Name: O Uso de cistometria em pequenos roedores: Um Estudo de Chemosensation Bexiga (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-21T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: Aprenda a técnica de cistometria em pequenos roedores para avaliar a função vesical in vivo, medindo pressão intravesical e volume urinário. Este método permite estudar o enchimento e esvaziamento da bexiga em condições fisiológicas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabalho foi suportado por concessões do Governo federal belga (IUAP P6/28), a Fundação de Pesquisa de-Flandres (FWO) (G.0565.07 e G.0686.09), o Prêmio Fundação Europeia Astellas 2009 e do Conselho de Pesquisa da KU Leuven (GOA 2009/07, e EF/95/010 PFV/10/006). PU e WE são bolsistas de doutorado da Fundação de Pesquisa de-Flandres (FWO). MB é um companheiro Marie Curie. DDR companheiro fundamental clínica do FWO.

1. Animais de Laboratório <ol><li> Os animais (ratos, ratazanas) estão alojados numa instalação para animais com um especializado 12 horas de ciclo claro-escuro e acesso ad libitum a água e alimentos granulados convencionais. Tanto a idade e sexo do animal, são parâmetros importantes, que devem ser normalizadas, de acordo com as necessidades. Nós normalmente executam cistometria em 10 - 12 semanas de idade fêmeas 5,6. </li><li> Todos os experimentos com animais são realizadas de acordo com as orientações comunitárias da União Europeia do Conselho e aprovado pelo comitê de ética local. </li></ol> 2. Anestesia <ol><li> Anestesia com isoflurano é utilizado para a realização de pequenas intervenções cirúrgicas, uma vez que é fácil de dose devido ao seu curto tempo de meia-vida. Gás adequado de lixo de limpeza é necessário quando se utiliza o isoflurano. <ol class="lalpha"><li> Os animais são colocados dentro de uma caixa fechada, gaseificada com 5% de isoflurano em oxigénio puro (1 l / min). </li><li> Após indução da anestesia, a l apropriadaevel é mantido por uma pequena máscara (um corte seringa de 10 ml) por 0,8-1 l / min de oxigénio com 1 - 1,5% de isoflurano. </li></ol></li><li> Para ratos, anestesia com uretana é usado durante as gravações funcionais (cfr. Infra). Anestesia com uretana é utilizado durante a gravação funcionais, porque, em contraste com a maioria dos outros tipos de anestésicos, o reflexo de micção não é suprimida por este agente anestésico 4. Uretano 1,2 g de peso corporal / kg é administrada por via subcutânea (sc) 60 min antes do início da gravação. Se necessário, a dose de uretano necessária para a obtenção de anestesia adequada pode ser ajustada através da administração de doses de reforço (0,1 g / kg), por via subcutânea. Deve-se notar, no entanto, que a anestesia adicional pode alterar a eficiência de esvaziamento e, consequentemente, a frequência de micção 7,8. Assim, as gravações cistométrica devem ser cuidadosamente monitorizados e descartados sempre que desvios significativos do comportamento de controle são observados. Anestésicos não deve ser administrado durante o testeOs compostos são aplicados para evitar uma má interpretação dos dados. </li></ol> 3. Procedimento cirúrgico - Implantação do Cateter Bexiga <ol><li> Os instrumentos cirúrgicos são esterilizados em autoclave antes da sua utilização. Raspar o abdômen do animal, desinfectar com álcool 70% e executar uma laparotomia mediana baixo para expor a bexiga. </li><li> Sob um microscópio cirúrgico, colocar uma sutura em bolsa na cúpula da bexiga com uma sutura não absorvível, monofilamentos (tamanho 6-0). </li><li> Realizar uma cistostomia pequenos (preferencialmente utilizar um agulha 18 G) no interior do fio de bolsa e inserir um cateter de polietileno PE 50, com uma pequena braçadeira no final (obtido aquecendo com cuidado a tubagem) através deste orifício. Nas nossas mãos, os tubos mais finos (PE 10) ter uma resistência mais elevada e mais variável. A tubagem pode ser desinfectado, colocando-o em uma solução de etanol a 70% ou esterilizados em autoclave. Antes da implantação, a tubagem deve ser lavada com solução salina. </li><li> Fixe o str bolsação em torno do tubo, com um nó cirurgião. Puxar o cateter delicadamente para fora, até que a ponta em forma de sino é posicionado logo abaixo da sutura. Empurrar um pedaço de 18 G para o cateter de sutura para evitar fugas. </li><li> Infundir um pequeno volume de solução salina (100 - 200 ul) com cuidado para verificar a existência de fugas. Se os vazamentos estão presentes, uma sutura adicional deve ser colocado. </li><li> Feche os músculos abdominais, utilizando suturas de monofilamento, deixando uma passagem para o cateter na parte superior da incisão. </li><li> Túnel do tubo na região interescapular usando uma haste oca de metal, evitando assim os animais para morder o tubo durante a experiência. </li><li> A pele é fechada com fios não absorvíveis, monofilamentos. O cateter de implante é lavado com solução salina para verificar a sua permeabilidade. </li><li> Antes de os animais acordar, analgésicos são administradas por via subcutânea (buprenorfina, 0,05 mg / kg). </li></ol> 4. Configuração e cistometria <ol><li> Dependendo do questi experimentalem (e das espécies utilizadas) é realizada de cistometria acordada (retenção ou incontinência) ou de uretano-anestesiadas animais. Considerando cistometria é perfeitamente viável em ratos conscientes, que tendem a manter a calma em um ambiente contido, que normalmente executam cistometria sob anestesia com uretana (1,2 mg / kg, por via subcutânea) quando utilizando camundongos 3,5,6,9. </li><li> Em ratos anestesiados, a temperatura do corpo é constantemente monitorizado e mantido a 36,5 ° C ± 0,2 ° C por meio de uma sonda de temperatura e uma lâmpada de aquecimento. </li><li> A configuração é calibrado antes de cada experiência de acordo com as instruções dos fabricantes. </li><li> O cateter de implante é ligado por um topo luer a uma torneira de 3 vias, que está ligado ao transdutor de pressão (Edwards Lifesciences) de um lado e uma bomba de perfusão, por outro (Harvard Apparatus). O transdutor de pressão é ligado através de um amplificador (78534c monitor, Hewlett Packard) com o sistema de aquisição de dados (DI-730-USB, Dataq instrumentos) e um co-mputer. Windaq / Lite software pode ser utilizado para gravação. </li><li> A bomba de infusão é iniciado, permitindo a infusão de solução salina ou PBS a, por exemplo, 100 ul / min (em ratos) ou 20 ^ L / min (em ratos). Como tal a bexiga será preenchida a uma velocidade constante, enquanto a pressão intravesical é gravado. </li><li> A Figura 5 representa um traço típico de pressão: durante a infusão de fluidos, existe uma acumulação de pressão lento na bexiga, até um certo volume / pressão é alcançada, o limiar de micturição. Uma vez que esse limite for atingido, a bexiga e, posteriormente, irão contrair o esfíncter urinário se abre, permitindo a passagem da urina através da uretra. Como tal, a bexiga é esvaziada, a contracção irá parar e a pressão irá cair de novo para o nível &quot;basal&quot;. </li><li> À medida que o rato é colocado numa gaiola metabólica e, acima de uma balança digital, do volume vazio pode ser medido ao mesmo tempo, dando informações sobre o volume vazio. Devido às pequenas quantidades anuladas em milhasce, pode ser muito difícil usar este sistema. Portanto, o volume anulada é determinada utilizando pequenos filtros de papel pesado antes e após a micção. </li><li> Tipicamente, é permitir que o sistema equilibrar durante 30 min, seguido de um período de registo de 30 minutos. Em seguida, a droga pode ser administrada sistemicamente ou intravesical e mais 30 min são gravadas. </li><li> Os dados gravados podem ser exportados como arquivos. CSV que podem ser importados para um software especializado para análise quantitativa. Normalmente usamos Origem (Origin Corporation, MA, EUA). </li><li> Depois de experiências, os animais são sacrificados por deslocamento cervical (ratos) ou intoxicação CO 2 (ratos). </li></ol> 5. Resultados representativos <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig1.jpg" /> Figura 1. Visão geral laparotomia. A) Coloque o rato na posição supina. B) Shave e antiseptically preparar o local da cirurgia. Incisão C) da pele. D) Incisão of os músculos abdominais, e exposição da bexiga. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig2.jpg" /> Figura 2. Uma sutura em bolsa. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig3.jpg" /> Figura 3. Implantação do cateter. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig4.jpg" /> Figura 4. Escavação de túneis do cateter. Exemplos de medidas da pressão intravesical obtidos durante a perfusão de uma solução salina em ratos conscientes e um rato anestesiado são mostrados na Figura 5. Vários parâmetros podem ser extraídos a partir do sinal de pressão (por exemplo, o intervalo de intercontractile, a pressão de linha de base e a pressão de limiar). Para descrições completas desses parâmetros, consulte Andersson et al. (Ref 4) e Yoshiyama et al. (<html> ref 10). Nós temos utilizado recentemente cistometria para identificar os alvos moleculares de óleo de mostarda (MO), um composto muito reactivo que tem sido muito utilizada em modelos experimentais de inflamação e a hiperalgesia de órgãos viscerais, como a bexiga urinária 11,12. Infusão intravesical de 10 mM PB induziu um forte aumento da frequência de micção (diminuição do intervalo intercontractile) em ratinhos do tipo selvagem (Figura 6A, B) e uma diminuição do volume vazio 6. Curiosamente, MO induziu alterações semelhantes em ratos deficientes do receptor de MO TRPA1. Em contraste, MO induziu alterações muito mais fracos em parâmetros cistométricos em ratinhos KO TRPV1 que em ratinhos WT e não tinha qualquer efeito nos ratinhos KO Trpa1/Trpv1. Juntamente com as medições de libertação do gene da calcitonina Related Peptide (CGRP), 6, estes dados indicam que demonstram TRPV1 pode desempenhar um papel-chave na irritação visceral induzida por MO. ve_content &quot;&gt; <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig5.jpg" /> Figura 5. Traços representativos de pressão intravesical registados num rato consciente fêmea (A) e num rato anestesiado fêmea (B). A menor pressão é definida como a &quot;pressão de linha de base&quot; (setas vermelhas). A pressão no final da fase de enchimento é marcada com setas azuis. O volume de fluido administrado entre estes pontos, dividida pela diferença de pressão, permite o cálculo da complacência da parede da bexiga (compliance = infusão volume / (pressão limite -. Pressão de linha de base) O &quot;intervalo intercontractile&quot; (ICI) é o tempo entre duas contrações micção. <img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/3869/3869fig6.jpg" /> Figura 6. Efeitos da aplicação intravesical de óleo de mostarda sobre o padrão de cistometria no tipo selvagem e camundongos knockout TRPA1, TRPV1 e Trpa1/Trpv1.(A) Os exemplos representativos de mudanças na pressão intravesical gravados no WT, KO TRPA1, KO TRPV1 e ratinhos KO Trpa1/Trpv1 em resposta à infusão de solução salina e 10 mM MO. (B) Tempo de decurso da frequência de micção instantâneo médio antes e durante a infusão intravesical de MO. Para todos os ratinhos, os dados foram normalizados para a frequência média obtida durante a infusão de solução salina. Estes dados são adaptados a partir de Everaerts et al. (Ref 6), com a permissão da Elsevier.

<ol><li>Everaerts, W., Gevaert, T., Nilius, B., De Ridder, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+origin+of+bladder+sensing%3A+Tr%28i%29ps+in+urology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol.+Urodyn%22%5BJournal%5D)">On the origin of bladder sensing: Tr(i)ps in urology.</a> Neurourol. Urodyn. 27, 264-2673 (2008).</li>
<li>Fry, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+and+their+use+in+understanding+lower+urinary+tract+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol.+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Animal models and their use in understanding lower urinary tract dysfunction.</a> Neurourol. Urodyn. 29, 603-608 (2010).</li>
<li>Gevaert, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+the+transient+receptor+potential+cation+channel+TRPV4+impairs+murine+bladder+voiding%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Deletion of the transient receptor potential cation channel TRPV4 impairs murine bladder voiding.</a> J. Clin. Invest. 117, 3453-3462 (2007).</li>
<li>Andersson, K. E., Soler, R., Fullhase, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+urodynamic+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol.+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Rodent models for urodynamic investigation.</a> Neurourol. Urodyn. 30, 636-646 (2011).</li>
<li>Everaerts, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+the+cation+channel+TRPV4+improves+bladder+function+in+mice+and+rats+with+cyclophosphamide-induced+cystitis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Inhibition of the cation channel TRPV4 improves bladder function in mice and rats with cyclophosphamide-induced cystitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 19084-19089 (2010).</li>
<li>Everaerts, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+capsaicin+receptor+TRPV1+is+a+crucial+mediator+of+the+noxious+effects+of+mustard+oil%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">The capsaicin receptor TRPV1 is a crucial mediator of the noxious effects of mustard oil.</a> Curr. Biol. 21, 316-321 (2011).</li>
<li>Yoshiyama, M., Roppolo, J. R., Thor, K. B., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+LY274614%2C+a+competitive+NMDA+receptor+antagonist%2C+on+the+micturition+reflex+in+the+urethane-anaesthetized+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of LY274614, a competitive NMDA receptor antagonist, on the micturition reflex in the urethane-anaesthetized rat.</a> Br. J. Pharmacol. 110, 77-86 (1993).</li>
<li>Yoshiyama, M., Roppolo, J. R., de Groat, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+MK-801+on+the+micturition+reflex+in+the+rat--possible+sites+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Effects of MK-801 on the micturition reflex in the rat--possible sites of action.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 265, 844-850 (1993).</li>
<li>Boudes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+Characterization+of+a+Chronic+Cyclophosphamide-Induced+Overactive+Bladder+Model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol.+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Functional Characterization of a Chronic Cyclophosphamide-Induced Overactive Bladder Model in mice.</a> Neurourol. Urodyn. , (2011).</li>
<li>Yoshiyama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex-related+differences+in+activity+of+lower+urinary+tract+in+response+to+intravesical+acid+irritation+in+decerebrate+unanesthetized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Sex-related differences in activity of lower urinary tract in response to intravesical acid irritation in decerebrate unanesthetized mice.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 295, R954-R960 (2008).</li>
<li>McMahon, S. B., Abel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+the+study+of+visceral+pain+states%3A+chronic+inflammation+of+the+chronic+decerebrate+rat+urinary+bladder+by+irritant+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A model for the study of visceral pain states: chronic inflammation of the chronic decerebrate rat urinary bladder by irritant chemicals.</a> Pain. 28, 109-127 (1987).</li>
<li>Du, S., Araki, I., Yoshiyama, M., Nomura, T., Takeda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+receptor+potential+channel+A1+involved+in+sensory+transduction+of+rat+urinary+bladder+through+C-fiber+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Transient receptor potential channel A1 involved in sensory transduction of rat urinary bladder through C-fiber pathway.</a> Urology. 70, 826-831 (2007).</li>
<li>Streng, T., Santti, R., Talo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Similarities+and+differences+in+female+and+male+rat+voiding%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol.+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Similarities and differences in female and male rat voiding.</a> Neurourol. Urodyn. 21, 136-141 (2002).</li>
<li>Igawa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystometric+findings+in+mice+lacking+muscarinic+M2+or+M3+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Cystometric findings in mice lacking muscarinic M2 or M3 receptors.</a> J. Urol. 172, 2460-2464 (2004).</li>
<li>Schroder, A., Newgreen, D., Andersson, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detrusor+responses+to+prostaglandin+E2+and+bladder+outlet+obstruction+in+wild-type+and+Ep1+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Detrusor responses to prostaglandin E2 and bladder outlet obstruction in wild-type and Ep1 receptor knockout mice.</a> J. Urol. 172, 1166-1170 (2004).</li>
<li>Chen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+lower+urinary+tract+in+mice+lacking+alpha1d-adrenoceptor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Function of the lower urinary tract in mice lacking alpha1d-adrenoceptor.</a> J. Urol. 174, 370-374 (2005).</li>
<li>May, V., Vizzard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bladder+dysfunction+and+altered+somatic+sensitivity+in+PACAP-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Bladder dysfunction and altered somatic sensitivity in PACAP-/- mice.</a> J. Urol. 183, 772-779 (2010).</li>
<li>Thorneloe, K. S., Meredith, A. L., Knorn, A. M., Aldrich, R. W., Nelson, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urodynamic+properties+and+neurotransmitter+dependence+of+urinary+bladder+contractility+in+the+BK+channel+deletion+model+of+overactive+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Renal.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Urodynamic properties and neurotransmitter dependence of urinary bladder contractility in the BK channel deletion model of overactive bladder.</a> Am. J. Physiol. Renal. Physiol. 289, 604-610 (2005).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

A técnica aqui apresentada permite cistometria realizar as medições in vivo da função da bexiga em modelos animais. Os ratos são, provavelmente, o modelo animal mais utilizado. Os ratinhos são mais difíceis de manusear, mas oferece a vantagem de utilizar animais geneticamente manipulados. Por causa da dificuldade técnica de usar ratos conscientes, que tendem a ser muito ativos, resultando em afrouxamento do cateter implantado e alterações nas pressões intra-abdominais que podem influenciar a pressão in...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Nome comercial, a empresa, </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> uretano </td><td> Uretano, Sigma-Aldrich </td><td> 315419 </td><td> grupo 2B cancerígena </td></tr><tr><td> isoflurano </td><td> Isoba, Saúde Animal Schering-Plough </td><td></td><td></td></tr><tr><td> cateter de polietileno </td><td> Intramedic tubagem de polietileno PE50, Becton Dickinson </td><td> 427411 </td><td></td></tr><tr><td> microscópio cirúrgico </td><td> Op-Mi 6, Carl Zeiss </td><td> Op-Mi 6 </td><td></td></tr><tr><td> bolsa-corda sutura </td><td> Prolene 6/0, Ethicon </td><td> 8610H </td><td></td></tr><tr><td> fáscia e sutura da pele </td><td> Ethilon 4/0 e 5/0, Ethicon </td><td> 662G ou 661G </td><td></td></tr><tr><td> analgésicos no pós-operatório </td><td> Temgesic, Saúde Animal Schering-Plough </td><td></td><td> dosagem para ratos: 0,05 mg / kg </td></tr><tr><td> amplificador </td><td> 78534c monitor, Hewlett Packard </td><td></td><td></td></tr><tr><td> balanças analíticas e equilíbrio de software de aquisição de dados </td><td> FZ 300i, A &amp; D </td><td> FZ-300i </td><td></td></tr><tr><td> bombas de infusão </td><td> bomba 33, Harvard Apparatus </td><td> HA33 </td><td></td></tr><tr><td> sistema de gravação cistometria </td><td> Instrumentos Dataq, DI-730 e série Windaq / Lite </td><td> DI-730-USB Windaq / Lite </td><td></td></tr><tr><td> Registro de temperatura </td><td> Fluke 52 KJ termômetro </td><td> 52 KJ </td><td></td></tr><tr><td> transdutores de pressão </td><td> Edwards Lifesciences, conjunto de monitoramento de pressão </td><td> T322247A </td><td></td></tr></tbody></table>

o uso de cistometria em pequenos roedores: um estudo de chemosensation bexiga

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

<p class="jove_content"&gt; As trato urinário inferior (LUT) funciona como um reservatório dinâmico que é capaz de armazenar e urina de forma eficiente expeli-lo em um momento conveniente. Embora o armazenamento da urina, no entanto, a bexiga é exposta por períodos prolongados em produtos residuais. Ao agir como uma barreira forte, o revestimento epitelial da LUT, o urotélio, evita re-absorção de substâncias nocivas. Além disso, os produtos químicos nocivos estimular inervação nociceptiva da bexiga e iniciar a micção contrações que expelem conteúdo da bexiga. É interessante notar que a sensibilidade da bexiga para produtos químicos nocivos tem sido utilizado com sucesso na prática clínica, por infusão intravesical a capsaicina agonista TRPV1 para tratar hiperactividade da bexiga neurogénica<sup&gt; 1</sup&gt;. Isso ressalta a vantagem de ver a bexiga como um órgão chemosensory e pede para a investigação clínica adicional. No entanto, questões éticas limitam seriamente as possibilidades de realizar, em seres humanos, as medidas invasivas que são necessários para desvendar as bases moleculares da farmacologia clínica LUT. Uma forma de ultrapassar esta limitação é a utilização de vários modelos animais<sup&gt; 2</sup&gt;. Aqui descreve-se a aplicação de cistometria em ratinhos e ratos, uma técnica que permite a medição da pressão intravesical, em condições de perfusão controlada bexiga.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; Após laparotomia, um cateter é implantado na cúpula da bexiga e encapsulado por via subcutânea na região interescapular. Em seguida, a bexiga pode ser enchido a uma velocidade controlada, ao passo que a uretra é deixado livre para a micção. Durante os ciclos repetitivos de enchimento e esvaziamento, a pressão intravesical pode ser medida através do cateter implantado. Como tal, as variações de pressão podem ser quantificados e analisados. Além disso, a medição simultânea do volume anulado permite distinguir contrações esvaziamento de não esvaziamento contrações<sup&gt; 3</sup&gt;.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; Importante, devido às diferenças no controlo da micção entre roedores e humanos, as medições cistométrica nestes animais tem apenas um valor limitado de translação<sup&gt; 4</sup&gt;. No entanto, eles são muito instrumental no estudo da fisiopatologia da bexiga e em farmacologia pré-clínicos experimentais configurações. Uma pesquisa recente usando esta técnica revelou o papel chave das novas jogadores molecular nas propriedades mecânico-químico-sensoriais e da bexiga.</p

Cistometria é uma técnica eficiente para medir a função da bexiga em animais de pequeno porte<em&gt; In vivo</em&gt;. A bexiga é infundida continuamente a taxas controladas por meio de um cateter intravesical, ao passo que a uretra é deixado livre para a micção. Isto permite a repetição de enchimento e esvaziamento da bexiga, enquanto a pressão intravesical e volume vazio são gravadas.

O Uso de cistometria em pequenos roedores: Um Estudo de Chemosensation Bexiga

O trato urinário inferior (TUI) funciona como um reservatório dinâmico que é capaz de armazenar a urina e de expulsá-la eficientemente em um momento oportuno. Enquanto...

O objetivo deste procedimento é determinar a influência de compostos químicos sobre as funções de armazenamento e esvaziamento da bexiga. Isso é realizado primeiramente implantando-se um cateter na bexiga. Após um breve período de recuperação, uma solução controle é infundida pelo cateter durante 30 minutos.À medida que a pressão intravesical e o volume urinário são registrados ao longo de mais 30 minutos, o animal recebe infusão de um composto de interesse. Em última análise, os resultados podem demonstrar como substâncias irritantes também afetam o padrão de micção por meio da análise da frequência miccional. A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos existentes, como o registro da contratilidade da bexiga isolada, é que a função deste órgão pode ser estudada em condições mais fisiológicas.Por exemplo, as ações regulatórias do sistema nervoso central são preservadas. A demonstração visual deste método é fundamental, pois os passos cirúrgicos são difíceis de aprender, já que há uma série de detalhes técnicos e manobras que devem ser observados para garantir o sucesso do experimento. Para preparar o tubo que você deseja implantar na bexiga primeiro, corte um tubo PE 50 no comprimento desejado e coloque um pequeno pedaço branco de cateter de 18 gauge sobre o cateter principal.Em seguida, crie uma pequena alça na extremidade aquecendo uma das pontas do tubo com chama e lave-a com solução salina para eliminar qualquer ar. Agora, induza anestesia em uma rata fêmea de 10 a 12 semanas de idade com isoflurano. Após a indução da anestesia, ajuste o nível de manutenção do isoflurano.Posicione o animal em decúbito dorsal e coloque uma pequena máscara de anestesia feita a partir de uma seringa de 10 cc. Após a depilação do abdômen e a desinfecção da derme, prossiga com a cirurgia. A cirurgia a seguir é realizada tanto em ratos quanto em camundongos da mesma maneira.Inicie realizando uma laparotomia mediana inferior para expor a bexiga. Em seguida, começa a parte mais crítica da cirurgia. Sob microscópio cirúrgico, posicione um ponto em bolsa de retalho no domo da bexiga utilizando fio monofilamento não absorvível 6-0.Em seguida, utilizando uma agulha, realize uma pequena cistostomia dentro do ponto de sutura em bolsa de tabaco. Insira o cateter com manguito PE 50 através desse orifício. Tubos cateterizados mais finos, como o PE 10, podem apresentar uma resistência maior e mais variável, portanto não são recomendados.Fixe o ponto de bolsa ao redor do tubo usando um nó cirúrgico. Em seguida, puxe suavemente o cateter para fora até que a ponta com manguito esteja diretamente sob a sutura. O segmento do cateter de calibre 18 é empurrado em direção à sutura para evitar vazamentos.Verifique se há vazamentos entre o cateter e a bexiga. Com uma infusão suave de solução salina, aperte quaisquer vazamentos com pontos adicionais.Agora, feche os músculos abdominais usando suturas de monofilamento, deixando uma passagem para o cateter na parte superior da incisão. Passe o cateter até a região interescapular utilizando uma haste metálica oca, evitando assim que os animais mordam o tubo. Após a cirurgia, a haste metálica deve ser posicionada sob a pele e acima dos músculos abdominais e dorsais.Insira a haste subcutaneamente até a região interescapular do animal. Complete a cirurgia fechando os músculos abdominais e a pele com suturas monofilamentares não absorvíveis. Agora é muito importante verificar a permeabilidade e a estabilidade do cateter implantado, lavando-o com solução salina.A solução de infusão deve sair da bexiga, percorrendo a uretra. Após administrar o analgésico por via subcutânea, feche a extremidade externa do cateter com uma película plástica e fixe o cateter à pele da região lombar do rato. Por fim, permita que o animal se recupere por 30 minutos.Antes de iniciar a citometria, certifique-se de que os instrumentos foram devidamente calibrados. Coloque a rata em uma gaiola metabólica acima de um recipiente contendo óleo que repousa sobre uma balança digital. O próximo passo é conectar o cateter implantado a uma torneira de três vias por meio de uma cânula com conector tipo lure.A cânula deve ser conectada ao transdutor de pressão e a uma bomba de infusão. O transdutor de pressão está ainda conectado, por meio de um amplificador, ao sistema de aquisição de dados e a um computador que utiliza um software de acesso público para iniciar as medições de controle, acionando a bomba de infusão para infundir solução salina na bexiga. Durante um período de 30 minutos, a gaiola metabólica é suspensa sobre uma balança digital, que é usada para estimar o volume urinado pela rata. A pressão intravesical é registrada enquanto a bexiga se enche e esvazia. Na próxima etapa, os fármacos podem ser administrados por via sistêmica ou intravesical durante mais 30 minutos de coleta de dados. Quando o experimento for concluído, o animal deve ser sacrificado.Um traçado típico da pressão em um rato mostra que, durante a infusão do fluido, ocorre um acúmulo lento da pressão na bexiga até que um determinado limiar seja atingido. Então, a bexiga contrai e o esfíncter urinário se abre, permitindo a passagem da solução instilada através da uretra. Dessa forma, a bexiga é esvaziada.A contração irá parar e a pressão cairá novamente para o nível basal. Os dados coletados de um camundongo apresentam todas as mesmas características. A citometria foi utilizada para identificar os alvos moleculares do óleo de mostarda ou mo MO, um composto altamente reativo que há muito tempo tem sido usado em modelos experimentais de inflamação e hiperalgesia de órgãos viscerais, como a bexiga urinária.Como esperado, uma infusão intravesical de 10 milimolares de MO induziu uma forte diminuição no intervalo contrátil em camundongos selvagens. Curiosamente, camundongos deficientes do receptor de MO TRPA A um apresentaram um resultado semelhante ao dos tipos selvagens sob as mesmas condições. Em contraste, MO induziu uma alteração muito mais fraca nos parâmetros sistêmicos em um camundongo com o gene TRPV um eliminado do que em camundongos selvagens; os duplos nulificados para ambos TRPA um e TRPV um foram quase irresponsivos à dose de MO.Os dados sugerem que o TRP V1 pode desempenhar um papel fundamental na irritação visceral induzida pelo MO. A frequência média instantânea de micção antes e durante a infusão intravesical de MO apoia esses dados. A frequência média é relativa à infusão de solução salina.Ao realizar este procedimento, é importante garantir que o cateter permaneça firmemente fixado à bexiga, para que não haja vazamento da solução infundida para o abdômen. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como medir a pressão intravesical, o que envolve a implantação de um cateter na bexiga e a colocação de animais acordados ou anestesiados em uma plataforma de citometria sob perfusão controlada da bexiga.

the-use-cystometry-small-rodents-study-bladder

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Estádios cirúrgicos de aumento da bexiga são descritos utilizando 3-D andaimes em modelos murinos e de rato. Para testar a eficácia de configurações de biomateriais para utilização no aumento da bexiga, as técnicas para cistometria tanto acordado e anestesiados são apresentados.

Avaliação de Biomateriais para ampliação vesical utilizando análises cistométricos Em modelos de roedores Vários

Neste vídeo, descrevemos um procedimento baseado em cateter para esvaziar e enxaguar a bexiga urinária de um modelo de camundongo. O mouse preparado pode então ser usado para outros procedimentos experimentais.

Depleção de urina e enxágue da bexiga em modelo de camundongo: um procedimento baseado em cateter para esvaziar e lavar a bexiga urinária murina

Aproximadamente 3-8.000.000 de pessoas nos Estados Unidos sofrem de síndrome intersticial dor cistite / vesical (IC / BPS), uma condição debilitante caracterizada em parte pela dor pélvica. A fim de estudar as contribuições do sistema nervoso para a condição, um modelo fisiológico de dor na bexiga urinária é usado em ratinhos e ratos.

Respostas Bexiga Distensão Evocado Visceromotor como um modelo para Bexiga dor em camundongos

O modelo estabelecido de transuretral cateterismo de ratos permite o estudo das patologias de bexiga, incluindo a infecção do trato urinário, mas só pode ser realizado nas fêmeas. Um novo modelo de instilação transuretral masculino, apresentado aqui, permitirá a pesquisa em uma área marcada por fortes diferenças clínicas e epidemiológicas entre os sexos.

Infecção do trato urinário em um modelo Animal de pequeno porte: transuretral cateterismo de ratos machos e fêmeas

Este estudo descreve os procedimentos cirúrgicos e técnicas experimentais para realizar cistometria acordada em um mouse que se move livremente. Além disso, fornece evidências experimentais para apoiar sua otimização e padronização.

Avaliando o procedimento para realizar cistometria acordada em um modelo de mouse

Este protocolo descreve primeiramente o procedimento cirúrgico da implantação permanente de um cateter de bexiga urinária combinado com eletrodos de esfíncter uretral externo e segundo, a medição da função da bexiga urinária e externo uretral sphincter em animais acordados implantados.

Medições de esfíncter uretral Cystometric e externo em ratos acordados com cateter implantado e eletrodos permitindo medições repetidas

Nós descrevemos o uso do ultra-som de alta freqüência com imagem latente do contraste como um método para medir o volume da bexiga, a espessura de parede da bexiga, a velocidade da urina, o volume vago, a duração do vácuo, e o diâmetro uretral. Esta estratégia pode ser usada para avaliar a Disfunção miccional e a eficácia do tratamento em vários modelos de camundongo de disfunção do trato urinário inferior (LUTD).

Ultrassonografia do trato urinário masculino adulto para testes funcionais urinários

Este protocolo descreve o procedimento para medir as concentrações de ATP no lúmen da bexiga em um roedor anestesiado.

In vivo Medição Luminal da Liberação de ATP Urotelial Evocado por Distensão em Roedores

Este artigo descreve um novo método para estudar o comportamento miccional de camundongos incorporando o monitoramento de vídeo no ensaio convencional de ponto vazio. Essa abordagem fornece informações temporais, espaciais e volumétricas sobre os eventos miccionais e detalhes do comportamento do camundongo durante as fases clara e escura do dia.

Ensaio de ponto vazio em tempo real

Este protocolo fornece um guia para impermeabilizar a pele com cianoacrilato para evitar a absorção de urina pelo e pela pele. Inclui instruções para aplicar a cola na pele, implantar um cateter vesical e eletrodos para cistometria e registros de eletromiografia do esfíncter uretral externo em camundongos acordados.

Otimizando técnicas urodinâmicas de camundongos para maior precisão 

Aprenda a técnica de cistometria em pequenos roedores para avaliar a função vesical in vivo, medindo pressão intravesical e volume urinário. Este método permite estudar o enchimento e esvaziamento da bexiga em condições fisiológicas.

O Uso de cistometria em pequenos roedores: Um Estudo de Chemosensation Bexiga

Explorar mais vídeos