Imagem de fluorescência ao longo da vida da agregação de proteínas PolyQ em neurônios de Caenorhabditis elegans

Comece com vermes Caenorhabditis elegans anestesiados, pareados por idade, com deficiência de chaperona.

Ambos os grupos expressam proteínas poliQ marcadas com fluoróforo em seus neurônios que são propensas a dobramentos incorretos.

Em vermes de controle, as proteínas chaperonas limitam a agregação de poliQ mal dobrada, enquanto, em vermes deficientes em chaperonas, o poliQ mal dobrado forma prontamente agregados.

Coloque a lâmina de controle em uma platina de microscópio confocal para Microscopia de Imagem de Fluorescência (FLIM).

Ilumine os vermes usando um laser pulsado.

O laser excita o fluoróforo, que emite um fóton à medida que retorna ao estado fundamental.

O

FLIM mede a vida útil da fluorescência - a duração em que o fluoróforo permanece em seu estado excitado.

Em vermes deficientes em chaperonas, a agregação polyQ agrupa fluoróforos, promovendo a transferência de energia entre fluoróforos adjacentes em vez da emissão de fótons, reduzindo assim o tempo de vida da fluorescência.

O software FLIM processa esses tempos de vida para gerar mapas codificados por cores, permitindo a visualização da agregação.

Um tempo de vida de fluorescência reduzido em vermes deficientes em chapero