Isolamento de vários tipos de células de um cérebro de camundongo por homogeneização mecânica

Comece colocando os componentes do moedor de lenços de papel no gelo. Este dispositivo inclui um almofariz e dois pilões de diâmetros diferentes.

Despeje um tampão de sal resfriado na argamassa e, em seguida, adicione tecido cerebral de camundongo.

O tampão mantém o equilíbrio osmótico, preservando a estrutura e a função celular.

Triture o tecido com vários movimentos suaves usando o pilão de menor diâmetro, que corta mecanicamente o tecido em pedaços menores.

Em seguida, acaricie com o pilão de diâmetro maior, facilitando a quebra do tecido em suas células componentes.

Transfira a mistura para um tubo e centrifugue.

Remova o sobrenadante.

Adicione tampão de sal resfriado e vórtice para quebrar os aglomerados de células e a mielina.

Em seguida, adicione um meio de gradiente de densidade e centrifugue.

Devido às diferenças de forma e massa, as células se acomodam na camada inferior, enquanto os detritos e a mielina se acumulam na camada superior.

Descarte o sobrenadante.

Adicione uma solução adequada para obter uma suspensão de células múltiplas para uso posterior.

Para homogeneização de tecidos, adicione 3 mililitros de HBSS pré-resfriado à argamassa de vidro pré-resfriada de um mo