Constrição aórtica transversais em ratos

Este procedimento começa com a anestesia de um camundongo, o preparo para cirurgia asséptica e a colocação na posição supina sobre uma placa aquecida. A intubação endotraqueal é realizada utilizando tubo PE 90, que então é conectado a um ventilador para roedores. Em seguida, realiza-se uma toracotomia parcial até a segunda costela e retrai-se o esterno.

A aorta transversa é identificada e posteriormente ligada entre as artérias inominada e carótida esquerda. A caixa torácica é fechada, seguida pela pele com um padrão de sutura contínua. Por fim, o tubo endotraqueal é removido e o camundongo é deixado em recuperação.

Olá, sou Angela Dal Meda do laboratório do Dr. Zander Wars, do Departamento de Fisiologia Molecular e Biofísica do Baylor College of Medicine. Hoje vamos mostrar a vocês o procedimento de constrição aórtica transversa em camundongos. Utilizamos este procedimento em nosso laboratório para estudar os mecanismos subjacentes ao desenvolvimento da hipertrofia cardíaca e da insuficiência cardíaca.

Então vamos começar. Antes de iniciar a constrição aórtica transversa ou cirurgia tax, desinfete o campo operatório com álcool isopropílico a 75%. Ligue o tapete aquecedor e ajuste-o à temperatura adequada.

O sistema que recomendamos é uma bomba de água circulatória para jogos conectada a uma almofada de terapia térmica mantida a 37 mais ou menos um grau Celsius. Esterilize os instrumentos cirúrgicos em um esterilizador de contas quentes antes da cirurgia. Para o procedimento cirúrgico de retirada de tecido, são necessários os seguintes instrumentos cirúrgicos.

Uma tesoura romba, duas pinças curvas grossas para localizar pinças em ângulo de 45 graus, um par de tesouras em ângulo com mola, um retrator torácico e um porta-agulhas. Aplicadores de algodão também devem estar à mão em caso de sangramento. Com o campo cirúrgico preparado, podemos prosseguir para a intubação do camundongo.

Em preparação para a intubação, o camundongo é anestesiado em uma câmara de indução e tesouras elétricas são usadas para raspar os pelos da linha do pescoço até o nível do tórax médio. Coloque o camundongo em posição supina sobre o tapete aquecido. É importante manter a temperatura corporal normal durante a cirurgia para evitar uma diminuição rápida da frequência cardíaca e possível morte súbita.

Aplicar pressão sobre o leito ungueal do camundongo para confirmar que o animal está completamente anestesiado. Colocar uma tira de borracha sobre os dentes da frente do animal para estender o pescoço. Com uma pinça curva em uma das mãos, manipular suavemente a língua para o lado com a outra mão. Inserir o tubo de PE 90 na traqueia.

Em seguida, conecte o tubo endotraqueal a um ventilador de roedores com ciclo volumétrico Harvard. O ventilador deve operar entre 125 e 150 ciclos por minuto, com um volume corrente de 0,1 a 0,3 mililitros, dependendo do peso corporal do camundongo. Desinfete a pele dentro do campo cirúrgico com solução de Betadine, seguida por álcool 70%. Repita este procedimento três vezes para prevenir contaminação do campo cirúrgico durante a operação e coloque um campo estéril sobre o camundongo, deixando exposto apenas o local da cirurgia.

Agora estamos prontos para realizar a ligadura da aorta transversa durante este procedimento cirúrgico. A anestesia é mantida entre 1,5 e 2% de isoflurano com oxigênio a 0,5 a um litro por minuto, 100%. Verifique o nível correto de anestesia aplicando pressão sobre a polpa da unha do camundongo.

Para confirmar a ausência do reflexo do token. Inicie a cirurgia realizando uma toracotomia parcial. Corte o esterno começando pela extremidade craniana até o nível da segunda costela.

Usando um microscópio cirúrgico, retrair o esterno com um afastador torácico. Em seguida, usar uma pinça fina com ponta em ângulo de 45 graus para separar suavemente o timo e o tecido adiposo do arco aórtico. Após identificar a aorta transversa, colocar um pequeno pedaço de sutura de seda 6,0 entre as artérias anônima e carótida esquerda.

Faça dois nós soltos ao redor da aorta transversa e posicione um pequeno pedaço de uma agulha romba de calibre 27 e meio paralelamente à aorta de transferência. Amarre rapidamente o primeiro nó contra a agulha, seguido pelo segundo nó, e então remova imediatamente a agulha para obter uma constrição de 0,4 milímetros de diâmetro.

Uma vez que a aorta transversa tiver sido ligada, remova o afastador torácico e pinça o fluxo de saída do ventilador por dois segundos. Para reinflar cuidadosamente os pulmões, feche a caixa torácica usando uma sutura de prolen 6,0 com padrão de sutura interrompido. Finalmente, feche a pele usando uma sutura de prolen 6,0 com padrão de sutura contínuo.

Para analgesia pós-operatória. Injetar o camundongo por via intraperitoneal com buprenorfina. Se houver sinais de desidratação após a cirurgia, administrar de 0,3 a um mililitro de solução salina estéril por via intraperitoneal.

Reduza gradualmente a anestesia até a posição desligada. Quando ocorrerem sinais de respiração espontânea, remova o tubo endotraqueal, em seguida posicione o camundongo em decúbito ventral e permita que se recupere sobre uma placa aquecida. Uma semana após a constrição aórtica transversa, o camundongo é reanestesiado para determinar o grau de sobrecarga de pressão induzida pela constrição da aorta transversa.

A anestesia e a temperatura corporal são mantidas conforme demonstrado anteriormente. Posicione uma sonda Doppler de 20 megahertz nos lados esquerdo e direito do pescoço em um ângulo de 45 graus. Para detectar as velocidades do fluxo sanguíneo na artéria carótida, utilizamos um processador de sinal Doppler baseado em computador para exibir e armazenar os sinais Doppler.

Dependendo do grau de sobrecarga de pressão necessário para o protocolo experimental, apenas camundongos com uma razão entre o fluxo da carótida direita ou RC e o da carótida esquerda ou LC dentro de uma determinada faixa são incluídos para análises posteriores. Por exemplo, um grau moderado de sobrecarga de pressão resulta em uma razão de cinco a oito, enquanto uma constrição mais acentuada, resultando em sobrecarga de pressão grave, leva a uma razão de oito a 10. Um animal submetido a procedimento simulado, no entanto, deve apresentar uma razão de aproximadamente um.

A sobrevida cirúrgica típica após TAC em camundongos selvagens é de cerca de 80 a 90% bem-sucedida. A ligadura cirúrgica da aorta transversa levará a uma razão de velocidade do fluxo Doppler entre a artéria carótida direita e a esquerda, ou RC sobre LE, de cinco a dez em comparação com camundongos submetidos a cirurgia simulada. Espera-se que camundongos com sobrecarga de pressão desenvolvam hipertrofia cardíaca dentro de uma a duas semanas e dilatação cardíaca após seis a oito semanas, dependendo do grau de constrição.

Acabamos de mostrar como realizar a constrição aórtica transversa em camundongos, mas é importante manter a temperatura corporal normal e minimizar a perda sanguínea durante este procedimento. É isso aí. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.