrożnie usunąć osierdzie, nie uszkadzając serca i płuc. Zlokalizuj LAD jako powierzchowną, jaskrawoczerwoną linię biegnącą od krawędzi lewej małżowiny usznej w kierunku wierzchołka. Użyj uchwytu na igłę, aby wprowadzić jedwabny szew 7-0 pod LAD dwa do trzech milimetrów poniżej lewego przedsionka.

Ciągnąc jedwab powoli, aby uniknąć rozdarcia tkanki serca, zawiąż ligaturę trzema węzłami. Dolna lewa część lewej komory natychmiast zblednie po podwiązaniu. Teraz zwolnij zwijacze żeber i trzymając trzecie żebro kleszczami, wykonaj dwa przejścia z jedwabnym szwem 6-0 pod trzecim i czwartym żebrem.

Umieść trzy krople 0,9% roztworu soli fizjologicznej o temperaturze 37 stopni Celsjusza na otworze i zamknij rurkę wydechową na dwa lub trzy cykle oddechowe, aby prawidłowo napompować płuca. Zaciśnij i zabezpiecz szew dwoma rzutami i zwolnij zwijacze przytrzymujące mięśnie, pomagając mięśniom powrócić do prawidłowego położenia anatomicznego. Następnie zamknij skórę klatki piersiowej dwoma szwami i dwoma rzutami jedwabiu do szwów 5-0.

Zamknij skórę gardła jednym szwem jedwabiu do szwów 5-0 i dwoma rzutami. Pod koniec zabiegu usuń taśmy z kończyn, ostrożnie obróć zwierzę do brzusznego odleżyny na podkładkę kompresową i umieść kompres na poduszce grzewczej po prawej stronie zwierzęcia. Dootrzewnowo wstrzyknąć 0,3 mililitra 5% roztworu glukozy o temperaturze 37 stopni Celsjusza.

Zatrzymać wentylator. Jeśli mysz spontanicznie oddycha, ostrożnie wyjmij kaniulę. Wstrzyknąć podskórnie 0,1 miligrama na kilogram buprenorfiny.

Umieść mysz w klatce o temperaturze 30 stopni Celsjusza wentylowanej 100% tlenem na co najmniej godzinę z monitorowaniem. Przez pierwsze dwa dni po zabiegu należy podawać myszy miękką dietę i wodę ad libitum, ogrzewając zwierzę w razie potrzeby. Siedem dni po zabiegu obszary niedokrwienne pozostają niezabarwione chlorkiem trifenylotetrazolu, podczas gdy żywa tkanka barwi się na czerwono z powodu obecności dehydrogenaz.

Obszary niedokrwienne można następnie obliczyć jako procent białego obszaru lewej komory w oprogramowaniu do obrazowania. Analiza Western blot dla aktyny alfa-mięśni gładkich i fosforylacji SMAD2, które są odpowiednio głównymi odczytami miofibroblastów i aktywacji sygnalizacji transformującego czynnika wzrostu beta, może być wykorzystana do określenia zakresu zwłóknienia w tkance mięśnia sercowego serca po zawale serca. W celu oceny obecności zwłóknienia mięśnia sercowego można również przeprowadzić analizę reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym transformującego czynnika wzrostu beta i jego dalszej docelowej ekspresji mRNA.

Zazwyczaj stwierdza się, że prozapalne szlaki sygnałowe i ekspresja genów prozapalnych są aktywowane w ciągu pierwszego tygodnia po zawale mięśnia sercowego. Obserwuje się również ekspresję mRNA genów prozapalnych i markerów monocytów/makrofagów. Wysokość podwiązania będzie miała decydujący wpływ na przeżywalność i powinna być dostosowana do każdego szczepu lub genotypu, ponieważ rozgałęzienia LAD mogą się różnić.

Stałe w ligacji są kluczem do uzyskania powtarzalnych wyników. Procedura ta może być połączona z dowolną metodą analityczną i może być poprzedzona analizą funkcjonalną, utrwalaniem tkanek, hodowlą komórkową lub dowolną techniką będącą przedmiotem zainteresowania.