Name: Model obturacyjnego przewlekłego zapalenia trzustki ustanowiony poprzez elektrokoagulację (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-31T13:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: Poznaj model elektrokoagulacji przewodu trzustkowego u myszy do badania przewlekłego zapalenia trzustki. Ta metoda umożliwia analizę histologiczną i biochemiczną zmian w tkance trzustki.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Prace te były wspierane przez program ogólny Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (grant nr 81770642), program ogólny Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (grant nr 82170657), projekt Pudong Health Committee of Shanghai (grant nr PWYgf2021-08) oraz Fundacji Nauk Przyrodniczych prowincji Zhejiang (LGF22H030014). Kolory zostały uzupełnione z pomocą BioRender.com.

Wszystkie opisane eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Wykorzystania i Opieki nad Zwierzętami Naval Medical University. Upewnij się, że wszystkie materiały chirurgiczne są sterylne.
1. Laparotomia
<ol>
	<li>Podaj mieszankę ketaminy (80 mg/kg) i ksylazyny (10 mg/kg) za pomocą iniekcji dootrzewnowej w celu indukcji znieczulenia. Monitoruj głębokość znieczulenia, oceniając utratę odruchu pedałowego i rogówkowego. Podawaj dodatkowe dawki (20% początkowej dawki) w razie potrzeby, aby utrzymać odpowiednią znieczulenie podczas zabiegu. Potwierdź odpowiednią głębokość znieczulenia, szczypiąc palce. Połóż zwierzę na termoforze, aby utrzymać temperaturę ciała.</li>
	<li>Użyj trymera do golenia włosów (~2 cm2) między klatką piersiową a dolną częścią brzucha. Dezynfekuj obszar operacyjny 3 razy, na przemian podawając chlorheksydynę/jod i alkohol.</li>
	<li>Przymocuj myszy do płytki chirurgicznej taśmą chirurgiczną i zaklej sterylne zasłony.</li>
	<li>Nożyczkami wykonaj nacięcie o długości 2 cm w środkowej części jamy brzusznej, a następnie nacięcie o długości 1 cm między górną częścią brzucha a wyrostkiem ksunofidalnym.</li>
</ol>
2. Lokalizowanie i odsłonięcie trzustki
<ol>
	<li>Za pomocą ekspanzera brzusznego zlokalizuj obszar trzustki, gdzie będzie wykonywana elektrokoagulacja.</li>
	<li>Za pomocą sterylnego wacika rozpoznaj dwunastnicę od tyłu lewej górnej części brzucha i obróć dwunastnicę, aby zobaczyć przezroczysty przewód żółciowy łączący wątrobę.</li>
</ol>
3. Śledzenie miejsca operacji
<ol>
	<li>Użyj klipsa mikronaczyniowego, aby tymczasowo zatkać bliższy wspólny przewód żółciowy i zapobiec przeciekowi wlewu wstecznego do wątroby.</li>
	<li>Połącz rurkę polietylenową o średnicy wewnętrznej 0,25 mm i zewnętrznej 0,35 mm do igły o średnicy zewnętrznej 0,25 mm. Użyj tego urządzenia, aby włożyć je wokół ampuły. Celuj w główną brodawkę dwunastnicy i włóż do niej rurkę. Włóż cewnik do przewodu żółciowego w połowie i zatrzymaj jego włożenie.</li>
	<li>Uruchom pompę infuzyjną i mikropompuj 0,2% roztwór błękitu metylenowego (rozcieńczony w soli fizjologicznej 0,9%) w dawce 50 μL/10 g przez 2 minuty w tempie 50 μL/min. Przewód trzustkowy stopniowo stanie się niebieski.</li>
	<li>Na koniec sesji wyciągnij rurkę polietylenową i wyjmij klips mikronaczyniowy.</li>
</ol>
4. Indukcja procedury elektrokoagulacji
<ol>
	<li>Przy pomocy sterylnych patyczków watowych napraw trzustkę i skieruj nóż elektrokoagulacyjny na niebieską część do elektrokoagulacji. Miejsce elektrokoagulacji znajduje się w środkowej i dolnej części 2/3 między wspólnym przewodem żółciowym a tętnicą trzustkową dwunastnicową górną.<ol>
		<li>Aby kontynuować to badanie, zastosuj następujące parametry pracy elektrokoagulacji: napięcie: 220 V; materiał elektrody: czysta miedź; Czas leczenia: Leczenie w pozycji trzustki, z unikaniem naczyń krwionośnych przez 2-3 sekundy, aż po elektrokoagulacji niebieski lub metylenowy zostanie zastąpiony żółtym lub brązowym; Wielkość obszaru operacyjnego: W zależności od myszy, obszar elektrokrzepu znajduje się z tyłu trzustki. Wybierz pozycję między wspólnym przewodem żółciowym a przednią tętnicą trzustkowo-duodenalną górną; Temperatura: 300 °C.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Zakończ elektrokoagulację, gdy nie zauważymy roztworu barwienia niebieskiego.</li>
	<li>Zamknąć brzuch szwami 4-0 chłonnymi, a skórę niechłonnymi szwami z polipropylenu 4-0. Nie zajmuj więcej niż 20 minut między laparotomią a szyciem.</li>
	<li>Traktuj grupę kontrolną tak samo jak myszy eksperymentalne, ale upewnij się, że składniki infuzji składają się wyłącznie z błękitu metylenowego. W grupie kontrolnej (Sham) podano zastrzyk z błękitu metylenowego, ale nie przeprowadzano operacji elektrokoagulacyjnej.</li>
</ol>
5. Utrzymanie zwierząt przy życiu
<ol>
	<li>W przypadku leczenia rany pooperacyjnej myszy po operacji jamy brzusznej codziennie sprawdzaj nacięcie pod kątem krwawienia lub zaczerwienienia: jeśli pojawi się krwawienie, delikatnie naciskaj sterylną gazą, aby je zatrzymać, a następnie zmień opatrunek, a jeśli pojawi się zaczerwienienie, nałóż raz dziennie maść erytromycynową, jednocześnie podejmując działania, aby zapobiec gryzieniu rany przez mysz. W przypadku analgezji podawaj karprofen (5 mg/kg) bezpośrednio po operacji dootrzewnowkowo, a następnie raz co 24 godziny przez 3 kolejne dni.</li>
</ol>
6. Metody analizy
<ol>
	<li>Mierz indeksy biochemiczne surowicy i obserwuj zmiany patologiczne tkanki trzustki w 7., 14., 21. i 28. dniu elektrokrzepnięcia.</li>
	<li>Znieczulać zwierzę mieszanką ketaminy (80 mg/kg) i ksylazyny (10 mg/kg) za pomocą zastrzyku otrzewnejowego i pobrać około 500 μL krwi przez splot oczodołowy.</li>
	<li>Delikatnie trzymaj skórę z tyłu, aby umożliwić lekkie wysunięcie gałki ocznej.</li>
	<li>Umieść koniec kapilary w kącie oka i delikatnie włóż ją pod gałkę oczną pod kątem około 30°-45°. Obróć kapilarę, aż krew zacznie płynąć.</li>
	<li>Na koniec zbierania trzymaj powieki zamknięte, delikatnie naciskając gazą.</li>
	<li>Wirówka surowicy (1 200 × g, 15 min) i usunięcie supernatantu w celu wyznaczenia amylazy, bilirubiny i kwasu hialuronowego (krok 6.10).</li>
	<li>Znieczulać myszy ketaminą-ksylazyną, potwierdzić, że są w stanie głębokiego znieczulenia (brak odruchu pedałowego ani rogówkowego), a następnie wykonać zwichnięcie szyjki macicy w celu eutanazji.</li>
	<li>Umieść uśpione myszy na stole operacyjnym w temperaturze 4 °C i użyj nożyczek oraz kleszczy, aby wykonać nacięcie w kształcie litery "V" w ścianie brzucha, odsłaniając jamę brzuszną. Usuń trzustkę myszy i podziel organ na trzy części do barwienia.</li>
	<li>Przetworz trzustkę, utrwalając ją w roztworze 4% poliformaldehydu i osadzając w parafinie. Pociąć bloki parafiny trzustki na fragmenty o grubości 0,5 mm i barwić je hematoksyliną i eozyną (HE) oraz barwieniem Massona, aby zobaczyć je pod mikroskopem świetlnym. Do analizy immunohistochemicznej wykorzystaj tkankę trzustkową osadzoną w parafinie.</li>
	<li>Mierz amylazę (U/dL), bilirubinę (mmol/L) oraz kwas hialuronowy (μg/L) za pomocą dostępnych komercyjnie zestawów zgodnie z zaleceniami producentów.</li>
</ol>

<ol><li>Ding, W. -X., Ma, X., Kim, S., Wang, S., Ni, H. -M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+insights+about+autophagy+in+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22eGastroenterology%22%5BJournal%5D)">Recent insights about autophagy in pancreatitis.</a> eGastroenterology. 2 (2), e100057(2024).</li>
<li>Van Laethem, J. L., Robberecht, P., Resibois, A., Deviere, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transforming+growth+factor+beta+promotes+development+of+fibrosis+after+repeated+courses+of+acute+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Transforming growth factor beta promotes development of fibrosis after repeated courses of acute pancreatitis in mice.</a> Gastroenterology. 110 (2), 576-582 (1996).</li>
<li>Watanabe, S., Abe, K., Anbo, Y., Katoh, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+mouse+exocrine+pancreas+after+pancreatic+duct+ligation%3A+a+qualitative+and+quantitative+histological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Histol+Cytol%22%5BJournal%5D)">Changes in the mouse exocrine pancreas after pancreatic duct ligation: a qualitative and quantitative histological study.</a> Arch Histol Cytol. 58 (3), 365-374 (1995).</li>
<li>Cáceres, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+duct+ligation+reduces+premalignant+pancreatic+lesions+in+a+Kras+model+of+pancreatic+adenocarcinoma+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Pancreatic duct ligation reduces premalignant pancreatic lesions in a Kras model of pancreatic adenocarcinoma in mice.</a> Sci. Rep. 10 (1), 18344(2020).</li>
<li>Andaluz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoluminal+radiofrequency+ablation+of+the+main+pancreatic+duct+is+a+secure+and+effective+method+to+produce+pancreatic+atrophy+and+to+achieve+stump+closure%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Endoluminal radiofrequency ablation of the main pancreatic duct is a secure and effective method to produce pancreatic atrophy and to achieve stump closure.</a> Sci Rep. 9 (1), 5928(2019).</li>
<li>Lerch, M. M., Gorelick, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+Acute+and+Chronic+Pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Models of Acute and Chronic Pancreatitis.</a> Gastroenterology. 144 (6), 1180-1193 (2013).</li>
<li>Zhang, D. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+a+new+chronic+pancreatitis+and+spontaneous+pancreatic+cancer+mouse+model+using+retrograde+pancreatic+duct+injection+of+dibutyltin+dichloride%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Methods of a new chronic pancreatitis and spontaneous pancreatic cancer mouse model using retrograde pancreatic duct injection of dibutyltin dichloride.</a> Front Oncol. 12, 947133(2022).</li>
<li>Tian, C. Y., Zhao, J., Xiong, Q. Q., Yu, H., Du, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secondary+iron+overload+induces+chronic+pancreatitis+and+ferroptosis+of+acinar+cells+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Secondary iron overload induces chronic pancreatitis and ferroptosis of acinar cells in mice.</a> Int J Mol Med. 51 (1), 9(2023).</li>
<li>Samuel, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+severe+gallstone+pancreatitis%3A+Murine+pancreatic+duct+ligation+results+in+systemic+inflammation+and+substantial+mortality%5BTitle%5D)+AND+%22Pancreatology%22%5BJournal%5D)">A novel model of severe gallstone pancreatitis: Murine pancreatic duct ligation results in systemic inflammation and substantial mortality.</a> Pancreatology. 10 (5), 536-544 (2010).</li>
<li>Peng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+chronic+pancreatitis+model+induced+by+partial+ligation+of+the+pancreatic+duct+encapsulates+the+profile+of+macrophage+in+human+chronic+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Murine chronic pancreatitis model induced by partial ligation of the pancreatic duct encapsulates the profile of macrophage in human chronic pancreatitis.</a> Front Immunol. 13, 840887(2022).</li>
<li>Chetty, U., Gilmour, H. M., Taylor, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+acute+pancreatitis+in+the+rat--a+new+model%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Experimental acute pancreatitis in the rat--a new model.</a> Gut. 21 (2), 115-117 (1980).</li>
<li>Ielpo, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+case+report%3A+endoluminal+thermal+ablation+of+main+pancreatic+duct+for+patients+at+high+risk+of+postoperative+pancreatic+fistula+after+pancreaticoduodenectomy%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Hyperthermia%22%5BJournal%5D)">Clinical case report: endoluminal thermal ablation of main pancreatic duct for patients at high risk of postoperative pancreatic fistula after pancreaticoduodenectomy.</a> International Journal of Hyperthermia. 38 (1), 755-759 (2021).</li>
<li>Gorelick, F. S., Lerch, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Do+animal+models+of+acute+pancreatitis+reproduce+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Do animal models of acute pancreatitis reproduce human disease.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 4 (2), 251-262 (2017).</li>
</ol>

Autorzy deklarują, że nie mają żadnych konfliktów interesów.

Ryzyko i nasilenie zapalenia trzustki są określane zarówno czynnikami genetycznymi, jak i środowiskowymi6. Całkowite wyleczenie klinicznego zapalenia trzustki jest celem gastroenterologii, a pierwszym krokiem jest stworzenie modeli zwierzęcych. Istnieje wiele metod ustalania tych modeli, z których każda ma swoje zalety i wady 7,8,9,10,11.
Chirurdzy stosowali elektrokoagulację wysokoczęstotliwościową do przeprowadzenia endoluminalnej termicznej ablacji (ETHA) w głównym przewodzie trzustkowym, aby zmniejszyć wydzielanie zewnątrzkreatyczne, tym samym zmniejszając częstość występowania pooperacyjnej przetoki trzustki (POPF) po pankreatikoduodenektomii (PD)12. Sugeruje to, że metoda termicznej ablacji powodującej zanik trzustki została wdrożona w pracy klinicznej. Opracowaliśmy nowy model obturacyjnego zapalenia trzustki, wykorzystując błękit metylenowy do wizualizacji przewodu trzustkowego i precyzyjnego elektrokrzepnięcia.
Do tego eksperymentu wybrano samce myszy w wieku 8 tygodni C57BL/6. Samice myszy mają cykl rozrodczy, a poziom hormonów w organizmie może mieć wpływ na dane eksperymentalne. W wieku 8 tygodni myszy były w szczytowym okresie życia, z dojrzałymi narządami ciała i dobrym wskaźnikiem zdrowia życia, a samce w tym samym wieku były silniejsze pod względem rozmiaru. W miesiącu obserwacji po operacji pobieraliśmy próbki trzustki myszy w 7, 14, 21 i 28 dniach; Wyniki uzyskane po 14 dniach w większości odpowiadają patologicznym cechom zapalenia trzustki.
Istnieje kilka zastrzeżeń wobec tego podejścia. Po pierwsze, wspólny przewód żółciowy powinien być zacisnięty jak najbliżej wlęża wątrobowego, aby ułatwić wstrzyknięcie barwnika do przewodu trzustkowego. Po drugie, należy zwrócić uwagę na szybkość i czas wstrzykiwania barwnika błękitu metylenowego do przewodu trzustkowego. Przewód trzustkowy nie może być widoczny przy zbyt małej ilości roztworu barwnika, a zbyt duża ilość roztworu utrudnia identyfikację głównego przewodu trzustkowego w polu chirurgicznym. Po trzecie, elektrokoagulacja została przerwana, gdy nie było widoczności roztworu barwienia niebieskiego. W tych eksperymentach operacja przeprowadza się w obszarze wskazanym przez barwienie błękitu metylenowego, ponieważ obszar trzustki myszy, który jest elektrokoagulowany, będzie inny, dlatego barwnik metylenowy służy do śledzenia przewodu trzustkowego. Po czwarte, wszelkie krwawienia trzustki podczas operacji powinny zostać natychmiast zatrzymane. Jednocześnie nożem elektrokoagulacyjnym należy użyć do cięcia trzustki. Jeśli nóż elektrokoagulacyjny z jakiegokolwiek powodu przykleja się do trzustki, czas elektrokrzepnięcia powinien zostać wydłużony. Jest to najczęstszy sposób zapobiegania wystąpieniu poważnych powikłań pooperacyjnych spowodowanych wyciekiem trzustki.
Jednak ta metoda ma swoje wady. Biegłość operatora bezpośrednio wpływa na wynik eksperymentu, a jednolitość zabiegu na różnych myszach wpływa na skuteczność modelu. Model ten symuluje skutki kamieni żółciowych lub niedrożności przewodów trzustkowych, prowadzących do powtarzających się epizodów ostrego zapalenia trzustki, które ostatecznie prowadzą do przewlekłego zapalenia trzustki. To może tłumaczyć podwyższony poziom bilirubiny. Dlatego model ten może być również opracowany jako model ostrego zapalenia trzustki w oparciu o stopień elektrokoagulacji. Wczesne eksperymenty na trzustce myszy 3 dni po elektrokoagulacji wykazały cechy ostrego zapalenia trzustki, jednak powikłania pooperacyjne obniżyły skuteczność modelu w przypadku ostrego zapalenia trzustki. Nie można jednak wykluczyć, że ciepło wytwarzane przez elektrokautery podczas procesu elektrokoagulacji mogło rozprzestrzenić się do głównego przewodu żółciowego. Warto rozważyć pytanie, jak stabilnie wywołać ostre zapalenie trzustki za pomocą elektrokoagulacji.
W porównaniu do tradycyjnej metody wstrzykiwania ceruleiny, która wymaga powtarzanych wstrzyknięć przez kilka tygodni, metoda elektrokoagulacji oszczędza czas i jest wygodniejsza. Podczas gdy wstrzykiwanie ceruleiny wykazuje doskonałą stabilność i łatwość obsługi, elektrokoagulacja trwa ~20 minut i oszczędza czas na późniejsze eksperymenty.
Rozwój nowych modeli ma na celu badanie naturalnego przebiegu choroby oraz opracowanie terapii celowanych. Nasz nowy model zwierzęcy pomaga symulować przewlekłe zapalenie trzustki spowodowane niedrożnością przewódków trzustkowych u myszy, w tym poendoskopową retrogradową cholangiopankreatografią (ERCP)13.

Przewlekłe zapalenie trzustki (MPD) to ciężkie, postępujące zaburzenie zapalne, prowadzące do zniszczenia trzustki i objawiające się bólem brzucha oraz zaburzeniami trawiennymi. Z czasem może powodować cukrzycę i zwiększać ryzyko raka trzustki. Ustanowienie zwierzęcego modelu CP i opracowanie skutecznych strategii terapeutycznych jest zatem kluczowe.
Komórki akcynarne z zewnątrzskrzyny trzustki produkują i wydzielają dużą liczbę enzymów trawiennych. Gdy zaburzenia organelli i regulacji homeostazy białek są zaburzone, może to prowadzić do nieprawidłowej aktywacji wewnątrzkomórkowego trypsinogenu, co ostatecznie prowadzi do uszkodzenia komórek acinowych i rozwoju zapalenia trzustki1.
Wcześniejsze badania wykazały, że modele mysie, zwłaszcza te wywołane przez powtarzające się zastrzyki ceruleiny2 oraz chirurgiczne podwiązanie przewódówtrzustkowych 3,4, odegrały kluczową rolę w badaniach CP. Ceruleina może wywołać ostre zapalenie trzustki, które może przejść w stan przewlekły, jednak brak specyficznej niedrożności przewódu trzustkowego ogranicza jej znaczenie kliniczne w symulacji obturacyjnego zapalenia trzustki. Chociaż podwiązanie chirurgiczne lepiej naśladuje obturacyjny charakter ludzkiej porażki mózgowej, jest wysoce inwazyjne, trudne do wykonania i często prowadzi do poważnych skutków ogólnoustrojowych, utrudniając badania miejscowych patologii przewodów.
Aby rozwiązać te ograniczenia, zaproponowano nowy model obturacyjnego CP poprzez elektrokoagulację. Podobnie jak zasada podwiązywania przewódu trzustkowego, blokuje przewód trzustkowy, ale jest łatwiejszy do wykonania i ma wyższy wskaźnik skuteczności. Naukowcy zaproponowali, że ablacja radiowa w głównym przewodzie trzustkowym świń jest bezpieczną i skuteczną metodą wywoływania zaniku trzustki5, co sugeruje również, że odcięcie głównego przewodu trzustkowego za pomocą elektrokoagulacji wysokiej częstotliwości może wywołać podobne efekty. Technika ta obejmuje przekłucie przewodów trzustkowych wstecznie wsteczne i wstrzyknięcie roztworu błękitu metylenowego do barwienia przewodów, a następnie elektrokoagulację w celu wywołania miejscowej niedrożności przewodów (Rysunek 1). Takie podejście wywołuje stan zapalny i włóknienie naśladujące ludzką obturacyjną porażkę mózgową, unikając jednocześnie rozległej reakcji zapalnej i powikłań ogólnoustrojowych. W porównaniu z konwencjonalnymi modelami, model elektrokoagulacji oferuje kilka zalet: celuje konkretnie w przewód trzustkowy, zmniejsza zmienność i łagodzi komplikacje układowe. Zapewnia bardziej specyficzne dla choroby, powtarzalne i wszechstronne podejście do zrozumienia mechanizmów leżących u podstaw niedrożności przewodów w CP oraz jego roli w postępie choroby.

<table><tbody><tr><td>Klips mikronaczyniowy o średnicy 16 mm</td><td>Stronger, Ningbo, Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Szwy chłonne</td><td>Fabryka Urządzeń Medycznych Jinhuan w Yangzhou</td><td>4-0</td><td>-</td></tr><tr><td>Karprofen</td><td>Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd.</td><td>C830557-5g</td><td>-</td></tr><tr><td>Rurka kapilarna</td><td>Tygon, USA</td><td>&nbsp; AAQ(AAD)04091</td><td>0,25 x 0,3 mm</td></tr><tr><td>Nóż elektrokoagulacyjny</td><td>Shun Ye MEDICAL Equipment Co., LTD, Ningbo, Chiny</td><td>Shun Ye BDD-YE-DF-1</td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki do oka</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zastrzyk chlorowodorku ketaminy (Ketaset CIII)</td><td>Zoetis Inc.</td><td>S5564</td><td>-</td></tr><tr><td>Roztwór barwienia błękitu metylenowego</td><td>Solarbio, Szanghaj, Chiny</td><td>&nbsp; G1303</td><td></td></tr><tr><td>Niechłonny szew z monofilamentu polipropylenowego 4-0</td><td>Jinhuan, Szanghaj, Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop operacyjny</td><td>Murzider, Guangdong, Chiny</td><td>MSD203</td><td></td></tr><tr><td>Kleszcze okulistyczne</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wymaz z okrągłą głowicą</td><td>Olga Sherer, Huaximedical, Chiny</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Igła do strzykawki</td><td>Minank, Zhejiang, Chiny</td><td></td><td>0,25 mm</td></tr><tr><td>Kleszcze tkankowe</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki do tkanek</td><td>Shanghai Puxin Instrument Technology Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zastrzyk chlorowodorku ksylazyny</td><td>Bayer Animal Health</td><td>XYL-50-20</td><td>-</td></tr></tbody></table>

model obturacyjnego przewlekłego zapalenia trzustki ustanowiony poprzez elektrokoagulację

An Obstructive Chronic Pancreatitis Model Established Through Electrocoagulation

Przewlekłe zapalenie trzustki (MPD) to ciężka choroba zapalna, która może niszczyć trzustkę, prowadzić do cukrzycy oraz zwiększać ryzyko raka trzustki, poważnie wpływając na jakość życia pacjentów. Zwalczanie CP to kluczowy obszar badań w gastroenterologii. Opracowaliśmy nowy model zwierzęcy, aby przezwyciężyć ograniczenia istniejących, wykorzystując 8-tygodniowe samce myszy C57BL/6.
Po odsłonięciu trzustki podczas operacji jamy brzusznej u znieczulonych myszy, zacisnęliśmy wspólny przewód żółciowy w pobliżu wątroby, aby zapobiec przedostaniu się do niego błękitu metylenowego. Do przewodu żółciowego wprowadzono kapilarę, aby wstrzyknąć barwnik, a po zabarwieniu przewodu trzustkowego. Po wizualizacji przewodu trzustkowego wybrano trzustkę do elektrokrzepnięcia w środkowej i dolnej części 2/3 miejsca między wspólnym przewodem żółciowym a tętnicą górną trzustkowo-duodenalną. Elektrokoagulacja została przerwana, gdy roztwór barwienia niebieskiego nie był rozpoznawalny. Odwłok był wtedy zamykany, a myszy zwykle podnoszono. W 7, 14, 21 i 28 dniach po operacji trzustka była badana za pomocą barwienia HE, barwienia Massona oraz immunohistochemii, a surowica krwi została przeanalizowana pod kątem parametrów biochemicznych. Patologia po 14 dniach ściśle odpowiadała cechom przewlekłego zapalenia trzustki, podobnie jak parametry biochemiczne surowicy.

Zwierzęta podzielono na grupę kontrolną (wstrzykiwanie tylko błękitu metylenowego do koagulacji elektrycznej) oraz grupę koagulującą elektryczną, łącznie 20 myszy w każdej grupie. Wskaźnik śmiertelności wynosił 0% w grupie kontrolnej i 15% w grupie z koagulacją elektryczną; wskaźnik sukcesu budowy modelu (liczba żywych myszy) wynosił 71%. W każdej grupie wybrano tuzin zwierząt do oceny patologicznej. Trzy myszy z każdej grupy zostały losowo wybrane 7., 14., 21.i 28. dnia do barwienia HE, Massona oraz immunohistochemicznego. Proces modelowania przedstawiono na Rysunku 1. Po przerysowaniu za pomocą błękitu metylenowego, elektrokoagulowaliśmy położenie między wspólnym przewodem żółciowym a przednią tętnicą trzustkową dwunastnicową u myszy. Jeśli obszar elektrokoagulacji zostanie wybrany w środkowej i dolnej części pozycji z powierzchnią mniejszą niż jedna trzecia, efekt prawdopodobnie nie spełni oczekiwań. Jednak jeśli przekroczy 2/3, myszy prawdopodobnie umrą w ciągu 72 godzin od elektrokoagulacji, co jest prawdopodobnie spowodowane ciężkim ostrym zapaleniem trzustki, które pojawia się po całkowitym zablokowaniu przewodu trzustkowego.
Z tego wnioskujemy, że 14. dnia po elektrokoagulacji można zaobserwować histologiczne zdjęcie przewlekłego zapalenia trzustki myszy (jak pokazano na Rysunku 1), które nie jest całkowicie zablokowane, lecz powstaje po częściowym zablokowaniu przewodu trzustkowego. Na tkance 7. dnia wykazywały lekki obrzęk tkanki, a nie wykazywały przewlekłego zapalenia trzustki. Czternastego dnia barwienie HE tkanki trzustki wykazało, że komórki acynarne trzustki zostały rozproszone. 21. dnia stopniowo się odbudowywał stan zapalny komórek acinowych w tkance trzustkowej. Na 28. dniu (Rysunek 2) zaobserwowano oznaki odwrócenia zmian patologicznych w tkance. Może to wynikać z niewystarczającej elektrokoagulacji przewodu trzustkowego podczas procesu elektrokrzepnięcia, a także z efektu kompensacyjnego pozostałego przewodu trzustkowego po częściowej niedrożności przewodu trzustkowego.
Barwienie Masona wykazało, że stopień zwłóknienia w grupie operacyjnej był istotnie poważniejszy niż w grupie pozorowanej operacji. Wyniki immunohistochemiczne barwienia col-1 oraz (aktyny mięśni alfa-gładkich) były wyższe (Rysunek 3). Obecność przewlekłego zapalenia trzustki w tkance trzustki zaobserwowano analizą patologiczną 14. dnia, a zmiany przed i po powodowaniu porównano za pomocą barwienia HE dopiero w późniejszej analizie patologicznej. Analiza biochemicznych wskaźników surowicy wykazała, że stężenia amylazy surowicowej, bilirubiny i kwasu hialuronowego są wyższe w grupie koagulującej elektrycznej niż w grupie kontrolnej, co wskazuje na rozpoczęcie przewlekłego zapalenia trzustki (Rysunek 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67061/67061fig01v2.jpg"> 
Rysunek 1: Schematyczna ilustracja obturacyjnego przewlekłego zapalenia trzustki wywołanego elektrokoagulacją u myszy.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67061/67061fig01largev2.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67061/67061fig02.jpg"> 
Rysunek 2: Barwienie tkanek trzustkowych hematoksylinowo-eozyną w czasie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67061/67061fig02large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67061/67061fig03.jpg"> 
Rysunek 3: Barwienie hematoksylin-eozyny i Massona oraz immunohistochemia trzustki. Skróty: Col-1 = kolagen alfa-1 typu 1; SMA = alfa-gładka mięśniowa aktyna. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67061/67061fig03large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67061/67061fig04.jpg"> 
Rysunek 4: Reprezentatywne wyniki indeksów biochemicznych surowicy u myszy w różnych okresach. (A) Stężenie kwasu hialuronowego w surowicy (μg/L). (B) Stężenie bilirubiny w surowicy (mmol/L). (C) stężenie amylazy w surowicy (U/dL). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67061/67061fig04large.jpg" target="_blank">Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.</a>

Niniejszy protokół opisuje nowatorskie podejście do modelowania przewlekłego obturacyjnego zapalenia trzustki, które polega na wizualizacji przewodu trzustkowego oraz elektrokrzepnięciu przewodu trzustkowego w celu spowoduje jego niedrożności.

Model obturacyjnego przewlekłego zapalenia trzustki ustanowiony poprzez elektrokoagulację

Chronic pancreatitis (CP) is a severe inflammatory condition that can destroy the pancreas, lead to diabetes, and increase pancreatic cancer risk, ...

Istnieje wiele metod tworzenia modeli zwierzęcych przewlekłego zapalenia trzustki, w tym dootrzewnowkowe podanie sodu oraz podwiązanie przewodu trzustkowego, które mają swoje ograniczenia. Nasz zespół niedawno opracował nowy model elektrokoagulacji przewlekłego zapalenia trzustki u myszy, który ma tę zaletę, że nie wymaga długich wstrzyknięć leków ani trudnej metody do opanowania. Mogą też łatwo ustanowić model przewlekłego zapalenia trzustki.Wykorzystanie koagulacji elektrycznej do wywołania przewlekłego zapalenia trzustki u myszy stanowi wygodniejszy i bardziej eksperymentalny model, oferując obiecującą drogę do przyszłych badań w tej dziedzinie. Na początek umieść znieczuloną mysz na termoforze, aby utrzymać temperaturę ciała. Używając trymera, ogol włosy między klatką piersiową a dolną częścią brzucha.Następnie nożyczkami wykonaj dwucentymetrowe nacięcie w środkowej części jamy brzusznej, a następnie nacięcie o długości jednego centymetra między górną częścią brzucha a wyrośleniem ksunowym. Użyj ekspanzera brzusznego, aby zlokalizować obszar trzustki w celu elektrokoagulacji. Używając sterylnego patyczka watowego, zidentyfikowaj dwunastnicę od tyłu lewej górnej części brzucha i obróć ją, aby zobaczyć przewod żółciowy łączący wątrobę.Tymczasowo zatkać bliższy wspólny przewód żółciowy za pomocą klipsa mikronaczyniowego, aby zapobiec wpadowi wstecznemu do wątroby. Połącz rurę polietylenową o wymiarach 0,25 na 0,35 milimetra z igłą 0,25 milimetra i przebij okoliczność ampuły, celując w dużą brodawkę dwunastniczą. Włóż rurkę do brodawki i przeprowadź ją do połowy drogi do przewodu żółciowego, a następnie zatrzymaj wejście.Uruchom pompę infuzyjną i infuzuj 0,2% roztworu błękitu metylenowego, aż przewód trzustkowy stanie się niebieski. Po infuzji wyjmij rurkę polietylenową i wyjmij klips mikronaczyniowy. Użyj sterylnych patyczków watowych, aby naprawić trzustkę, a nóż elektrokoagulacyjny skieruj na obszar o niebieskim kolorze.Po ustawieniu parametrów pracy elektrokoagulacji użyj czystej miedzi jako materiału elektrody i stosuj zabieg trzustki przez dwie do trzech sekund, unikając naczyń krwionośnych. Kontynuuj elektrokrzepnięcie, aż obszar zabarwiony metylenem na niebiesko zmieni kolor na żółty lub brązowy. Gdy niebieski roztwór barwienia przestaje być widoczny w trzustce, zatrzymaj elektrokoagulację.Po operacji umieść mysz w pudełku z polietylenu wyłożonym materiałem na pościel. Po elektrokoagulacji przewodu trzustkowego znieczulaj mysz i umieść ją na platformie operacyjnej. Aby zebrać krew przez splot oczodołowy, delikatnie trzymaj skórę z tyłu, tworząc lekkie wypukłość gałki ocznej.Następnie umieść koniec rurki naczyniowatej w kąciku oka i delikatnie włóż ją pod gałkę oczną pod kątem 30 do 45 stopni. Obróć kapilarę, aż krew zacznie płynąć. Po zebraniu krwi zamknij powieki, delikatnie naciskając gazą.Wiruj krew w dawce 1 200g przez 15 minut i pobierz supernatant do nowej probówki. Mierz amylazę, bilirubinę i kwas hialuronowy za pomocą dostępnych komercyjnie zestawów, zgodnie z zaleceniami producenta. Następnie połóż uśpioną mysz na stole operacyjnym ustawionym na cztery stopnie Celsjusza.Za pomocą nożyczek i kleszczy wykonaj nacięcie w kształcie litery V w ścianie brzucha, aby odsłonić jamę brzuszną. Usuń trzustkę i podziel ją na trzy części do barwienia. Utrwalam trzustkę w roztworze 4% poli-formaldehydu, a następnie osadzam utrwaloną trzustkę w parafinie do sekcjonowania.Potnij bloki parafiny na sekcje o grubości 0,5 milimetra i barw je hematoksylyną i eozyną, a także barwieniem Massona do analizy immunohistochemicznej. Obserwuj zabarwioną tkankę trzustki pod mikroskopem świetlnym. Barwienie hematoksylinowo-eozynowe wykazało rozproszone komórki trzustki i dowody przewlekłego zapalenia trzustki w grupie elektrokoagulacyjnej w 14. dniu.W dniu 28 zaobserwowano oznaki regeneracji tkanek i odwrócenia patologii w komórkach acynarnych trzustki. Barwienie Massona wykazało istotnie więcej włóknienia w grupie elektrokoagulacyjnej niż w grupie pozorowanej. Barwienia immunohistochemiczne wykazały podwyższone poziomy alfa jedyn, kolagenu typu 1 oraz alfa w grupie elektrokoagulacyjnej, co wskazuje na wyższy stopień przewlekłego zapalenia trzustki.Poziom kwasu hialuronowego wzrósł w grupie elektrokoagulacyjnej, osiągając szczyt około 21. dnia, pozostając stabilny w grupie pozorowanej. Poziom bilirubiny znacząco wzrósł do 14. dnia w grupie elektrokoagulacyjnej, osiągając szczyt około 21. dnia, podczas gdy w grupie pozorowanej nie wykazywały żadnych zmian. Poziom amylazy w grupie elektrokoagulacyjnej gwałtownie wzrósł 14. dnia, a następnie spadł w 28. dniu, przy czym grupa pozorowana wykazywała niewielkie zmienności.

an-obstructive-chronic-pancreatitis-model-established-through

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Ten film opisuje procedurę generowania modelu myszy z ostrym żółciowym zapaleniem trzustki poprzez trzustkowy wlew taurocholanu sodu. Model ten pomaga badać zmiany patofizjologiczne wywołane przez taurocholan sodu w trzustce.

Model ostrego żółciowego zapalenia trzustki: metoda generowania mysiego modelu ostrego żółciowego zapalenia trzustki za pomocą infuzji z przewodu trzustkowego

Wśród przeszczepów narządów litych w jamie brzusznej, przeszczepy trzustki są podatne na poważne uszkodzenia przeszczepu związane z reperfuzją niedokrwienną, co ostatecznie prowadzi do wczesnej utraty przeszczepu. Protokół ten opisuje model przeszczepu trzustki u myszy przy użyciu techniki mankietu bez szwów, idealnie nadającej się do analizy tych wczesnych, szkodliwych uszkodzeń.

Mysi model do przeszczepu trzustki przy użyciu zmodyfikowanej techniki mankietowej

Robotyczna boczna pankreatykojejunostomia (RLPJ) może być stosowana u pacjentów z bolesnym, zależnym od morfiny, przewlekłym zapaleniem trzustki i rozszerzonym głównym przewodem trzustkowym. Opisujemy standaryzowaną i powtarzalną technikę RLPJ, która obejmuje przecięcie tętnicy żołądkowo-dwunastniczej.

Robotyczna boczna pankreatykojejunostomia w przewlekłym zapaleniu trzustki

Modele zwierzęce dla ciężkiego ostrego zapalenia trzustki umożliwiają badanie zmian patofizjologicznych na początkowym etapie, ułatwiając obserwację ewolucji zdarzeń zapalnych. Tutaj przedstawiamy protokół indukcji ciężkiego ostrego żółciowego zapalenia trzustki poprzez wsteczny wlew taurocholanu sodu do przewodu trzustkowego znieczulonych myszy C57BL / 6.

Taurocholan sodu wywołał ciężkie ostre zapalenie trzustki u myszy C57BL/6

W kontekście klinicznym, pacjenci z zlokalizowanym rakiem trzustki zostaną poddani pankreatektomii, a następnie leczeniu uzupełniającemu. Przedstawiony tutaj protokół ma na celu ustanowienie bezpiecznej i skutecznej metody modelowania tego scenariusza klinicznego u nagich myszy, poprzez ortotopową implantację raka trzustki, a następnie dystalną pankreatektomię i splenektomię.

Ortotopowy resekcyjny mysi model raka trzustki

Przewlekłe zapalenie trzustki (CP) to choroba charakteryzująca się stanem zapalnym i zwłóknieniem trzustki, często związana z nieuleczalnym bólem brzucha. Ten artykuł koncentruje się na udoskonaleniu techniki generowania mysiego modelu CP poprzez infuzję dróg żółciowych z kwasem 2,4,6-trinitrobenzenosulfonowym (TNBS).

Mysi model przewlekłego zapalenia trzustki poprzez infuzję TNBS z dróg żółciowych

Mysi model ciężkiego ostrego zapalenia trzustki jest opisany tutaj. Przedstawiona tutaj procedura jest bardzo szybka, prosta i dostępna, co potencjalnie pozwala na badanie mechanizmów molekularnych i różnych interwencji terapeutycznych w ostrym zapaleniu trzustki w wygodny sposób.

Ustanowienie mysiego modelu ciężkiego ostrego zapalenia trzustki przy użyciu wstecznego wstrzyknięcia taurocholanu sodu do przewodu żółciowo-trzustkowego

Dootrzewnowe podawanie leków jest bezpiecznym i skutecznym nieinwazyjnym sposobem na wywołanie uszkodzenia trzustki. W badaniu tym porównano pięć różnych protokołów wstrzyknięć dootrzewnowych na myszach w celu wywołania różnego stopnia uszkodzenia trzustki i ustanowiono model ciężkiego uszkodzenia trzustki w celu zbadania zmian patologicznych i strategii leczenia ciężkiego ostrego zapalenia trzustki (SAP).

Przygotowanie mysiego modelu ciężkiego ostrego zapalenia trzustki za pomocą kombinacji ceruleiny i lipopolisacharydu we wstrzyknięciu dootrzewnowym

W protokole przedstawiono metodę wykonania oszczędzającej miąższ robotycznej pankreatykojejunostomii bocznej przeznaczonej dla odpowiednio dobranych pacjentów z niedrożnością przewodu trzustkowego bez istotnego stanu zapalnego głowy trzustki. W tym artykule przedstawiono krytyczne aspekty operacji w minimalnie inwazyjny, zrobotyzowany sposób w leczeniu nawracającego ostrego/przewlekłego zapalenia trzustki.

Wspomagana robotycznie boczna pankreatykojejunostomia w przewlekłym zapaleniu trzustki

Padlinożercy mają potencjał do przenoszenia zakaźnych prionów gąbczastej encefalopatii w swoim kale do obszarów wolnych od chorób.  Szczegółowo opisujemy metody stosowane do określenia, czy priony trzęsawki przystosowane do myszy pozostają zakaźne po przejściu przez przewód pokarmowy wron amerykańskich (Corvus brachyrhynchos), powszechnego konsumenta martwych zwierząt.

Procedury identyfikacji zakaźnych prionów po przejściu przez układ pokarmowy gatunku ptaków

Poznaj model elektrokoagulacji przewodu trzustkowego u myszy do badania przewlekłego zapalenia trzustki. Ta metoda umożliwia analizę histologiczną i biochemiczną zmian w tkance trzustki.

Model obturacyjnego przewlekłego zapalenia trzustki ustanowiony poprzez elektrokoagulację

Przeglądaj więcej filmów