9 de agosto de 2012
Estádios cirúrgicos de aumento da bexiga são descritos utilizando 3-D andaimes em modelos murinos e de rato. Para testar a eficácia de configurações de biomateriais para utilização no aumento da bexiga, as técnicas para cistometria tanto acordado e anestesiados são apresentados.
O objetivo deste procedimento é avaliar o uso de biomateriais para aumento da bexiga por meio da aquisição de dados funcionais por citometria. Isso é realizado primeiramente anastomosando o suporte a um defeito criado na bexiga. O segundo passo do procedimento é o tunelamento do tubo de cistostomia até o abdômen.
O terceiro passo é posicionar o tubo de cistostomia na bexiga aumentada e fixá-lo no dorso do animal. O passo final é realizar a cistometria para avaliar a bexiga aumentada de um ponto de vista funcional. Em última análise, os resultados podem mostrar alterações na capacidade e complacência da bexiga, pressões de micção, tempos do ciclo nutricional e volumes residuais pós-miccionais por meio da cistometria consciente.
As implicações dessa técnica estendem-se à terapia de anomalias congênitas e adquiridas da bexiga ou da uretra que levam à capacidade, complacência e função geral prejudicadas da bexiga. Como os novos biomateriais utilizados para aumento da bexiga precisam ser avaliados funcionalmente, após preparar um animal para cirurgia abdominal, use um bisturi para fazer uma incisão mediana inferior através da pele.
Usando pinças dentadas, eleve o músculo reto e dissecione a superfície posterior do músculo com tesoura fina de Metzenbaum, dividindo o restante do músculo na linha média por todo o comprimento da incisão cutânea para exteriorizar a bexiga através da ferida cirúrgica. Uma vez por dia, passe a sutura através da parede posterior da bexiga e, em seguida, através da parede anterior da bexiga. Adicione suturas laterais na bexiga, mas não as amarre.
Quando os pontos são mantidos firmes, a bexiga terá uma configuração quadrada medindo aproximadamente um centímetro quadrado de tamanho, ao longo da bexiga através da parede anterior da bexiga, logo abaixo do domo da bexiga ao longo da linha média. Tenha cuidado para não aplicar muita tensão nesses pontos, pois eles podem facilmente ser puxados através do tecido da bexiga. Para esta etapa, a ampliação com lupa é preferida para a anastomose do suporte. Usando tesoura fina, corte o suporte de seda até a área aproximada do defeito da bexiga.
Inicie em um canto do suporte e suture-o à bexiga de forma contínua. Para criar um selamento impermeável ao redor de todo o defeito, é muito importante que o cirurgião realize uma anastomose impermeável e sem tensão entre o suporte e a bexiga. Isso garantirá a contenção de toda a urina no interior da bexiga, pois qualquer vazamento intraperitoneal provavelmente resultará em mortalidade animal.
Como teste, utilize uma agulha hipodérmica de calibre 30 para encher a bexiga com água. Se for detectado um vazamento, feche-o com um ponto separado adicional. Em seguida, reintroduza a bexiga reconstruída de volta no abdômen antes do fechamento da parede abdominal.
Injete o músculo reto e o tecido subcutâneo com bupivacaína para anestesia local e feche a incisão. Em seguida, use uma sutura contínua para reaproximar o músculo reto e feche a pele com uma sutura contínua. Após limpar e secar a incisão, transfira o animal para uma gaiola aquecida e limpa para despertar da anestesia.
Antes de começar, crie uma âncora na extremidade de um tubo PE 50 de 10 centímetros para que ele não escorregue para fora da bexiga. Faça isso alargando a extremidade do tubo, expondo-a suavemente à chama. Em segundo lugar, verifique se o tubo não está obstruído.
Injete a extremidade não alargada com soro fisiológico e certifique-se de que o líquido flua. Após preparar um animal para cirurgia, antes de expor a bexiga, faça uma incisão de um centímetro no dorso entre as escápulas. Usando a tesoura metson balm, desenvolva um plano entre a pele e o músculo subjacente.
Em seguida, posicione as pontas da tesoura no plano e abra-as para criar um túnel subcutâneo até o abdômen ventral. Depois, vire o animal do outro lado. Exponha e retorne a bexiga ao abdômen.
Retornando à incisão dorsal, posicione uma pequena pinça no túnel subcutâneo. Use os dedos para proteger o conteúdo intra-abdominal e, em seguida, utilize as pontas da pinça para perfurar a parede abdominal. Agora, segure a extremidade lisa do tubo alargado com a pinça e puxe-o de volta através da incisão dorsal.
Não puxe a extremidade alargada da âncora para além da parede abdominal com o tubo através da incisão. Coloque um ponto em bolsa de sutura na cúpula da bexiga. Deixe uma pequena pinça na extremidade solta da sutura para que ela não seja acidentalmente puxada através do ponto.
Além disso, não aperte o ponto de sutura. Agora, use uma agulha EU de calibre 18 para perfurar a parede da bexiga no centro do ponto de sutura em bolsa de seda, apenas o suficiente para ficar intraluminal. Em seguida, coloque a pinça fina na abertura e abra-a suavemente para alargar o orifício.
Insira a extremidade alargada do cateter no defeito da bexiga até que fique intraluminal. Aperte mais o ponto em bolsa de seda ao redor do cateter e dê o nó. Em seguida, enrole a ponta livre do fio ao redor do cateter uma vez e dê o nó.
Agora, teste a bexiga injetando lentamente soro fisiológico nela por meio do tubo. Se houver fluxo pela uretra, aspire o soro fisiológico para descomprimir a bexiga novamente. Caso seja detectado um vazamento, ele deve ser reparado com sutura, pois um vazamento urinário pode resultar em mortalidade.
Fechamento da incisão abdominal conforme demonstrado anteriormente. Em seguida, prossiga com o fechamento da incisão dorsal. O procedimento para fechamento da incisão dorsal é diferente para ratos e camundongos.
Para ratos, use uma tesoura para cortar o tubo do cateter ao nível da pele. Em seguida, insira uma agulha romba de calibre 22 no tubo. Use suturas contínuas para fechar a pele sobre o tubo, deixando o cubo da agulha exposto.
Agora coloque uma tampa de linha intravenosa na agulha romba e fixe a ponta do cateter à pele. Em seguida, limpe a incisão e permita que o animal se recupere em um ambiente aquecido. Em camundongos, o cateter deve ser fixado da seguinte maneira: deixe o cateter longo e oclua a extremidade do cateter derretendo-a com uma chama.
Enrole a extremidade do tubo e deixe-a no bolso subcutâneo no dorso do animal. Feche a pele sobre o tubo de forma contínua e corrida. Antes da análise citrica, permita pelo menos cinco a sete dias de recuperação pós-operatória para ratos ou camundongos.
Após a recuperação no dia da citometria. Para camundongos, é necessário primeiro abrir a incisão dorsal sob anestesia e remover o tubo serpentinado do bolso subcutâneo. Após a remoção do tubo, feche essa incisão e aguarde o camundongo despertar completamente da anestesia antes de realizar a citometria, começando pelo posicionamento dos animais em gaiolas metabólicas suspensas sobre balanças.
Agora acesse os cateteres suprapúbicos com uma agulha de 27 gauge conectada, por meio de um ttu, ao transdutor de pressão e à bomba de infusão. Inicie a infusão de solução salina fisiológica. Aguarde a estabilização do traçado do padrão de micção.
Nos próximos 10 a 20 minutos, a pressão da bexiga aumenta inicialmente, seguida por uma micção. Em seguida, registre os ciclos de micção por 15 a 120 minutos, ou pelo menos três ou quatro ciclos de micção durante o procedimento. Fique atento a dobramentos no cateter e outras complicações.
Os traçados urodinâmicos podem então ser analisados para derivar parâmetros como volumes evacuados, complacência, pressões máximas de micção durante a contração, intervalo, tempo do ciclo miccional e volumes residuais pós-micção. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como aumentar a bexiga usando qualquer biomaterial. Você também saberá como avaliar a função da bexiga de qualquer roedor utilizando cistometria consciente sem restrição.
Este artigo descreve as etapas cirúrgicas de aumento da bexiga utilizando escafandros tridimensionais em modelos murinos e de rato. A eficácia de configurações de biomateriais para aumento da bexiga é testada por meio de técnicas de cistometria em animais acordados e anestesiados.
A avaliação funcional de biomateriais para aumento da bexiga requer modelos animais padronizados e análise cistométrica para avaliar capacidade, complacência e dinâmica da micção. Essa abordagem permite a redução de riscos pré-clínicos de projetos de scaffolds ao associar propriedades estruturais a resultados funcionais antes de estudos em animais de grande porte ou ensaios clínicos. A metodologia apoia a validação de alvos na medicina regenerativa urológica, fornecendo leituras quantitativas e transponíveis para decisões de avançar ou interromper o desenvolvimento de biomateriais.
O método integra-se ao continuum de descoberta, desde a triagem inicial de biomateriais até a identificação de compostos líderes e a validação pré-clínica, fornecendo dados funcionais que orientam as decisões de avanço.