Isolamento e Cultura de Células de Telencéfalos Dorsolaterais de Embriões de Camundongos

Pegue um embrião de camundongo em um tampão e separe o crânio para isolar o cérebro.

Remova as meninges, a camada membranosa que cobre o cérebro.

Disseque o cérebro para separar os hemisférios.

Isole os telencéfalos dorsolaterais dos hemisférios e transfira-os para um tubo.

Os telencéfalos dorsolaterais são ricos em neurônios e células progenitoras neurais.

Centrifugue e remova o sobrenadante.

Adicione uma solução enzimática. As enzimas quebram a matriz do tecido, soltando as células.

Introduzir um meio de proliferação contendo soro. As proteínas séricas inibem a atividade enzimática.

Use uma pipeta para dissociar mecanicamente o tecido, formando uma suspensão celular.

Centrifugue e remova o sobrenadante contendo enzimas inativadas e detritos teciduais.

Ressuspenda as células no meio de proliferação.

Transfira as células para uma microplaca revestida com substrato de cultura de células.

Incubar para que as células adiram ao substrato. O meio facilita a proliferação de células progenitoras.

Comece removendo os cérebros de 5 a 10 embriões E14 em uma placa de Petri com meio de dissecação a frio. Use uma pinça para retirar cuidadosamente a pele e o crânio e isolar os cérebros. Ao traba