Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
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Comece com soro humano diluído em série contendo concentrações variadas de anticorpos neutralizantes contra o coronavírus 2 da síndrome respiratória aguda grave ou SARS-CoV-2.
Introduzir vírus pseudotipados com RNA de luciferase, integrase e transcriptase reversa, encapsulados em uma bicamada lipídica contendo proteínas spike SARS-CoV-2.
Os anticorpos neutralizam os vírus com base na diluição do soro, com diluições mais baixas exibindo neutralização máxima.
Introduzir células-alvo que expressam receptores da enzima conversora de angiotensina-2 ou receptores ACE2 e protease transmembrana serina-2 ou TMPRSS2.
Em diluições séricas mais altas, os vírus não neutralizados interagem com os receptores ACE2, enquanto TMPRSS2 cliva a proteína spike, permitindo a fusão do vírus.
Após a entrada, o RNA da luciferase é transcrito reversamente para o DNA que se integra ao genoma do hospedeiro e produz a enzima luciferase.
Substitua o meio por um tampão de ensaio contendo substrato de luciferase e um agente de lisagem.
As células se lisam, liberando luciferase intracelular, que interage com o substrato e produz alta luminescência.
Quantifique a luminescência nas diluições de soro para determinar a
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