Imagem e quantificação de agregados de proteínas em cérebros de drosófilas geneticamente modificadas

Comece com cérebros de Drosophila geneticamente modificados. Esses cérebros expressam uma proteína mutante vermelha marcada com fluorescência no neurônio que pode se espalhar para a célula glial circundante, expressando a proteína normal amarela marcada com fluorescência, causando sua agregação.

Adicione uma solução fixadora que preserve a integridade celular.

Remova o fixador e lave com um tampão.

Adicione um reagente antidesvanecimento e incube para evitar o desbotamento dos sinais fluorescentes.

Transfira o cérebro para uma lâmina e remova o excesso de líquido.

Permita que os cérebros adiram ao slide.

Usando pequenos pedaços de uma lamínula como espaçadores, coloque uma lamínula em cima deles. Adicione o reagente antidesbotamento e sele-o.

Sob um microscópio confocal, capture imagens usando diferentes comprimentos de onda de excitação para fluorescência vermelha e amarela.

Usando um software de análise de imagem, quantifique os agregados de proteínas.

A co-localização da fluorescência vermelha e amarela indica a disseminação de proteínas mutantes.

Depois que todos os cérebros forem dissecados, transfira o tubo de coleta para um nutador em temperatura ambiente e balance-os por ce