Model obturacyjnego przewlekłego zapalenia trzustki ustanowiony poprzez elektrokoagulację

Niniejszy protokół opisuje nowatorskie podejście do modelowania przewlekłego obturacyjnego zapalenia trzustki, które polega na wizualizacji przewodu trzustkowego oraz elektrokrzepnięciu przewodu trzustkowego w celu spowoduje jego niedrożności.

Istnieje wiele metod tworzenia modeli zwierzęcych przewlekłego zapalenia trzustki, w tym dootrzewnowkowe podanie sodu oraz podwiązanie przewodu trzustkowego, które mają swoje ograniczenia. Nasz zespół niedawno opracował nowy model elektrokoagulacji przewlekłego zapalenia trzustki u myszy, który ma tę zaletę, że nie wymaga długich wstrzyknięć leków ani trudnej metody do opanowania. Mogą też łatwo ustanowić model przewlekłego zapalenia trzustki.

Wykorzystanie koagulacji elektrycznej do wywołania przewlekłego zapalenia trzustki u myszy stanowi wygodniejszy i bardziej eksperymentalny model, oferując obiecującą drogę do przyszłych badań w tej dziedzinie. Na początek umieść znieczuloną mysz na termoforze, aby utrzymać temperaturę ciała. Używając trymera, ogol włosy między klatką piersiową a dolną częścią brzucha.

Następnie nożyczkami wykonaj dwucentymetrowe nacięcie w środkowej części jamy brzusznej, a następnie nacięcie o długości jednego centymetra między górną częścią brzucha a wyrośleniem ksunowym. Użyj ekspanzera brzusznego, aby zlokalizować obszar trzustki w celu elektrokoagulacji. Używając sterylnego patyczka watowego, zidentyfikowaj dwunastnicę od tyłu lewej górnej części brzucha i obróć ją, aby zobaczyć przewod żółciowy łączący wątrobę.

Tymczasowo zatkać bliższy wspólny przewód żółciowy za pomocą klipsa mikronaczyniowego, aby zapobiec wpadowi wstecznemu do wątroby. Połącz rurę polietylenową o wymiarach 0,25 na 0,35 milimetra z igłą 0,25 milimetra i przebij okoliczność ampuły, celując w dużą brodawkę dwunastniczą. Włóż rurkę do brodawki i przeprowadź ją do połowy drogi do przewodu żółciowego, a następnie zatrzymaj wejście.

Uruchom pompę infuzyjną i infuzuj 0,2% roztworu błękitu metylenowego, aż przewód trzustkowy stanie się niebieski. Po infuzji wyjmij rurkę polietylenową i wyjmij klips mikronaczyniowy. Użyj sterylnych patyczków watowych, aby naprawić trzustkę, a nóż elektrokoagulacyjny skieruj na obszar o niebieskim kolorze.

Po ustawieniu parametrów pracy elektrokoagulacji użyj czystej miedzi jako materiału elektrody i stosuj zabieg trzustki przez dwie do trzech sekund, unikając naczyń krwionośnych. Kontynuuj elektrokrzepnięcie, aż obszar zabarwiony metylenem na niebiesko zmieni kolor na żółty lub brązowy. Gdy niebieski roztwór barwienia przestaje być widoczny w trzustce, zatrzymaj elektrokoagulację.

Po operacji umieść mysz w pudełku z polietylenu wyłożonym materiałem na pościel. Po elektrokoagulacji przewodu trzustkowego znieczulaj mysz i umieść ją na platformie operacyjnej. Aby zebrać krew przez splot oczodołowy, delikatnie trzymaj skórę z tyłu, tworząc lekkie wypukłość gałki ocznej.

Następnie umieść koniec rurki naczyniowatej w kąciku oka i delikatnie włóż ją pod gałkę oczną pod kątem 30 do 45 stopni. Obróć kapilarę, aż krew zacznie płynąć. Po zebraniu krwi zamknij powieki, delikatnie naciskając gazą.

Wiruj krew w dawce 1 200g przez 15 minut i pobierz supernatant do nowej probówki. Mierz amylazę, bilirubinę i kwas hialuronowy za pomocą dostępnych komercyjnie zestawów, zgodnie z zaleceniami producenta. Następnie połóż uśpioną mysz na stole operacyjnym ustawionym na cztery stopnie Celsjusza.

Za pomocą nożyczek i kleszczy wykonaj nacięcie w kształcie litery V w ścianie brzucha, aby odsłonić jamę brzuszną. Usuń trzustkę i podziel ją na trzy części do barwienia. Utrwalam trzustkę w roztworze 4% poli-formaldehydu, a następnie osadzam utrwaloną trzustkę w parafinie do sekcjonowania.

Potnij bloki parafiny na sekcje o grubości 0,5 milimetra i barw je hematoksylyną i eozyną, a także barwieniem Massona do analizy immunohistochemicznej. Obserwuj zabarwioną tkankę trzustki pod mikroskopem świetlnym. Barwienie hematoksylinowo-eozynowe wykazało rozproszone komórki trzustki i dowody przewlekłego zapalenia trzustki w grupie elektrokoagulacyjnej w 14. dniu.

W dniu 28 zaobserwowano oznaki regeneracji tkanek i odwrócenia patologii w komórkach acynarnych trzustki. Barwienie Massona wykazało istotnie więcej włóknienia w grupie elektrokoagulacyjnej niż w grupie pozorowanej. Barwienia immunohistochemiczne wykazały podwyższone poziomy alfa jedyn, kolagenu typu 1 oraz alfa w grupie elektrokoagulacyjnej, co wskazuje na wyższy stopień przewlekłego zapalenia trzustki.

Poziom kwasu hialuronowego wzrósł w grupie elektrokoagulacyjnej, osiągając szczyt około 21. dnia, pozostając stabilny w grupie pozorowanej. Poziom bilirubiny znacząco wzrósł do 14. dnia w grupie elektrokoagulacyjnej, osiągając szczyt około 21. dnia, podczas gdy w grupie pozorowanej nie wykazywały żadnych zmian. Poziom amylazy w grupie elektrokoagulacyjnej gwałtownie wzrósł 14. dnia, a następnie spadł w 28. dniu, przy czym grupa pozorowana wykazywała niewielkie zmienności.