Isolamento de células mononucleares do cérebro de camundongos: uma técnica de centrifugação por gradiente de densidade para isolar células mononucleares residentes no cérebro
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 4:11 min. • April 30th, 2023
As células mononucleares no cérebro, compreendendo linfócitos e monócitos, desempenham papéis cruciais na manutenção da função cerebral e da homeostase.
Para isolar essas células mononucleares, primeiro pegue um cérebro de camundongo recém-colhido perfundido com solução salina.
A perfusão permite a remoção do sangue e seus componentes dos vasos sanguíneos, permitindo o isolamento das células imunes residentes no cérebro nas etapas subsequentes.
Agora, enxágue o cérebro com meios adequados para remover os glóbulos vermelhos aderentes. Siga o enxágue com picadas para adquirir pequenos pedaços de tecido.
Homogeneizar os pedaços de tecido para obter uma suspensão de células individuais e fragmentos de células.
A esta suspensão, adicione meio resfriado e meio de gradiente de densidade adequado em volumes apropriados para formar um meio de gradiente de baixa densidade.
Em seguida, adicione um volume específico de um meio gradiente de alta densidade; a mídia gradiente de alta densidade forma uma camada separada na parte inferior, criando um gradiente de densidade descontínuo.
Centrifugue a suspensão em condições de alta velocidade e baixa temperatura. As células mononucleares ocupam a int
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