Name: Injeção do mouse parede da bexiga (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 48 s
Description: Aprenda a técnica microcirúrgica de injeção na parede da bexiga do camundongo para estudar células-tronco e biologia do câncer. Este método permite localização precisa das células implantadas.

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1. Injeção do mouse parede da bexiga Escolha da tensão do mouse, idade e sexo é ditada por necessidades experimental. Nós usamos ratos entre 8 e 12 semanas de idade, uma vez que esta é uma janela de maturidade imunológica antes de senescência. Como orientação geral, os ratos devem chegar pelo menos uma semana antes da manipulação experimental, a fim de evitar o stress induzido por fatores de confusão. <ol><li> Limpe a superfície da mesa cirúrgica com água e sabão. </li><li> Limpe a superfície da mesa cirúrgica com Swipes Cide ou toalhetes anti-séptico. </li><li> Autoclave instrumentos cirúrgicos limpos antes da sua utilização na cirurgia. </li><li> Além disso, esterilizar instrumentos cirúrgicos com esterilizador talão quente imediatamente antes do uso, bem como entre os animais durante a cirurgia. </li><li> 100 seringas limpas mL Hamilton e 29 ou 30 gauge (1 / 2 polegada de comprimento) agulhas por aspiração repetida e injeção com álcool absoluto antes da primeira utilização e, ao final do procedimento cirúrgico definitivo. </li><li> Lave e enxágüe com seringas esterilizadas Hamilton tampão fosfato entre cada animal. </li><li> Anestesiar ratos, colocando-os em uma câmara de indução isoflurano, com o conjunto de isoflurano entre 2-5%. </li><li> Uma vez que a anestesia geral é alcançado, retire o rato da câmara e coloque na posição supina com uma almofada debaixo quente para ajudar a manter a temperatura corporal normal. </li><li> Obter anestesia de manutenção, colocando o focinho do animal em um bocal contendo vaporizar isoflurano (titulado de 1-3%, conforme necessário para manter a anestesia apropriado). </li><li> Raspar a pele abdominal com clippers. </li><li> Use um descartáveis, cortina cirúrgica estéril para cobrir o ânus para evitar a contaminação fecal durante a cirurgia. </li><li> Use um segundo descartáveis, cortina cirúrgica estéril para cobrir o campo cirúrgico (abdome inferior). </li><li> Prep abdômen com três pedaços de Betadine-gaze. Repita este passo três vezes. </li><li> Usando um microscópio de dissecação para ampliação, faça uma menor incisão mediana abdominal com uma tesoura. </li><li> Expor a bexiga. </li><li> Se a bexiga está cheia, descompactá-lo parcialmente por uma pressão descendente suave na cúpula. </li><li> Injetar a solução de amostra (até 50 mL), usando uma agulha de calibre 29 ou 30 e seringa, na parede da cúpula da bexiga (injeção intramural), com o bisel da agulha voltado para cima. </li><li> Empurre o êmbolo da seringa para injetar a solução de amostra na parede da bexiga. A bolha bem localizada é uma indicação do sucesso de injeção das células na parede da bexiga. </li><li> Retire a seringa, fechar a incisão com grampos de sutura e permitir que o mouse para se recuperar em uma almofada de aquecimento. </li></ol> 2. Resultados representativos: A bolha bem localizada que não líquido de vazamento e permanece estável em tamanho é uma indicação do sucesso de injeção das células na parede da bexiga (Figura 1). Análise histológica pode ser realizada para confirmar a presença das células injetadas na parede da bexiga. <img src="/files/ftp_upload/2523/2523fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Exemplo de injeção de sucesso da parede da bexiga usando tinta nanquim para ilustração. <img src="/files/ftp_upload/2523/2523fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Esquemática de procedimentos experimentais.

<ol><li>Dinney, C. P., Fishbeck, R., Singh, R. K., Eve, B., Pathak, S., Brown, N., Xie, B., Fan, D., Bucana, C., Fidler, I. J., Killion, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Characterization+of+Metastatic+Variants+from+Human+Transitional+Cell+Carcinoma+Passaged+by+Orthotopic+Implantation+in+Athymic+Nude+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Urology%22%5BJournal%5D)">Isolation and Characterization of Metastatic Variants from Human Transitional Cell Carcinoma Passaged by Orthotopic Implantation in Athymic Nude Mice.</a> The Journal of Urology. 154, 1532-1538 (1995).</li>
<li>Singh, A. V., Franke, A. A., Blackburn, G. L., Zhou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soy+Phytochemicals+Prevent+Orthotopic+Growth+and+Metastasis+of+Bladder+Cancer+in+Mice+by+Alterations+of+Cancer+Cell+Proliferation+and+Apoptosis+and+Tumor+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Soy Phytochemicals Prevent Orthotopic Growth and Metastasis of Bladder Cancer in Mice by Alterations of Cancer Cell Proliferation and Apoptosis and Tumor Angiogenesis.</a> Cancer Res. 66, 1851-1858 (2006).</li>
<li>Yanagiuchi, A., Miyake, H., Nomi, M., Takenaka, A., Fujisawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+the+Microenvironment+by+Growth+Factors+Regulates+the+In+Vivo+Growth+of+Skeletal+Myoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Modulation of the Microenvironment by Growth Factors Regulates the In Vivo Growth of Skeletal Myoblasts.</a> BJU International. 103, 1569-1573 (2009).</li>
<li>Miyake, H., Hara, I., Yamanaka, K., Gohji, K., Arakawa, S., Kamidono, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+Bcl-2+Enhances+Metastatic+Potential+of+Human+Bladder+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Overexpression of Bcl-2 Enhances Metastatic Potential of Human Bladder Cancer Cells.</a> British Journal of Cancer. 79, 1651-1656 (1999).</li>
<li>Chancellor, M. B., Yokoyama, T., Tirney, S., Mattes, C. E., Ozawa, H., Yoshimura, N., Groat, W. C. de, Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preliminary+Results+of+Myoblast+Injection+into+the+Urethra+and+Bladder+Wall%3A+a+Possible+method+for+the+Treatment+of+Stress+Urinary+Incontinence+and+Impaired+Detrusor+Contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Neurourol+Urodyn%22%5BJournal%5D)">Preliminary Results of Myoblast Injection into the Urethra and Bladder Wall: a Possible method for the Treatment of Stress Urinary Incontinence and Impaired Detrusor Contractility.</a> Neurourol Urodyn. 19, 279-287 (2000).</li>
<li>Dinney, C. P., Tanguay, S., Bucana, C. D., Eve, B. Y., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravesical+Liposomal+Muramyl+Tripeptide+Phosphatidylethanolamine+Treatment+of+Human+Bladder+Carcinoma+Growing+in+Nude+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Interferon+Cytokine+Res%22%5BJournal%5D)">Intravesical Liposomal Muramyl Tripeptide Phosphatidylethanolamine Treatment of Human Bladder Carcinoma Growing in Nude Mice.</a> J Interferon Cytokine Res. 15, 585-592 (1995).</li>
<li>Mohamedali, K. A., Kedary, D., Sweeney, P., Kamaty, A., Davisy, D. W., Evey, B. Y., Huangy, S., Thorpez, P. E., Dinney, C. P., Rosenblum, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Vascular-targeting+Fusion+toxin+VEGF121%2FrGel+Inhibits+the+Growth+of+Orthotopic+Human+Bladder+Carcinoma+Tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">The Vascular-targeting Fusion toxin VEGF121/rGel Inhibits the Growth of Orthotopic Human Bladder Carcinoma Tumors.</a> Neoplasia. 7, 912-920 (2005).</li>
<li>Slaton, J. W., Perrotte, P., Inoue, K., Dinney, C. P., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-%CE%B1-mediated+Down-Regulation+of+Angiogenesis-related+Genes+and+Therapy+of+Bladder+Cancer+Are+Dependent+on+Optimization+of+Biological+Dose+and+Schedule%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Interferon-α-mediated Down-Regulation of Angiogenesis-related Genes and Therapy of Bladder Cancer Are Dependent on Optimization of Biological Dose and Schedule.</a> Clinical Cancer Research. 5, 2726-2734 (1999).</li>
<li>Yokoyama, T., Huard, J., Pruchnic, R., Yoshimura, N., Qu, Z., Cao, B., De Groat, W. C., Kumon, H., Chancellor, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle-Derived+Cell+Transplantation+and+Differentiation+into+Lower+Urinary+Tract+Smooth+Muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Muscle-Derived Cell Transplantation and Differentiation into Lower Urinary Tract Smooth Muscle.</a> Urology. 57, 826-831 (2001).</li>
<li>Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Orthotopic+Models+for+Bladder+Cancer+Research%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">Mouse Orthotopic Models for Bladder Cancer Research.</a> BJU International. 104, 1286-1291 (1988).</li>
<li>Russell, P. J., Jelbart, M., Wills, E., Singh, S., Wass, J., Witherspoon, J., Raghavan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+a+new+human+bladder+cancer+cell+line+showing+features+of+squamous+and+glandular+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of a new human bladder cancer cell line showing features of squamous and glandular differentiation.</a> Int. J. Cancer. 41, 74-74 (1988).</li>
<li>Ahlering, T. E., Dubeau, L., Jones, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+in+vivo+model+to+study+invasion+and+metastasis+of+human+bladder+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A new in vivo model to study invasion and metastasis of human bladder carcinoma.</a> Cancer Res. 41, 6660-6660 (1987).</li>
<li>Heaney, J. A., Omellas, E. P., Daly, J. J., Lin, J. C., Rout, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+growth+of+human+bladder+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Urol%22%5BJournal%5D)">In vivo growth of human bladder cancer cell lines.</a> Invest. Urol. 15, 380-380 (1978).</li>
<li>Hadaschik, B., Black, P., Sea, J., Metwalli, A., Fazli, L., Dinney, C., Gleave, M., So, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+mouse+model+for+orthotopic+bladder+cancer+using+transurethral+tumor+inoculation+and+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+International%22%5BJournal%5D)">A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumor inoculation and bioluminescence imaging.</a> BJU International. 100, 1377-1384 (2007).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Rato injeção parede da bexiga permite a implantação de células específicas em áreas definidas da parede da bexiga. Esta técnica tem amplas aplicações para os modelos do rato do cancro da bexiga, o músculo liso, e biologia das células estaminais. Por definição, mouse injeção de parede da bexiga facilita a introdução de câncer de bexiga ou de células-tronco em um local ortotópico assim que o seu crescimento e diferenciação pode ser estudado em um contexto fisiologicamente relevantes anatômicas. Na verdade, Dinney et al. d...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Isoflurano (Aerrane) </td><td> Baxter </td><td> NDC 10019-773-60 </td></tr><tr><td> 29 ou 30 agulhas </td><td> Hamilton </td><td> 7803-06 ou 7803-07 </td></tr><tr><td> 100 seringa microlitro </td><td> Hamilton </td><td> 7656-01 </td></tr></tbody></table>

injeção do mouse parede da bexiga

Mouse Bladder Wall Injection

Rato injeção parede da bexiga é uma técnica útil para estudar fenômenos ortotopicamente bexiga, incluindo células-tronco, o músculo liso, e biologia do câncer. Antes de iniciar as injeções, a área cirúrgica deve ser limpa com água e sabão e solução anti-séptica. Equipamentos cirúrgicos devem ser esterilizadas antes do uso e entre cada animal. Cada rato é colocado sob anestesia isoflurano inalado (2-5% para a indução, 1-3% para manutenção) e sua bexiga exposta, fazendo uma incisão mediana abdominal com uma tesoura. Se a bexiga está cheia, é parcialmente descompactado pelo gentil espremendo entre dois dedos. A suspensão de células de interesse é intramurally injetado na parede da cúpula da bexiga usando uma agulha de calibre 29 ou 30 e 1 cc ou menor seringa. A ferida é então fechada com grampos de sutura eo mouse permitiu recuperar em uma almofada de aquecimento. Injeção de parede da bexiga é uma técnica de microcirurgia delicada que pode ser dominada com a prática.

Rato injeção parede da bexiga é uma abordagem útil para estudo de células da bexiga ortotopicamente-tronco e biologia do câncer. Este método de microcirurgia delicada pode ser dominada com técnica cuidadosa e prática.

Injeção do mouse parede da bexiga

A injeção na parede da bexiga de camundongos é uma técnica útil para estudar fenômenos vesicais ortotopicamente, incluindo a biologia de células-tronco, do músculo liso e do câncer. ...

O objetivo geral deste procedimento é introduzir células em áreas definidas da parede da bexiga. Isso é realizado primeiramente fazendo uma incisão abdominal para expor a bexiga. O próximo passo do procedimento é inserir o bisel da agulha intramuralmente.O passo final do procedimento é empurrar o êmbolo da seringa para injetar as células de interesse na parede da bexiga. O implante bem-sucedido das células é indicado por uma bolha bem localizada que não apresenta vazamento de líquido e mantém o tamanho estável. A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos existentes, como a inoculação transuretral de camundongos com células, é que ela permite direcionar onde as células irão se implantar dentro da bexiga.A demonstração visual do músculo li é fundamental, pois os pontos de injeção são difíceis de aprender. Conhecer o ângulo correto e a posição de entrada da agulha na bexiga é essencial para o sucesso da técnica. Selecione a idade, o sexo e a linhagem dos camundongos com base nas necessidades do experimento aqui.Utilizam-se camundongos com idade entre oito e doze semanas para iniciar a limpeza da superfície da mesa cirúrgica com sabão e água. Em seguida, limpe a superfíci

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