Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:49 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa multipoços com filtros na base.
Adicione uma amostra de teste contendo citocinas diferentes.
Adicione diferentes conjuntos de microesferas diferenciadas por tamanho e intensidade de fluorescência interna.
Cada conjunto é conjugado a um anticorpo direcionado a uma citocina específica.
Incube a placa no escuro sob agitação.
Os anticorpos se ligam às citocinas-alvo, imobilizando-as nas microesferas.
Aplique um vácuo para remover as citocinas não ligadas. As citocinas ligadas à microesfera são retidas devido ao menor tamanho dos poros da membrana.
Adicione um coquetel de anticorpos de detecção conjugados com biotina que se ligam às citocinas ligadas à microesfera.
Adicione uma estreptavidina fluorescente conjugada com repórter e incube no escuro sob agitação. A estreptavidina se liga à biotina, imobilizando o repórter no complexo da microesfera.
Remova as moléculas não ligadas e ressuspenda as microesferas.
Usando citometria de fluxo, identifique as citocinas ligadas determinando o tamanho e a fluorescência interna das microesferas.
Para determinar a quantidade de uma citocina específica, meça a intensidade de fluorescência do repórter.
Para realizar o ensaio, deixe tod
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