Constrição aórtica transversais em ratos

Este procedimento começa anestesiando um camundongo, preparando-o para a cirurgia asséptica e colocando-o em decúbito dorsal em cima de uma almofada de aquecimento. A intubação endotraqueal é realizada usando tubo PE 90, que é então conectado a um ventilador de roedores. Em seguida, é realizada uma toracotomia parcial para a segunda costela e o esterno retraído.

A aorta transversa é identificada e posteriormente ligada entre as artérias carótida inominada e esquerda. A caixa torácica é fechada, seguida pela pele com um padrão de sutura contínuo. Finalmente, o tubo endotraqueal é removido e o camundongo pode se recuperar.

Olá, sou Angela Dal Meda, do laboratório do Dr. Zander Wars no Departamento de Fisiologia Molecular e Biofísica do Baylor College of Medicine. Hoje vamos mostrar a você procedimento para constrição aórtica transversa em camundongos. Usamos esse procedimento em nosso laboratório para estudar os mecanismos subjacentes à hipertrofia cardíaca e ao desenvolvimento de insuficiência cardíaca.

Então vamos começar. Antes de iniciar a constrição transversa da aorta ou cirurgia fiscal, desinfete o campo cirúrgico com álcool isopropílico a 75%. Ligue a almofada de aquecimento e ajuste-a na temperatura certa.

O sistema que recomendamos é uma bomba de água circulante gamer conectada a uma almofada de terapia de calor que é mantida a 37 mais ou menos um grau Celsius. Esterilize as ferramentas cirúrgicas em um esterilizador de esferas quentes antes da cirurgia. Para o procedimento cirúrgico fiscal, são necessários os seguintes instrumentos cirúrgicos.

Uma tesoura sem corte, duas pinças curvas grosseiras para encontrar pinças angulares de 45 graus, uma tesoura de mola angular, um afastador de tórax e um porta-agulha. Aplicadores de algodão também devem estar à mão em caso de sangramento. Com o campo operatório preparado, podemos proceder à intubação do rato.

Em preparação para a intubação, o camundongo é anestesiado em uma câmara de indução e máquinas de cortar cabelo são usadas para raspar o pelo da linha do pescoço até o meio do peito. Coloque o mouse em decúbito dorsal em cima da almofada de aquecimento. É importante manter a temperatura corporal normal durante a cirurgia para evitar uma rápida diminuição da frequência cardíaca e possível morte súbita.

Aplique pressão no leito ungueal do mouse para confirmar se o mouse está totalmente anestesiado. Coloque um elástico sobre os dentes da frente do animal para estender o pescoço Usando uma pinça curva em uma mão, manipule suavemente a língua para o lado com a outra mão. Insira o tubo PE 90 na traqueia.

Em seguida, conecte o tubo endotraqueal a um ventilador de roedores com ciclo de volume Harvard. O ventilador deve estar circulando a 125 a 150 respirações por minuto e um volume corrente de 0,1 a 0,3 mililitros, dependendo do peso corporal do camundongo, desinfetar a pele dentro do campo cirúrgico com solução de Betadine seguida de álcool a 70%. Repita este procedimento três vezes para evitar a contaminação do campo cirúrgico durante a operação, coloque uma cortina estéril sobre o mouse, deixando apenas o campo de operação exposto.

Agora estamos prontos para realizar a ligadura da aorta transversa durante este procedimento cirúrgico. A anestesia é mantida a 1,5 a 2% de flúor com 0,5 a um litro por minuto, 100% de oxigênio. Verifique o nível correto de anestesia aplicando pressão no leito ungueal do camundongo.

Para confirmar a ausência do reflexo simbólico. Comece a cirurgia realizando uma toracotomia parcial. Corte o esterno começando na extremidade cranial até o nível da segunda costela.

Usando um microscópio cirúrgico, retraia o esterno usando um afastador de tórax. Em seguida, use uma pinça angular de 45 graus com ponta fina para separar suavemente o timo e o tecido adiposo do arco aórtico. Após identificar a aorta transversa, coloque um pequeno pedaço de sutura de seda 6.0 entre as artérias denominada e carótida esquerda.

Dê dois nós soltos ao redor da aorta transversa e coloque um pequeno pedaço de uma agulha romba de calibre 27 e meio. Paralelo à aorta de transferência. Amarre rapidamente o primeiro nó contra a agulha, seguido pelo segundo nó e, em seguida, remova imediatamente a agulha para obter uma constrição de 0,4 milímetros de diâmetro.

Uma vez que a aorta transversa tenha sido ligada, remova o afastador torácico e aperte a saída do ventilador por dois segundos. Para reinflar cuidadosamente os pulmões, feche a caixa torácica usando uma sutura de prolina 6.0 com um padrão de sutura interrompido. Por fim, feche a pele usando uma sutura de prolina 6.0 com um padrão de sutura contínuo.

Para analgesia pós-operatória. Injete buprenorfina no camundongo por via intraperitoneal. Se houver sinais de desidratação após a cirurgia, 0.3 a um mililitro de solução salina estéril é administrado por via intraperitoneal.

Abaixe gradualmente a anestesia para a posição desligada. Quando ocorrerem sinais de respiração espontânea, remova o tubo endotraqueal, mova o mouse para a posição de bruços e deixe-o se recuperar em uma almofada de aquecimento. Uma semana após a constrição transversa da aorta, o camundongo é reanestesiado para determinar o grau de sobrecarga de pressão induzida pela lação da aorta transversa.

A anestesia e a temperatura corporal são mantidas conforme mostrado anteriormente. Coloque uma sonda Doppler de 20 megahertz nos lados esquerdo e direito do pescoço em um ângulo de 45 graus. Para detectar as velocidades de fluxo da artéria carótida, usamos um processador de sinal Doppler baseado em computador para exibir e armazenar sinais Doppler.

Dependendo do grau de sobrecarga de pressão necessário para o protocolo experimental, apenas camundongos com uma taxa de fluxo carotídea direita ou RC sobre carótida esquerda ou lc dentro de um determinado intervalo são incluídos para análise posterior. Por exemplo, um grau moderado de sobrecarga de pressão leva a uma proporção de cinco para oito, enquanto uma constrição mais apertada resultando em sobrecarga de pressão severa leva a uma proporção de oito para 10. Espera-se que um animal simulado, no entanto, tenha uma proporção de cerca de um.

A sobrevida cirúrgica típica após TAC em camundongos do tipo selvagem é de cerca de 80 a 90% de sucesso. A ligadura cirúrgica da aorta transversa levará a uma relação de velocidade de fluxo doppler entre a artéria carótida direita e esquerda ou RC sobre lc de cinco a 10 em comparação com camundongos operados de forma simulada. Espera-se que camundongos com sobrecarga de pressão desenvolvam hipertrofia cardíaca dentro de uma a duas semanas e dilatação cardíaca após seis a oito semanas, dependendo do aperto da constrição.

Acabamos de mostrar como realizar a constrição aórtica transversa em camundongos, mas realizar esse procedimento é importante para manter a temperatura corporal normal e minimizar a perda de sangue. Então é isso. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.