Ustanowienie mysiego modelu ciężkiego ostrego zapalenia trzustki przy użyciu wstecznego wstrzyknięcia taurocholanu sodu do przewodu żółciowo-trzustkowego

Ogólnym celem tego filmu jest ustalenie mysiego modelu ostrego zapalenia trzustki poprzez wsteczne wstrzyknięcie taurocholanu sodu do przewodu żółciowo-trzustkowego. Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komisję Etyki Zwierząt Uniwersytetu Soochow. Wszystkie zabiegi chirurgiczne wykonywane były w pełnej narkozy.

Nie stosowano leków przeciwbólowych, aby nie ingerować w naturalny przebieg choroby, co zostało potwierdzone wcześniejszą literaturą i zatwierdzone przez Komisję Etyki Zwierząt Uniwersytetu Soochowa. Pościć mysz od ośmiu do 12 godzin przed zabiegiem. Przygotować 5% roztwór taurocholanu sodu, przefiltrować przez mikrofiltr 0,22.

Autoklaw narzędzi i materiałów chirurgicznych, w tym kleszczy, nożyczek, uchwytu ostrza, uchwytu igły, klipsa hemostatycznego, zacisków naczyniowych i sterylnych serwetek. Mikrostrzykawka została wysterylizowana poprzez napromienianie. Za pomocą myszy wywołaj znieczulenie ogólne przez dootrzewnowe wstrzyknięcie 1% pentobarbitalu roztworu sodu w dawce 50 miligramów na kilogram.

Zamocuj mysz w pozycji leżącej na płaskiej płycie z napromieniowanej pianki za pomocą taśmy. Usuń sierść myszy za pomocą kremu do depilacji od poziomu wyrostka mieczykowatego w dół do linii łączącej obustronnego przedniego górnego grzbietu biodrowego, z lewą i prawą stroną równoległą do przedniej linii pachowej. Przetrzyj skórę dwa do trzech razy 0,5% jodoforem i pozostaw do wyschnięcia na jedną do dwóch minut za każdym razem.

Przykryj mysz sterylnymi zasłonami. Rozetnij warstwę skóry, a następnie otwórz podskórnie. Wykonaj około dwu- do trzycentymetrowego środkowego nacięcia brzucha.

Zlokalizuj dwunastnicę od lewej do prawej wzdłuż żołądka. Delikatnie wyciągnij dwunastnicę i na lewą stronę za pomocą kleszczy chirurgicznych i wacika nasączonego środkiem dezynfekującym, aby odsłonić trzustkę, przewód żółciowo-trzustkowy i brodawkę dwunastnicy. Użyj 8-0 szwy aby przejść przez połączenie między dwunastnicą a trzustką wokół brodawki, pociągnij szew na lewą stronę ciała myszy, aby przymocować dwunastnicę.

Delikatnie odciągnij skórę i dolną krawędź wątroby na bok. Zacisnąć wspólny przewód wątrobowy. Przebić mikrowstrzykiwacz do dystalnego przewodu żółciowo-trzustkowego wstecz.

Zamocuj końcówkę igły w pobliżu brodawki dwunastnicy za pomocą zacisku. Wlej 10 mikrolitrów 5% taurocholanu sodu do przewodu żółciowo-trzustkowego w tempie 5 mikrolitrów na minutę. Utrzymuj przewód żółciowo-trzustkowy zamknięty przez 5 minut, aby uzyskać stabilny nacisk.

Usuń zaciski. Wyciągnij mikrowstrzykiwacz, zdejmij drugi zacisk i zamocuj szew. Przywróć dwunastnicę do pierwotnej pozycji anatomicznej i sprawdź krwawienie.

Zamknij ranę szwami 6-0. Zdejmij sterylną zasłonę. Zdezynfekuj nacięcie 0,5% jodoforem.

Odzyskaj zwierzęta ze znieczulenia na podkładce termicznej o temperaturze 37 stopni Celsjusza. Podawać podskórnie 0,8 mililitra 0,9% soli fizjologicznej w celu uzupełnienia płynów. Po 24 godzinach od operacji znieczulić mysz pentobarbitalem sodu, stosując tę samą dawkę i tę samą drogę wstrzyknięcia.

Pobrać krew pełną z aorty brzusznej i wirować z prędkością 1 500 x g przez 15 minut, aby wyizolować surowicę do badań serologicznych. Pobrać tkanki trzustki i płuc do oceny histologicznej. Zanurz trzustkę w 4% roztworze paraformaldehydu na 24 godziny.

Odwodnić w serii stężeń alkoholu i zatopić w parafinie. Za pomocą mikrotomu przygotuj 5 mikro grubych skrawków tkanki trzustki. Wykonaj barwienie H&E w celu oceny histologicznej trzustki.

Myszy były nieco nieaktywne i straciły na wadze w ciągu 24 godzin po operacji w porównaniu z przed operacją. Wskaźniki przeżycia myszy kontrolnych i SAP wynosiły odpowiednio 100% i 72,7% po 72 godzinach od operacji. Zgodnie z wynikami barwienia H&E z odcinków trzustki, martwicę miazgi tkanki trzustki można było zaobserwować u myszy SAP, podczas gdy u myszy kontrolnych nie stwierdzono żadnych znaczących zmian.

Co więcej, u myszy SAP stwierdzono znacznie podwyższony poziom aktywności amylazy, lipazy, trzustki i MPO w płucach w porównaniu z myszami kontrolnymi. Ponadto stwierdzono również znacznie podwyższone poziomy wskaźników wątroby i nerek, w tym ALT, AST, BUN i kreatyniny. Stosując wsteczne wstrzyknięcie taurocholanu sodu do przewodu żółciowo-trzustkowego, u myszy można wywołać ciężkie ostre zapalenie trzustki.

Dobrze odsłonięcie przewodu żółciowo-trzustkowego, aby zapewnić udane nakłucie. Podczas nakłucia należy zapewnić odpowiedni kąt i siłę, aby uniknąć przebicia przewodu żółciowo-trzustkowego. Opisany tutaj model SAP indukowany przez TC jest odpowiednim modelem do badania mechanizmów związanych z ciężkim ostrym zapaleniem trzustki.

Jest to model ekonomiczny wykorzystujący tańsze odczynniki, a ten film pomaga szybciej wyszkolić początkującego chirurga.