Test preferencji węchowych do pomiaru węchowych uprzedzeń hedonicznych w mysich modelach depresji

Negatywne nastawienie w przetwarzaniu emocji jest główną cechą zaburzeń depresyjnych. To odchylenie jest szczególnie interesujące dla lepszego zrozumienia fizjopatologii choroby. W tym miejscu proponujemy protokół wiarygodnej oceny wrodzonej oceny zapachu przy użyciu zapachów związanych z różną wartościowością zarówno w męskich, jak i żeńskich mysich modelach depresji.

Ocena błędu hedonicznego w modelach mysich jest niezbędna, zarówno w celu lepszej oceny indukowanego fenotypu depresyjnego, jak i jako narzędzie do badania mechanizmów neuronalnych stojących za tymi zmianami w przypisywaniu walencji. Ogólnie rzecz biorąc, protokół ten zapewnia nowe możliwości badań translacyjnych w celu zrozumienia mechanizmu leżącego u podstaw depresji i skuteczności leczenia. W przyszłości będziemy starali się rozszyfrować obwody mózgowe stojące za tymi zaburzonymi procesami emocjonalnymi i potencjalnymi mechanizmami specyficznymi dla płci, wraz z działaniem leków przeciwdepresyjnych na te szlaki.

Na początek przygotuj zestaw eksperymentalny z wykorzystaniem dwukomorowej areny o wymiarach 45 centymetrów na 50 centymetrów na 25 centymetrów z szarymi ścianami z pleksi i białą podłogą. Podziel arenę na dwie równe komory o wymiarach 25 centymetrów na 45 centymetrów, używając szarej ściany z pleksi o wymiarach 37 centymetrów na 25 centymetrów. Zabezpiecz perforowaną szalkę Petriego klejem i umieść je na dole ściany w każdej komorze.

Następnie użyj dwustronnego kleju lub Blu Tack, aby przymocować każdą szalkę Petriego pionowo do ściany areny. Następnie ustaw kamerę dwa metry nad areną, aby rejestrować zachowanie zwierząt i umożliwić automatyczne śledzenie ich ruchów przez cały czas trwania eksperymentu. Teraz podziel myszy na co najmniej dwie grupy eksperymentalne, myszy kontrolne i myszy z grupy testowej.

Przenieś każdą mysz do pokoju testów behawioralnych na 30 minut przed rozpoczęciem eksperymentu. Za pomocą luksomierza ustaw oświetlenie na arenie na około 40 luksów i sprawdź, czy oświetlenie jest równomiernie rozłożone. Następnie dodaj czystą bibułę filtracyjną o wymiarach 42,5 milimetra do każdej z dwóch szalek Petriego na arenie.

Pierwszego dnia delikatnie umieść wszystkie myszy z tej samej klatki na arenie na 10 minut, aby zmniejszyć neofobię. W dniu badania przygotować zapach w szklanej fiolce pod kapturem chemicznym, stosując odpowiednie rozcieńczenie. Rozcieńczyć nawaniacz w oleju mineralnym lub wodzie destylowanej w zależności od jego właściwości chemicznych.

Tuż przed przetestowaniem każdej myszy użyj mikropipety z końcówką filtrującą, aby zebrać 200 mikrolitrów roztworu zapachowego pod maską. Dozować roztwór na bibułę filtracyjną na jednej z szalek Petriego. Pozostawić drugą bibułę filtracyjną na drugiej szalce Petriego niepoddanej obróbce.

Przenieś szalki Petriego do pomieszczenia do badań. Następnie przymocuj je pionowo do ściany areny. Umieść każdą mysz osobno na arenie pośrodku między dwoma przedziałami.

Nagrywaj zachowanie przez 10 minut za pomocą kamery nad głową. Usuń mysz z areny po zakończeniu okresu obserwacji. Usuń zapachową szalkę Petriego z areny.

Następnie wyczyść arenę za pomocą 70% roztworu dezynfekującego etanolu i dokładnie ją wysusz. Wyrzuć zużytą bibułę filtracyjną i przygotuj następną próbkę zapachu dla następnej myszy. Użyj oprogramowania do automatycznego śledzenia, aby rejestrować pozycję myszy przez cały czas trwania testu.

Zdefiniuj odrębne strefy w obrębie areny na potrzeby analizy. Podczas habituacji wszystkie myszy spędzały co najmniej 50 sekund zarówno w strefie zapachowej, jak i kontrolnej, co wskazuje na odpowiednie zaangażowanie w zadania. Co ważne, myszy narażone na UCMS spędzały ten sam czas w strefie zapachowej co myszy z grupy kontrolnej.

Chociaż pewną różnicę można było zaobserwować w innych strefach. Samice myszy z grupy kontrolnej poruszały się znacznie więcej niż samice UCMS po wystawieniu na kontakt z moczem samca, ale nie podczas habituacji lub ekspozycji na TMT. Wszystkie odczyty odpowiedzi hedonicznej wskazują na znaczące różnice lub tendencję statystyczną między samicami z grupy kontrolnej a samicami z UCMS.

Efekt ten jest również widoczny dzięki Globalnemu Indeksowi Eksploracji Zapachu, który jest połączoną miarą odpowiedzi hedonicznej i lokomotorycznej. Indeks eksploracji zapachu dodatnio korelował z wynikiem emocjonalności zarówno moczu samca, jak i TMT u samic myszy. U samców myszy nie zaobserwowano żadnych różnic podczas habituacji ani w całkowitej odległości przebytej w teście.

Czas spędzony w strefie zapachowej wykazuje znaczne zmniejszenie ilości moczu samic i eksploracji TMT w UCMS w porównaniu z grupą kontrolną. Myszy UCMS wchodzą znacznie rzadziej w strefę zapachową lub mają tendencję do tego i wykazują znacznie obniżony wskaźnik preferencji zarówno dla moczu samic, jak i TMT. Indeks eksploracji zapachu pokazuje ujemnie zmienioną reakcję behawioralną na mocz samicy i TMT myszy UCMS w porównaniu z grupą kontrolną, która wydaje się być dodatnio skorelowana z wynikiem emocjonalności zwierzęcia.