Esta descreve uma cirurgia de ligadura parcial da carótida, o que causa as condições de fluxo perturbado e desenvolvimento da aterosclerose subsequente (em duas semanas) com intraplaca neo-vascularização (em quatro semanas) em ratos artéria carótida comum. Descrevemos também um novo método de isolamento de RNA a íntima carótida, proporcionando RNA de alta pureza endoteliais.
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Artigo de método
Um modelo de Disturbed Aterosclerose Flow-induzido em rato artéria carótida pela ligadura parcial e um método simples de isolamento de RNA a partir do endotélio Carótidas
Neste artigo
Resumo
Resumo
Apesar da conhecida associação perto, evidências diretas ligando fluxo perturbado a aterogênese tem faltado. Recentemente, usou uma versão modificada do carótida métodos de ligadura parcial [1,2] para mostrar que induz agudamente condições de baixo fluxo e oscilatório, duas características-chave do fluxo perturbado, no rato artéria carótida comum. Usando esse modelo, nós fornecemos evidências diretas de que o fluxo perturbado realmente leva ao desenvolvimento de aterosclerose rápido e robusto em apolipoproteína rato knockout E [3]. Também desenvolveu um método de preparação de RNA endotelial com elevado grau de pureza da carótida íntima do mouse [3]. Usando este modelo de mouse e método, encontramos que a ligadura parcial causa disfunção endotelial em uma semana, seguido pela formação de ateromas robusta e rápida em duas semanas em um modelo de camundongo hiperlipidêmicos, juntamente com recursos de formação de lesão complexa como a neovascularização intraplaca por quatro semanas. Essa rápida
Protocolo
1. Ligadura parcial da artéria carótida esquerda
- Mouses são utilizados em ~ 8 semanas de idade. O peso dos ratos é recomendado para ser pelo menos 18 gramas.
- Esterilizar os instrumentos para 30 segundo no esterilizador instrumento talão e deixe esfriar
- Induzir a anestesia com Ketamina (80mg/kg) e xilazina (10mg/kg) intraperitonial injeção (ip) ou alternativa anestesia aprovado pelo IACUC. Para injeção ip, injetar mouse no quadrante esquerdo baixo do abdômen.
- Colocar o mouse em uma câmara de aquecimento até que esteja completamente anestesiado. Verifique a profundidade da anestesia com resposta a pitada dedo do pé.
- Co....
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Discussão
Neste procedimento, a identificação adequada de todos os ramos da carótida comum, incluindo a carótida externa, carótida interna, artéria occipital e da artéria tireóidea superior é essencial. Também é importante verificar o padrão de fluxo com ultra-som, como demonstrado. Em nossas mãos experientes, nossa taxa de sucesso de cirurgias ligadura parcial com base nos estudos de ultra-som de mais de 500 ratos é melhor do que 90%. Para a carótida preparações íntima RNA, é importante prestar atenção à aparência da carótida ap.......
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Agradecimentos
Este trabalho foi financiado por recursos do NIH concede HL87012 (HJ), HL75209 (HJ), UO1HL80711 (DH, DG, HJ) e um World Class University Project (HJ) do Ministério da Ciência, Tecnologia e Educação de S. Korea.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Soro fisiológico (cloreto de sódio 0,9%) | Baxter Internationl Inc. | 2B1323 | |
| Seringa de insulina (seringa de 3/10 ml 29g) | Tyco Healthcare, Covidien | 8881600145 | |
| HBSS | Cellgro | 21-023 | |
| Kit miRNeasy mini (incluindo QIAzol) | Qiagen | 217004 | |
| Sistema de microimagem de alta resolução Vevo 770 | VisualSonics, inc. | a. Sistema Visualsonics 770 b. Estágio de imagem c. Sistema de trilho integrado Vevo d. Cabeçote de varredura RMV para camundongos | ou sistema semelhante |
| Sutura de seda 6-0, estéril | Covidien | s-1172 c2 | |
| Tesoura pequena | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5675 | ou similar |
| Pinça cirúrgica | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-5005 | ou similar |
| Tissue Mend II | Webster Veterinary | 07-856-7946 |
Referências
- Korshunov, V. A., Berk, B. C. Flow-induced vascular remodeling in the mouse: a model for carotid intima-media thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (12), 2185-2191 (2003).
- Sullivan, C. J., Hoying, J. B.
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Reimpressões e permissões
