Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:51 min. • June 17th, 2025
Comece com uma configuração de microscópio de fluorescência de reflexão interna total (TIRF) com uma câmara de imagem coberta contendo uma lamínula de vidro com células de neuroblastoma humano aderidas em um tampão.
Essas células expressam fluoróforos específicos das membranas das vesículas sinápticas.
No modo de epifluorescência, selecione uma célula para imagem.
No modo TIRF, através da objetiva, direcione um laser para a amostra, aparecendo como um ponto na tampa.
Ajuste o ângulo para exceder o ângulo crítico na interface entre a lamínula de vidro de alto índice de refração e a amostra de índice de refração mais baixo, causando reflexão interna total (TIR), vista como uma linha fina.
O TIR gera uma onda evanescente que excita os fluoróforos na membrana mais próxima.
A fluorescência emitida é coletada pela objetiva e capturada por uma câmera.
Ajuste fino para obter uma imagem de alto contraste da membrana celular perto da lamínula.
Otimize as configurações de aquisição para minimizar o fotobranqueamento e definir a frequência de amostragem.
Comece a imagem TIRF para visualizar vesículas sinápticas fundidas.
No modo de epifluorescência, concentre-se na lamínula e escolha as células transfe
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