O Uso de cistometria em pequenos roedores: Um Estudo de Chemosensation Bexiga

O objetivo deste procedimento é determinar a influência de compostos químicos no armazenamento e nas funções miccionais da bexiga. Isso é feito implantando primeiro um cateter na bexiga. Após um breve período de recuperação, uma solução de controle é infundida através do cateter por 30 minutos.

À medida que a pressão intravesical e o volume miccional são registrados por mais 30 minutos, o animal é infundido com um composto de interesse. Em última análise, os resultados podem mostrar como os produtos químicos irritantes também apresentam o padrão miccional por meio da análise da frequência miccional. A principal vantagem dessa técnica sobre os métodos existentes, como o registro da contratilidade da bexiga isolada, é que a função desse órgão pode ser estudada em condições mais fisiológicas.

Por exemplo, as ações reguladoras do sistema nervoso central são preservadas. A demonstração visual desse método é fundamental, pois as etapas da cirurgia são difíceis de aprender porque há uma série de detalhes técnicos e manobras que devem ser observados para garantir o sucesso do experimento. Para preparar o tubo que você deseja implantar na bexiga primeiro, corte um tubo PE 50 no comprimento desejado e coloque um pequeno pedaço branco de cateter de calibre 18 sobre o cateter principal.

Em seguida, crie um pequeno manguito na extremidade flamejando uma extremidade do tubo e lave-o com solução salina para esvaziar o ar. Agora induza a anestesia em uma rata de 10 a 12 semanas de idade com flúor isof. Após a indução da anestesia, defina o nível de manutenção do flúor isof.

Posicione o animal de costas e coloque uma pequena máscara de anestesia feita de uma seringa de 10 cc. Depois de raspar o abdômen e desinfetar a derme, prossiga com a cirurgia. A cirurgia a seguir é realizada em ratos e camundongos da mesma maneira.

Comece realizando uma laparotomia da linha média inferior para expor a bexiga. Em seguida, começa a parte mais crítica da cirurgia. Sob um microscópio cirúrgico, coloque uma sutura de cordão de bolsa na cúpula da bexiga usando sutura de monofilamento seis zero não absorvível.

Em seguida, usando uma agulha, faça uma pequena cistostomia dentro do cordão da bolsa. Insira o cateter PE 50 com balonete através deste orifício. Tubos de cateter mais finos, como o PE 10, podem ter uma resistência maior e mais variável, por isso não são recomendados.

Prenda o cordão da bolsa ao redor do tubo usando um nó de cirurgião. Em seguida, puxe suavemente o cateter para fora até que a ponta do balonete esteja diretamente sob a sutura. O pedaço de cateter de calibre 18 é empurrado em direção à sutura para evitar vazamentos.

Verifique se há vazamentos entre o cateter e a bexiga. Com uma infusão suave de solução salina. Aperte quaisquer vazamentos com suturas adicionais.

Agora, feche os músculos abdominais usando suturas de monofilamentos, deixando uma passagem para o cateter na parte superior da incisão. Tunelamente o cateter na região interescapular usando uma haste de metal oca, evitando assim que os animais mordam o tubo. Após a cirurgia, a haste de metal deve ser colocada sob a pele e acima dos músculos abdominais e dorsais.

Empurre a haste através do animal subcutaneamente até a região interescapular. Complete a cirurgia fechando os músculos abdominais e a pele com suturas monofilamentares não absorvíveis. Agora é muito importante verificar a permeabilidade e estabilidade do cateter implantado, lavando-o com solução salina.

A solução de infusão deve sair da bexiga, disparar a uretra. Após administrar o analgésico por via subcutânea, feche a extremidade externa do cateter com um filme plástico e ancore o cateter na pele da região lombar do rato. Por fim, deixe o animal se recuperar por 30 minutos.

Antes de iniciar a citometria, certifique-se de que os instrumentos foram calibrados corretamente. Coloque o rato em uma gaiola metabólica acima de um recipiente contendo óleo que repousa sobre uma balança digital. O próximo passo é conectar o cateter implantado a uma torneira de três vias por meio de um toco de isca.

A torneira deve ser conectada ao transdutor de pressão e a uma bomba de infusão. O transdutor de pressão é conectado por meio de um amplificador ao sistema de aquisição de dados, e um computador que utiliza software disponível publicamente inicia as medições de controle iniciando a bomba de infusão para instilar solução salina na bexiga. Durante um período de 30 minutos, a gaiola metabólica é suspensa sobre uma balança digital, que é usada para estimar o volume miccional do rato.

A pressão intravesicular é registrada à medida que a bexiga se enche e se esvazia. Na próxima etapa, os medicamentos podem ser administrados sistemicamente ou intravesical em mais 30 minutos de coleta de dados. Quando o experimento estiver concluído, o animal deve ser sacrificado.

Um traço de pressão típico de um rato mostra que, durante a infusão de fluidos, há um acúmulo lento de pressão na bexiga até que um certo limite seja atingido. Em seguida, a bexiga se contrairá e o esfíncter urinário se abrirá, permitindo a passagem da solução instilada pela uretra. Como tal, a bexiga é esvaziada.

A contração irá parar e a pressão cairá novamente para o nível basal. Os dados coletados de um mouse têm todos os mesmos recursos. A citometria foi usada para identificar os alvos moleculares do óleo de mostarda ou mo MO é um composto altamente reativo que tem sido usado há muito tempo em modelos experimentais de inflamação e hiperalgesia de órgãos viscerais, como a bexiga urinária.

Como esperado, uma infusão intravesical de MO 10 milimolar induziu uma forte diminuição no intervalo contrátil em camundongos do tipo selvagem. Curiosamente, camundongos deficientes do receptor DE MO T RPA A tiveram um resultado semelhante aos tipos selvagens nas mesmas condições. Em contraste, o MO induziu uma mudança muito mais fraca nos parâmetros sistétricos em um camundongo knockout TRP V one do que em knockouts duplos de camundongos do tipo selvagem de TRPA um e TRP V um quase não responderam à dose de M mo.

Os dados sugerem que o TRP V pode desempenhar um papel fundamental na irritação visceral induzida por mo. A frequência miccional instantânea média antes e durante a infusão intravesical de MO apóia esses dados. A frequência média é relativa a uma infusão de solução salina.

Ao tentar este procedimento, é importante garantir que o cateter permaneça firmemente preso à bexiga para que não haja vazamento da solução de infusão no abdômen. Depois de assistir a este vídeo, deve ter um bom entendimento de como medir a pressão intravesical, o que implica o implante de cateter na bexiga e a colocação de animais acordados ou anestesiados em estágio de citometria sob profusão controlada da bexiga.